Histological changes, distributions and relative frequencies of bovine Sp-1/chromogranin (bCG)-, serotonin-, gastrin-, cholecystokinin-8(CCK-8)-, somatostatin-, S-100 protein-, polypeptide YY(PYY)- and glucagon-immunoreactive cells were investigated in the gizzard and pylorus of the chicken embryos from 10 days of incubation to hatching. Histologically, the pseudostratified columnar epithelium were observed from 10 days of incubation to 15 days of incubation, thereafter these epithelium were differentiated to simple columnar epithelium, gastric gland and/or mucosal gland. In the gizzard, bCG-immunoreactive cells were observed from 19 days of incubation and S-100 protein-immunoreactive cells were detected from 15 days of incubation to 18 days of incubation. No serotonin-, gastrin-, CCK-8-, somatostatin-, PYY- and glucagon-immunoreactive cells were found in this region. In the pylorus, bCG-, gastrin- and somatostatin-immunoreactive cells were observed from 16 days of incubation respectively, thereafter these cells were increased with ages. CCK-8-immunoreactive cells were detected on hatching and S-100 protein-immunoreactive cells were detected from 16 days of incubation to 18 days of incubation. No serotonin-, PYY- and glucagon-immunoreactive cells were observed in this region.
Purpose Alpha fetoprotein(AFP) is a fetal serum protein that increases in germ cell tumors derived from liver cancer or egg yolk. AFP test has been used for screening of liver cancer, determination of tumor stage, determination of therapeutic effect, and fetal congenital malformations. The purpose of this study was to compare the results of the four kits, identify the advantages and disadvantages of each kit, and select the appropriate kits for our laboratory. Materials and Methods Blood samples were obtained from 89 patients attending the Seoul national university hospital. Experiments were carried out in accordance with manufacturer's instructions of four companies(A, B, C, D). The precision, recovery, linearity, and sensitivity test were performed for each kit. Results In case of the precision within the measurement, the CV value of the C kit was less than 5% at the low, middle, and high concentrations. The A, B and D kit's the CV value was less than 5% at the concentrations except the low concentration. The recovery rates of the A, B, C, and D kits were $100{\pm}15%$, $100{\pm}30%$, $100{\pm}16%$ and $100{\pm}14%$, respectively. All kits showed good linearity. Sensitivity was measured as 0.5 IU/mL for A, 0.4 IU/mL for B, 0.98 IU/mL for C, and 0.3 IU/mL for D. Conclusion The CV values of the four kits were within 10%, and the correlation coefficients were close to 1 for $R^2=0.978$, $R^2=0.992$ and $R^2=0.8957$. As a result, they are clinically available. Therefore, each laboratory should select the appropriate kit for their experiment's environment.
Soybean oil and protein contents are very important as a nutritional component of food. The seed composition as oil and protein are polygenic traits. In this study, the Keunolkong${\times}$Iksan10 populations were evaluated with SSR markers to identify QTLs related to oil and protein contents. Three related independent QTLs near the marker satt100 on LG C2, satt546 on LG D1b+W and satt418 on LG L were identified oil contents. The three independent QTLs near the marker satt556 on LG B2, satt414 on LG J and satt238 on LC L were identified of protein contents. In the results of this study, common QTLs on LG L was associated with seed oil and protein contents. In the result of this study, it is believed that the seed composition material as oil and protein contents were mainly controlled by environmental stresses and they are seed size on genotypes.
S100A8 functions as an essential factor in inflammatory response. Cytokine release of monocytes and regulation of neutrophil apoptosis are important steps in pathogenesis of allergy. This study aims to examine the relation between cytokine release of monocytes due to S100A8 and neutrophil apoptosis. S100A8 enhanced the release of IL-6 and IL-8 in monocytes of normal and allergic subjects. Treatment of supernatants of normal and allergic monocytes with S100A8 blocked neutrophil apoptosis by inhibition of caspase 9 and caspase 3 activation. The secretion signal induced by S100A8 is involved in TLR4, Src family protein, PKCδ, ERK1/2, p38 MAPK, JNK, and NF-κB. These findings may contribute to understanding the complex pathogenesis of allergic diseases by determining inflammatory responses associated with S100A8, monocytes, and neutrophils.
A modification of a microbiological assay of vitamin $B_{12}$ was made and used to determine the vitamin levels during kimchi fermentation. A cyanide-buffer solution of pH 6.0 replaced the metabisufite-buffer specified in the A.O.A.C. method. The vitamin $B_{12}$ activity was decreased by blending kimchi samples for 5 minutes and retained the activity by steaming for 10 minutes before blending. The alkali hydrolysis of kimchi at pH 12.0 for 30 minutes at $121^{\circ}C$ was sufficient to destroy the vitamin $B_{12}$ and permit the detection of analogs with the same assay organism. Vitamin $B_{12}$ reached a maximum of 47ng/100g during the fermentation of kimchi ${15}\;4^{\circ}C.$ Inoculation of the kimchi with Propionibacterium shermanii (ATCC 13673) increased the vitamin production to a maximum of 102ng/100g at 1 week of fermentation. Soy flour (0.5%) or beef extract (0.05%), which were regarded as protein sources, added to the inoculated kimchi further increased the vitamin $B_{12}$ activity to 197 and 203ng/100g.
Plastichouse cultivation for crops and vegetables in the winter has been widely popularized in Korea. In the vinylhouse Ultraviolet B penetration is lower than in the field, and so some problems, as plant overgrowth and outbreak of disease, occurred frequently. The effect of artificial supplement ultraviolet B $(UV-B:280{\sim}320nm)$ radiation on the physiological responses and yield of perilla (perilla frutescens) was investigated UV-B ray was radiated on perilla with the 10th leaf stage at the distance of 90, 120 and 150 cm from the plant canopy for 30 days after planting in the vinylhouse. The production of fresh perilla leaves was high in the order of plastic house, ambient+50% of supplemental UV-B, ambient ambient+100% of supplemental UV-B. Enhanced UV-B radiation affected the intensity of thirty-three proteins in 2-dimensional electrophoretic analysis of proteins and ten proteins out of them seemed to be responsive to UV-B : a protein was, ATP synthase CF1 alpha chain, down regulated and nine proteins (Chlorophyll a/b bindng protein type I, Chlorophyll a/b binding protein type II precursor, Photosystem I P700 chlorophyll a apoprotein A2, DNA recombination and repair protein recF, Galactinol synthase, S-adenosyl-L-methionine, Heat shock protein 21, Calcium-dependent protein kinase(CDPK)-like, Catalase) were up-regulated.
Viral surface proteins are known to play an essential role in attachment of the virus particle to the host cell membrane. In case of the hepatitis B virus (HBV) several reports have described potential receptors on the target cell side, but no definite receptor protein has been isolated yet. As for the viral side, it has been suggested that the preS region of the envelope protein, especially the preS1 region, is involved in binding of HBV to the host cell. In this study, preS1 region was recombinantly expressed in the form of a maltose binding protein (MBP) fusion protein and used to identify and visualize the expression of putative HBV receptor(s) on the host cell. Using laser scanned confocal microscopy and by FACS analysis, MBP-preS1 proteins were shown to bind to the human hepatoma cell line HepG2 in a receptor-ligand specific manner. The binding kinetic of MBP-preS1 to its cellular receptor was shown to be temperature and time dependent. In cells permeabilized with Triton X-100 and treated with the fusion protein, a specific staining of the nuclear membrane could be observed. To determine the precise location of the receptor binding site within the preS1 region, several short overlapping peptides from this region were synthesized and used in a competition assay. In this way the receptor binding epitope in preS1 was revealed to be amino acid residues 27 to 51, which is in agreement with previous reports. These results confirm the significance of the preS1 region in virus attachment in general, and suggest an internalization pathway mediated by direct attachment of the viral particle to the target cell membrane.
Hu, Bo;Liang, Minjian;Hong, Guoqiang;Li, Zhaoxia;Zhu, Zhenyu;Li, Lin
BMB Reports
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v.38
no.6
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pp.683-689
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2005
Antibody to hepatitis B surface antigen (HBsAb) is the important serological marker of the hepatitis B virus (HBV) infection. Conventionally, the hepatitis B surface antigen (HBsAg) obtained from the plasma of HBV carriers is used as the diagnostic antigen for detection of HBsAb. This blood-origin antigen has some disadvantages involved in high cost, over-elaborate preparation, risk of infection, et al. In an attempt to explore the suitable recombinant HBsAg for the diagnostic purpose, the HBV S gene was expressed in Pichia pastoris and the product was applied for detection of HBsAb. Hepatitis B virus S gene was inserted into the yeast vector and the expressed product was analyzed by sodium dodecyl sulphate polyacrolamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), immunoblot, electronic microscope and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The preparations of synthesized S protein were applied to detect HBsAb by sandwich ELISA. The S gene encoding the 226 amino acid of HBsAg carrying ahexa-histidine tag at C terminus was successfully expressed in Pichia pastoris. The His-Tagged S protein in this strain was expressed at a level of about 14.5% of total cell protein. Immunoblot showed the recombinant HBsAg recognized by monoclonal HBsAb and there was no cross reaction between all proteins from the host and normal sera. HBsAb detection indicated that the sensitivity reached 10 mIu (micro international unit)/ml and the specificity was 100% with HBsAb standard of National Center for Clinical Laboratories. A total of 293 random sera were assayed using recombinant S protein and a commercial HBsAb ELISA kit (produced by blood-origin HBsAg), 35 HBsAb positive sera and 258 HBsAb negative sera were examined. The same results were obtained with two different reagents and there was no significant difference in the value of S/CO between the two reagents. The recombinant HBV S protein with good immunoreactivity and specificity was successfully expressed in Pichia pastoris. The reagent for HBsAb detection prepared by Pichia pastoris-derived S protein showed high sensitivity and specificity for detection of HBsAb standard. And a good correlation was obtained between the reagent produced by recombinant S protein and commercial kit produced by blood-origin HBsAg in random samples.
A clone pSL 2-1, which is a recombinant plasmid believed to contain the mosquitocidal crystal-line protein gene of the Bacillus sphaericus 1593, was expressed in Escherichia coli JM83 and the product of the clone was purified and identified. The unsolubilized mosquitocidal crystal proteins from the B. sphaericus had formed 43, 58, 64, 100, 113, and 130 Kd bands in the SDS-polyacrylamide gel, but the NaOH-solublized proteins at pH 12 formed 2 protein bands of 43- and 64Kd in the gel because the larger protein (precursor) bands were cleaved. The products of the pSL 2-1 clone was purified by Sephadex G-200 and only the fractions having lethal activity to the 3rd in-star larvae of mosquito Culex pipiens were analyzed by the gel. The only single protein band of 42 Kd toxic to the larvae was formed. The major toxic protein being produced from the B. sphaericus 1593 and the pSL 2-1 clone was found to be the 42 Kd.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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