The Chongmyung-tang (CMT) has been used as an oriental herbal medicine for the purpose of enhanced learning and memory. Recently, since fermentation may give a positive effect on pharmacological actions of herbal medicine, many studies are focused to find fermented medicinal herbs with improved bioactivity. In the present study, memory enhancing, antioxidant and reducing power activity of CMT and fermented CMT with Aspergillus oryzae (FCMT-A) or Saccharomyces cerevisiae (FCMT-S) were determined. To evaluate the memory enhancing activities of CMT, FCMT-A and FCMT-S, we performed passive avoidance test using scopolamine induced amnesia model. Administration of CMT, FCMT-A and FCMT-S showed a significant memory enhancing effect about 72.5, 78.3, 71.8% of the normal group respectively. CMT, FCMT-A and FCMT-S also exhibited strong $DPPH{\bullet}$, ${\bullet}{O_2}^-$, $NO^{\codt}$, $ABTS^{{\cdot}+}$ scavenging activities and reducing ower. It was also found that fermented CMT has slightly higher scavenging activities on $DPPH{\bullet}$, $ABTS^{{\cdot}+}$ radicals compared to CMT. These results revealed that CMT, FCMT-A and FCMT-S had memory enhancing and radical scavenging activities. In addition, the fermentation of CMT was more or less important for elevated memory enhancing and antioxidant activities of CMT.
The gene encoding $\beta$-agarase (agaB) which hydrolyzes $\beta$-1,4 linkages of agarose from Zobellia galactanivorans was cloned and fused to Saccharomyces cerevisiae mating factor alpha-1 secretion signal ($MF{\alpha}1$), in which the transcription of $MF{\alpha}1$-AgaB was under the control of AOX1 (alcohol oxidase 1, methanol inducible) promoter. The constructed plasmid pPIC-AgaB (9 kb) was integrated into HIS4 gene locus of Pichia pastoris genome. Successful integration was confirmed by performing colony PCR. The transformed cells showed red halos around its colonies in methanol agar plate by adding iodine solution, indicating the active expression of agaB in P.pastoris. By SDS-PAGE and zymographic analysis, the molecular weight of $\beta$-agarase was estimated to be a 53 kDa and about 15% N-linked glycosylation was occurred. The activity of extracellular $\beta$-agarase reached 1.34, 1.42 and 1.53 units/mL by inducing 0.1, 0.5, and 1% methanol, respectively, at baffled flask culture of P.pastoris GS115/pPIC-AgaB for 48 hr. Most of the enzyme activity was found in the extacellular fraction and the secretion efficiency showed 98%. Thermostability of recombinant $\beta$-agarase was also increased by glycosylation.
This study was carried out to investigate the usefulness of the aerial part of Cnidium officinale Makino as a bioactive material source. The aerial part(leaf and stem) of Cnidium officinale Makino was extracted with three kinds of solvents and determined their antimicrobial activities against several bacteria and yeast strains using the paper disc method and the microtiter dilution method. The extracts of the Cnidium offocinale aerial part exhibited the broad spectrum of antibacterial activity against Gram (+) and Gram (-) bacteria, including food-borne pathogens such as Listeria monocytogenes, Salmonella typhimurium, and Staphylococcus aureus. The extracts of Cnidium officinale also showed antifungal activity against Saccharomyces cerevisiae. The ethyl acetate extracts completely inhibited the growth of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aerogenes, and moderately inhibited the growth of Escherichia coli and Enterobacter cloacae at the concentration of 0.5 mg/mL. However, water extract of Cnidium officinale exhibited lower antimicrobial activity than ethyl acetate and methanol extracts. The inhibitory effect of the ethyl acetate extract of Cnidium officinale Makino was not destroyed by heating at $100^{\circ}C$ for 30 min or at $121^{\circ}C$... for 15 min. These results suggest that the aerial part of Cnidium officinale Makino could be a useful source for a natural antimicrobial material.
Although extensively characterized in human cells, no heterogeneous nuclear ribonucleoprotein(hnRNP) has been found in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe which is amenable to genetic studies and more similar to mammals than Saccharomyces cerevisiae is in terms of RNA processing. As a first step to characterize hnRNPs from S. pombe, attempt was made to find human hnRNP A1 homologs from S. pombe. The RNA molecule (A1 winner) containing the consensus high-affinity hnRNP A1 binding site (UAGGGA/U) was synthesized in vitro and used in an ultraviolet(UV) light-induced protein-RNA cross-linking assay. A number of S, pombe proteins bound to the A1 winner RNA. An approximately 50-kDa protein(p50) cross-linked more efficiently to the A1 winner RNA than other proteins. The p50 protein did not cross-link to a nonspecific RNA, but rather to the A1-5’ SS RNA in which the consensus 5’ splice junction sites of S. pombe introns were abolished. This suggests that the p50 protein, however, did not bind to the single-stranded DNA to shich the human hnRNP A1 could bind and be eluted with 0.5M NaCl. Further analysis should reveal more features of this RNA-binding protein.
A portion (7.4 kb) of ribosomal DNA tandem repeat unit from a genome of the mushroom T. matsutake has been cloned. A 1.75 kb EcoRI fragment was cloned first using S. cerevisiae 255 rRNA gene as a probe, and this was then used for further cloning. A chromosomal walking experiment was carried out and the upstream region of the 1.75 kb fragment was cloned using SmaI/BamHI enzyme, the size was estimated to be 5.2 kb in length. Part of the downstream region of the 1.75 kb fragment was also cloned using XbaI/BamHI enzymes. Restriction enzyme maps of three cloned DNA fragments were constructed. Northern hybridization, using total RNA of T. matsutake, and the restriction fragments of three cloned DNAs as probes, revealed that all four ribosomal RNA genes (large subunit[LSU], small subunit [SSU], 5.85 and 5S rRNA genes) are present in the cloned region. The gene organization of the rDNA are regarded as an intergenic spacer [IGS]2 (partial) - SSU rRNA - internal transcribed spacer [ITS]1 - 5.8S rRNA - ITS2 - LSU rRNA - IGS1 -5S rRNA - IG52 (partial).
Sida acuta, a common type of weed in Thailand, contains relatively high cellulose (42.7%) content. We pretreated NaOH to improve glucose recovery from S. acuta. The effect of pretreatment temperature and NaOH concentration was fundamentally investigated based on hydrolysis efficiency with recovery of solid fraction. The pretreatment condition was determined to be 3% NaOH at $60^{\circ}C$ for 9 h, which showed the highest glucose recovery. The hydrolysates obtained by enzymatic hydrolysis of S. acuta were applied to the fermentation of Saccharomyces cerevisiae K35, and a theoretical yield of 97.6% was achieved at 18 h. This indicated that the hydrolysates medium without detoxification had no negative effects on the fermentation. The production of biomass into bioethanol was evaluated based on the material balance of 1,000 g basis. Following this estimation, approximately 28 g and 110 g bioethanol could be produced by untreated and pretreated S. acuta, respectively, and this production was improved about 3.9-fold by NaOH pretreatment. These results again show the importance of pretreatment in biorefinery process.
Forty yeast strains isolated from soils taken from different locations in Egypt were tested for their P-solubilizing activities on the basis of analyzing the clear zone around colonies growing on a tricalcium phosphate medium after incubation for 5 days at $25^{\circ}C$, denoted as the solubilization index (SI). Nine isolates that exhibited P-solubilization potential with an SI ranging from 1.19 to 2.76 were genetically characterized as five yeasts belonging to the genus Saccharomyces cerevisiae and four non-Saccharomyces, based on a PCR analysis of the ITS1-26S region amplied by SC1/SC2 species-specific primers. The highest P-solubilization efficiency was demonstrated by isolate PSY- 4, which was identified as Saccharomyces cerevisiae by a sequence analysis of the variable D1/D2 domain of the 26S rDNA. The effects of single and mixed inoculations with yeast PSY-4 and Bacillus polymyxa on the P-uptake and growth of corn were tested in a greenhouse experiment using different levels of a phosphorus chemical fertilizer (50, 100, and 200 kg/ha super phosphate 15.5% $P_2O_5$). The results showed that inoculating the corn with yeast PSY-4 or B. polymyxa caused significant increases in the shoot and root dry weights and P-uptake in the shoots and roots. The P-fertilization level also had a significant influence on the shoot and root dry weights and P-uptake in the shoots and roots when increasing the P-level from 50 up to 200 kg/ha. Dual inoculation with yeast strain PSY-4 and B. polymyxa at a P-fertilization level of 200 kg/ha gave higher values for the shoot and root dry weights and P-uptake in the shoots and roots, yet these increases were nonsignificant when compared with dual inoculation with yeast strain PSY-4 and B. polymyxa at a P-fertilization level of 100 kg/ha. The best increases were obtained from dual inoculation with yeast strain PSY-4 and B. polymyxa at a P-fertilization level of 100 kg/ha, which induced the following percentage increases in the shoot and root dry weights, and P-uptake in the shoots and roots; 16.22%, 46.92%, 10.09%, and 31.07%, respectively, when compared with the uninoculated control (fertilized with 100 kg/ha).
Rare mating was used to select a respiratory deficient mutant of Saccharomyces cerevisiae HDC52 strain. Glucoamylase gene of S. diastaticus K114 was developed into the RD mutant which could uptake maximum amount of non-fermentable sugars through the expression of glu- coamplyase gene and the fermentation characteristics of the developed strain HCS were investigated. The size of HCS yeast and HBD52 yeast strain were 13 $\mu\textrm{m}$ and 10$\mu\textrm{m}$ respectively. HCS strain which can uptake maximum amount of non-fermentable sugar through the expression of glucoamylase gene was developed. By karyotype anal- ysis. HCS stain but not RD mutant HBC52 showed a band of 1150 kb chromosome DNA This band should include glcoamylase gene from Saccharomyces diataticus K114 THis strain has glucoamylase which can degrade starch By transduction and contrnuance of glucoamylase gene HCS strain gegraded strach and formed halo. Also, HCS strain maintained the character after 50 generations. Glucoamylase activities of Saccharomyces diastaticus K114 and HCS yeast strains are 9.5 and 2.7~3.4(unit/ml) HCS and HBC52 strain showed similar sugar fermentation patterns and low flocculation In spore and film forming test, HCS and HBC52 strain formed neither spores nor films. In the limit fermentation test, HBC52 strain showed fermentation level of 68% and HCS strain showed 76~78% As the limit attenuation of HBC52 and HCS were ($2.00^{\circ}$P) and ($0.7~0.93^{\circ}$P) This study demon- strates and HCS strain may be used for low carbohydrate beer fermentation.
When a homothallic ascomycete Aspergillus nidulans is exposed to visible light, cleistothecial development is inhibited. The light response of development in A. nidulans implies the existence of delicate regulation process including reception and translocation of light signaling and determination of development. Previously, mutants that could develop cleistothecia even in the presence of relatively intensive visible light were isolated and several complementation groups were identified. A gene that was able to complement the silA98 mutation, which was responsible for preferred cleistothecia development under visible light, was isolated from AMA-NotI genomic library. The silA gene retained in the 4.3 kb recovered genomic library DNA has an open reading frame (ORF) consisted of 2,388 bp nucleotides, interrupted by 3 introns and consequently encoding 795 amino acids. The putative SilA carries a ${Zn_2}{Cys_6}$ binuclear cluster motif at N terminus and shows high amino acid sequence similarity to Aro80p of Saccharomyces cerevisiae. Deletion mutants of silA showed a strong induction of sexual development under visible light, indicating that SilA is involved in the negative regulation of sexual development in response to the light.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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