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Bacillus licheniformis로부터 분리된 phospholipase D 유전자의 발현 및 생화학 특성 (Expression and Biochemical Characteristics of a Phospholipase D from Bacillus licheniformis)

  • 강한철;윤상홍;이창묵;구본성
    • Journal of Applied Biological Chemistry
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    • 제54권2호
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    • pp.94-100
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    • 2011
  • Bacillus licheniformis로 부터 phospholipase D (PLD)로 추정되는 유전자를 PCR 기술을 이용하여 분리하여 pGEM-T easy 운반체에 cloning 하였다. 분리된 유전자는 His6가 붙은 pET-21 운반체를 이용하여 E. coli BL21 (DE3)에서 발현시켰다. 재 조합된 PLD는 nikel-nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) resin을 갖는 column을 이용하여 affinity chromatography로 분리하였다. SDS-PAGE 분석 결과 PLD로 추정되는 단백질은 약 44 kDa의 주요 단일밴드를 나타내었다. 분리된 효소의 최적 활성도는 pH 7.0에서 나타났으며 이 조건에서 또한 효소가 제일 안정되었다. 효소활성에 미치는 최적 온도는 $40-45^{\circ}C$의 온도에서 형성되어 비교적 높은 온도를 나타내었으며 비교적 넓은 범위의 온도에서 상당히 높은 효소 활성도를 나타내었다. 여러 가지 detergent 중에서 Triton X-100을 0.6 mM까지 첨가할 경우 PLD의 효소활성도는 점진적으로 증가하여 대조구 대비 최대 181%의 효소 활성도를 나타내었다.

경화된 상아질의 접합 양상에 관한 주사전자현미경적 연구 (A SCANNING ELECTRON MICROSCOPIC STUDY OF BONDING ASPECTS TO THE SCLEROTIC DENTIN)

  • 이린;이형일;이광원;손호현
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • 제22권1호
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    • pp.228-243
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    • 1997
  • The changes of microstructures, morphology of sclerotic dentin and bonding aspects generated by an adhesive resin was investigated. Incisors and premolars showing natural cervical abrasions were collected and conditioned with 10 % phosphoric acid or 10 % maleic acid. The sclerotic dentin specimens were then rinsed and blot-dried and applied with dentin adhesive (All Bond 2) to the conditioned dentin surface. To examine the morphologic change of the sclerotic dentin specimen after etching and bonding procedure, the treated specimens were examined by SEM. To analyze the chemical composition of sclerotic dentin and crystals occluding dentinal tubules, the sclerotic dentin specimen was powdered and examined with X-ray Diffractometer. To investigate the Ca/P weight percent ratio within the dentinal tubules, the sclerotic dentin specimen was fractured perpendicularly to the long axis of the tooth from the center of cervical abrasion lesion and then examined with EDX(Energy Dispersive X-ray) microanalyzer. The results were as follows : 1. The increased width of peritubular dentin and the depositions of the irregular amorphous materials within the dentinal tubules were showed in the sclerotic dentin specimens. 2. After the treatment of sclerotic dentin specimen with 10 % phosphoric acid or 10 % maleic acid, the lateral side of tubules rather than cross-sectional tubule openings was showed exclusively at the incisal and gingival incline of the specimens. 3. After the treatment of sclerotic dentin specimen with 10 % phosphoric acid or 10 % maleic acid, the hybrid layer was not formed evidently and the resin tag was not formed or shortly penetrated into the tubules with the thinner diameter. 4. According to the results of XRD analysis of the sclerotic dentin specimen, Hydroxyapatite and Octacalcium phosphate were predominent, however, Whitlockite crystals were rare. 5. The mean Ca/P weight percent ratio analysed from 5 fractured sclerotic dentin specimens was $2.322{\pm}0.170$ at the intertubular dentin, $1.826{\pm}0.051$ within the dentinal tubule.

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수종의 One-bottle 상아질 결합제의 전단 결합 강도에 관한 연구 (THE STUDY ON SHEAR BOND STRENGTHS OF VARIOUS ONE-BOTTLE DENTIN ADHESIVES)

  • 오소희;김종수;권순원
    • 대한소아치과학회지
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    • 제28권4호
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    • pp.553-565
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    • 2001
  • 새로운 상아질 결합제인 5세대 상아질 결합제는 산 부식, 전 처치, 그리고 접착의 복잡한 과정을 줄여줌으로써 시술 과정이 간단하고 시간이 단축되며 시술 도중의 오염에 대한 가능성을 줄여준다는 점에서 유용성이 부각되고 있다. One-bottle 상아질 결합제에 관한 기존의 연구들이 아세톤, 에탄올 등의 용매를 포함하는 상아질 결합제를 중심으로 이루어져 본 실험에서는 water-based 상아질 결합제를 우치(牛齒)의 상아질에 적용하여 얻어지는 상아질 결합력을 전단 결합 강도 측정과 주사 전자현미경 관찰을 통해 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 전단결합강도의 측정결과 II군 IV군, I군, III군의 순서로 II군에서 다소 높은 전단강도를 보였으나, 모든 군들간에는 유의 차가 없었다(p>0.05). 2. 주사 전자 현미경 소견에서 II군과 IV군에서 서로 유사한 양상의 잘 형성된 혼화층이 관찰되었으며 레진 테그의 측방 가지 또한 다수 관찰할 수 있었다.

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타액 오염이 One bottle 상아질 결합제의 전단결합강도에 미치는 영향에 관한 연구 (A STUDY ON THE EFFECT OF SALIVA CONTAMINATION ON THE BOND STRENGTH OF ONE-BOTTLE ADHESIVE SYSTEM)

  • 전형준;김종수;권순원
    • 대한소아치과학회지
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    • 제28권4호
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    • pp.566-574
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    • 2001
  • 법랑질과 상아질에 대한 접착시스템의 결합력은 타액이나 혈액에 의하여 저하될 수 있다. 제 5세대 상아질 결합제 적용시에 산부식된 치면이 타액에 오염될 경우, 보다 효율적인 치면 처리 방법을 알아보기 위해 여러 가지 치면 처리 방법과 조건을 설정한 다음 수복물의 유지력을 전단결합강도 측정으로 서로 비교 분석하고, 치아와 수복물 사이의 계면을 주사전자 현미경을 이용해 관찰하였다. 그 결과 우치상아질의 산부식후 타액오염된 경우, 물로 10초간 세척한 후 공기로 가볍게 건조하여 수복하면 전단결합강도의 감소가 일어나지 않았으나, Prime & Bond NT의 광중합후에 타액오염된 경우에는 물로 10초간 세척한 후 공기로 완전히 건조를 하여도 레진과의 결합력이 매우 약해지며 Prime & Bond NT를 재적용하더라도 전단결합강도의 상당한 감소를 보였으며, 주사전자 현미경 관찰결과 모든 군에서 유사한 혼화층과 레진태그의 형성을 보였으며 특이할만한 각 군간의 차이를 관찰할 수 없었다.

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복합레진 수복시 와동의 크기 및 수복 방법이 교두 굴곡에 미치는 영향 (INFLUENCE OF CAVITY SIZE AND RESTORATION METHODS ON THE CUSP DEFLECTION IN COMPOSITE RESTORATION)

  • 이미라;이인복;석창인;이상탁;엄정문
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • 제29권6호
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    • pp.532-540
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    • 2004
  • The aim of this study was to measure the cusp deflection during composite restoration for MOD cavity in premolar and to examine the influence of cavity dimension, C-factor and restoration method on the cusp deflection. Thirty extracted maxillary premolar were prepared to four different sizes of MOD cavity and divided into six groups. The width and depth of the cavity were as follows. Group 1; $1.5{\;}{\times}{\;}1{\;}mm$, Group 2; $1.5{\;}{\times}{\;}2{\;}mm$, Group 3; $3{\;}{\times}{\;}1{\;}mm$, and Group 4-6; $3{\;}{\times}{\;}2{\;}mm$ respectively. Group 1-4 were restored using bulk filling method with Z-250 composite. However, Group 5 was restored incrementally, and Group 6 was restored with an indirect resin inlay. The cusp deflection was recorded at the buccal and lingual cusp tips using LVDT probe for 10,000 seconds. The measured cusp deflections were compared between groups, and the relationship between the cube of the length of cavity wall/the cube of the thickness of cavity wall ($L^3/T^3$). C-factor and cusp deflection or % flexure ($100{\;}{\times}$ cuspal deflection / cavity width) was analyzed. The cusp deflection of Group 1-4 were $12.1{\;}\mu\textrm{m},{\;}17.2{\;}\mu\textrm{m},{\;}16.2{\;}\mu\textrm{m}{\;}and{\;}26.4{\;}\mu\textrm{m}$ respectively. The C-factor was related to the % flexure rather than the cusp deflection. There was a strong positive correlationship between the $L^3/T^3$ and the cusp deflection. The cusp deflection of Group 5 and 6 were $17.4{\;}\mu\textrm{m}{\;}and{\;}17.9{\;}\mu\textrm{m}$ respectively, which are much lower value than that of Group 4.

Xanthomonas oryzae pv. oryzae로 부터 aspartate aminotransferase 유전자의 분리 및 생화학 특성 (Cloning and Biochemical Characterization of Aspartate Aminotransferase from Xanthomonas oryzae pv. oryzae)

  • 강한철;윤상홍;이창묵
    • Journal of Applied Biological Chemistry
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    • 제52권3호
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    • pp.109-115
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    • 2009
  • Xoo로 부터 aspartate aminotransferase로 추정되는 유전자를 분리한 다음 발현시켜 생화학 특성을 조사하였다. 분리된 유전자는 His6 pET-21(a) 운반체에 삽입시켰으며 E. coli BL21(DE3)에서 발현시켰다. 재조합된 Asp-AT는 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE분석에서 43kDa의 단일 밴드를 나타내었다. 분리된 효소는 amino donor 로서 L-aspartate에 대하여 효소활성도가 가장 높았고, L-leucine 및 L-cysteine에 대하여서도 상당한 활성도를 나타내었다. 효소의 최적 pH는 약 7.5 근처에서 나타났고 효소의 안정성은 산성조건 보다는 알칼리 조건에서 훨씬 높았다. 최적 온도는 약 $35-40^{\circ}C$로 나타났고 $55^{\circ}C$에서 20분간 열처리한 이후의 잔여 활성도는 약 78%로 나타났다. 여러 중금속 중에서 망간 이온에 의해 효소활성이 촉진되었다.

Bacillus pseudomycoides로 부터 분리된 alanine racemase 유전자의 발현 및 생화학 특성 (Biochemical Characteristics of a Bacteria (Bacillus pseudomycoides) Alanine Racemase Expressed in Escherichia coli)

  • 강한철;김나현;정유정;윤상홍;이창묵
    • Journal of Applied Biological Chemistry
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    • 제53권3호
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    • pp.132-138
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    • 2010
  • B. pseudomycoides로 부터 alanine racemase로 추정되는 유전자를 분리한 다음 6xHistidine 이 결합된 pET-21 운반체를 이용하여 E. coli BL21(DE3)에서 발현시키고 생화학 특성을 조사하였다. 재조합된 alanine racemase는 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE 분석에서 약 46 kDa의 단일밴드를 나타내었다. 분리된 효소는 여러 아미노산 중에서 L-alanine에 대하여 가장 높은 활성도를 보이고 D-alanine에 대하여 두번째로 높은 활성도를 보였다. 따라서 분리된 효소는 alanine racemase로 판단되었다. 분리된 효소는 D-cysteine에 하여 상당히 저해가 되었다. 효소의 최적 활성도는 pH 9.0 근처에서 관찰되었고 산성의 조건보다는 알칼리의 조건에서 보다 안정하였다. 보효소인 PLP 0.3mM의 첨가에 의해 효소의 활성도는 약 70% 가량 증대되었다.

NaOCl의 적용 후 치수강 상아질에 대한 결합강도의 변화와 Sodium Ascorbate에 의한 환원 효과 (CHANGES IN μ-TBS TO PULP CHAMBER DENTIN AFTER THE APPLICATION OF NAOCL & REVERSAL EFFECT BY USING SODIUM ASCORBATE)

  • 권수미;김태균;유미경;이광원
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • 제34권6호
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    • pp.515-525
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    • 2009
  • 본 연구에서는 치수강이 개방된 근관와동에 5.25% NaOCl용액을 각각 다른 시간 동안 적용시킨 뒤 접착레진에 의한 미세인장결합강도의 변화를 측정하였으며, 10% sodium ascorbate를 NaOCl 용액에 일정시간 노출시킨 상아질에 다시 10분 동안 적용하여 결합강도에 미치는 효과를 연구하고자 하였다. 연구결과 본 실험에서 상부 치수강 상아질과 하부 치수강 상아질에 대한 결합강도는 모든 실험군내에서 유의한 차이 (p > 0.05)를 보이지 않았다. 5.25% NaOCl 용액을 적용하지 않고 치수강 상아질에 접착시킨 대조군에 비해 20분간 적용시킨 실험군에서는 결합강도의 감소가 초래되었으나 통계적인 유의성 (p > 0.05)은 없었다. 그러나 5.25% NaOCl 용액을 40분과 80분 동안 치수강 상아질에 적용시킨 실험군에서는 대조군에 비해 유의하게 낮은(p < 0.05) 결합강도의 변화를 나타내었다. 5.25% NaOCl 용액을 40분동안 그리고 10% sodium ascorbate를 10분간 처리한 실험군에서는 유의한 결합강도의 회복을 나타내었다. 그러나 5.25% NaOCl 용액을 80분 동안 그리고 10% sodium ascorbate를 10분간 적용한 실험군에서는 대조군에 비해 통계적으로 유의한 차이(p < 0.05)를 보임으로써 여전히 결합강도가 회복되지 못하고 있음을 나타내었다. 5.25% NaOCl 용액을 5분간 적용한 뒤 10% sodium ascorbate를 10분간 적용한 실험군에서는 오히려 대조군에 비해 높은 결합강도(p < 0.05)를 보여줌으로써 높은 회복효과를 나타내었다.

Amberlite에 고정화된 Lipase 제조 및 효소적 Interesterification을 이용한 반응 특성 연구 (Immobilization of Lipases on Amberlite and Their Interesterification Reaction Characteristics)

  • 박소라;이기택
    • 한국식품과학회지
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    • 제46권3호
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    • pp.315-322
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    • 2014
  • 본 연구는 미생물로부터 유래된 5종(AH, AK, AY, PS와 R)의 lipase들을 Amberlite XAD 7에 흡착법으로 고정화 시킨 후 각 immobilized lipase들의 특성을 알아보았다. 고정화 전과 후의 단백질 함량 및 각 free lipase들과 immobilized lipase들을 이용한 interesterification 반응물의 지방산과 TAG 조성을 분석하였다. 또한, immobilized lipase에 있어 중요한 요인인 reusability를 확인하였다. Free lipase의 단백질 함량은 2.22-11.41%로 AH가 가장 높았던 반면, immobilized lipase에서는 AH, PS와 AK가 mg protein/g support이 높았다. 한편, 반응 특성을 알아보기 위해 카놀라유, PEE와 StEE를 기질로 하여 batch type interesterification을 진행하였을 때, free lipase의 경우 free lipase R을 제외한 다른 free lipase들은 반응시간이 1시간에서 72시간으로 증가함에 따라 총 포화지방산 함량이 증가하였으며 그 중 free lipase AH가 반응성이 가장 높았다. 또한, RP-HPLC를 통해 free lipase AK 반응물을 분석한 결과, 반응시간이 길어질수록 카놀라유(0시간)에서 볼 수 있었던 57.49 area%의 ${\bigcirc}{\bigcirc}{\bigcirc}$가 6.53 area%로 감소하였다. 이는 각 free lipase들이 PEE와 StEE를 효소적 반응에 이용했기 때문이라고 판단된다. 한편, immobilized lipase AY와 R의 경우 반응시간이 1시간에서 48시간으로 증가하여도 카놀라유(0시간)의 총 포화지방산 함량과 큰 차이가 없었으나 immobilized AK의 경우 48시간에서 38.3 area%의 포화지방산 함량으로 가장 높은 활성을 보였다. 또한, 이를 사용하여 continuous type으로 반응하였을 때 유속이 느릴수록 효소와 기질 사이의 접촉 시간이 길어져 반응물의 총 포화지방산 함량이 증가함을 알 수 있었다. Reusability는 immobilized AK, AH와 PS 모두에서 두 번째 반복 반응을 하였을 때, 첫 번째 반응보다 총 포화지방산이 120-196.5% 증가하였다. 그러나 bounding protein 함량이 가장 높았던 immobilized AK는 support에 흡착되었던 free lipase AK의 탈착이 일어나 2번째 반응 후부터 활성이 감소한 반면, immobilized AH와 PS는 활성이 비교적 유지되었다.

유치열과 영구치열의 구개 각부의 관계에 관한 연구 (A STUDY ON THE RELATIONS OF VARIOUS PARTS OF THE PALATE FOR PRIMARY AND PERMANENT DENTITION)

  • 이용훈;양연미;이용희;김상훈;김재곤;백병주
    • 대한소아치과학회지
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    • 제31권4호
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    • pp.569-578
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    • 2004
  • 본 연구는 유치열과 영구치열에서 구개의 길이, 폭, 깊이 및 치열궁의 형태 등을 조사하여 남녀간의 차이와 유치열과 영구치열간의 변화양상을 파악하는 것이다. 유치열기 아동 100명과 영구치열기 성인 100명 총 200명을 대상으로 하여 상악 석고 모형을 채득하고 3차원 laser scanner(SD Scanner, DS4060, LDI, U.S.A.)를 통한 석고 모델의 측정을 통해 cloud data, polygonization, section curve and loft surface, fit and horizontal plane (Surfacer 10.0. Imageware, U.S.A.)을 기초로 하여 구개의 폭, 길이, 높이 및 치열궁의 형태 등을 계측하였다. 통계학적 분석을 위해 t-tests가 사용되었다. 이에 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 구개의 계측항목에서 유치열 전방부 구개높이를 제외한 나머지 항목에서 남자가 여자보다 크게 나왔으며, 유치열은 전구개폭(p<0.05)과 후구개폭(p<0.01), 영구치열은 구개폭(p<0.05)과 전구개길이(p<0.01), 중구개, 후구개길이(p<0.05)에서 남녀간에 유의한 차이가 있었다. 2. 남녀의 구개지수에서 유치열에서는 구개장고지수(p<0.05)와 구개장폭지수(p<0.01)가 남녀간에 통계학적으로 유의한 차이가 있었다. 영구치열의 구개지수에서는 남녀간에 유의한 차이가 없었다. 3. 유치열과 영구치열의 계측항목 비교에서 후방부 구개폭이 가장 많이 증가하였으며, 다음으로 후방부 구개높이, 전방부 구개폭, 전방부 구개길이 순이었다. 전방부 구개높이와 후방부 구개길이는 오히려 감소하였다. 4. 유치열과 영구치열의 구개지수 비교에서 구개장고지수와 구개장폭지수, 후구개폭고지수는 영구치열에서 증가하였고, 나머지 지수는 감소하였다.보아 Er:YAG 레이저와 Chinese ink로 photosensitization을 시행한 후의 Nd:YAG 레이저 조사는 일정시간 동안 S. mutans의 증식과 산 생성능을 억제시키므로써 치아우식증 예방효과를 얻을 수 있다고 사료되나 억제효과가 오래가지 않아 임상적으로 효과를 얻기 위해서는 자주 조사를 해주어야 한다는 문제점을 안고 있어 임상적으로 치아우식증 예방이란 단독 목적으로 사용하기에는 실용성이 크지 않다고 사료된다.전자현미경 관찰에서 초음파 진동을 가한 군에서 resin tag의 길이가 길었고, lateral branch의 수도 많이 관찰되었다.TEX>$1\rightarrow6$ 결합이 주된 결합인 수용성 글루캔이었다. 이상의 결과를 종합하면 구강에서 분리된 Streptococcus salivarius 119에 의한 Streptococcus mutans의 인공치태 형성 억제작용은 수용성 글루캔 형성에 의한 것으로 사료되었다.동을 유도할 수 있다고 사료된다. 또한 이유식을 통한 다양한 식품의 경험 및 식품 섭취방법 등을 연습하는 과정을 통해 앞으로의 식생활 및 성장 발달에 영향을 미칠 것으로 사료된다. 따라서 영유아의 성장발달에 따른 적절한 영양교육의 실시가 보다 체계적으로 활성화 되어야 하겠으며 이를 위해 실제로 도움이 될 수 있는 구체적인 교육내용, 방법 및 도구의 개발이 요구된다.어서, B군은 A군,C군,D군과 비교하여 통계학적으로 유의성 있는 차이를 보였고(p<0.05), E군은 F군,G군과 비교하여 통계학적으로 유의성 있는 차이를 보였다(p<0.05). 3. 광중합형 및 자가중합형 교정용 전색제는 법랑질탈회 예방효과가 있었다. 4. 광중합형 및 자가중합형 교정용 전색제는 법랑질탈회 진행억제효과가 있었다. 5. 광중합형 및 자가중합형 교정용 전색제 표본에

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