New copper(Ⅱ) complex of the pentaaza non-macrocyclic ligand 1-(2-aminoethyl)-3-(N-{2-aminoethyl}aminomethyl)-1,3-diazacyclohexane (2) and a dinuclear copper(Ⅱ) compex of the bis(macrocyclic) ligand 3, in which two 1,5,8,10,12,15-hexaazabicyclo[11.3.11.5]heptadecane subunits are linked together by an ethylene chain through the uncoordinated nitrogen (N10) atoms, have been prepared selectively by the reaction of the metal ion, 1,4,8-triazaoctane, ethylenediamine, and formaldehyde. The dinuclear complex [Cu2(3)]4+ has been also prepared by the reaction of [Cu(2)]2+ with ethylenediamine and formaldehyde. The reaction products largely depend on the molar ratio of the reactants employed. The mononuclear complex or each macrocyclic subunit of the dinuclear complex contains one 1,3-diazacyclohexane ring and has a square-planar geometry with a 5-6-5 or 5-6-5-6 chelate ring sequence. In acidic solution, the copper(Ⅱ) complex of 2 dissociates more slowly than those of other related non-cyclic polyamines.
현재까지 다수의 역학연구를 통해 피부에 발생한 보통사마귀에서 제 1, 2, 3, 4, 7, 10, 27, 57 및 65형의 인유두종바이러스가 검출되었다. 그러나 기존의 중합효소연쇄반응(conventional polymerase chain reaction, PCR)을 이용하는 경우 절차가 복잡하여 시간이 오래 걸리는 단점이 있었다. 이번 연구를 통해 저자들은 보통사마귀에서 가장 흔히 검출되는 6가지 유전자형의 인유두종바이러스를 한번에 확인 가능한 간편한 muliplex PCR의 개발을 목표로 하였다. 인유두종바이러스의 염기서열분석을 통해, L1에서 E6, 그리고 E2에서 L2 사이의 유전자간영역(intergenic region)으로 부터 6쌍의 primer를 고안하였으며, L1 유전자서열 분석을 통해 multiplex PCR의 특이성을 확인하였다. 총 129개의 조직표본 중 109개에서 제 1, 2, 3, 4, 27, 57형의 인유두종바이러스를 확인하였다. 이번 연구의 primer를 이용한 인유두종바이러스 검출의 민감도와 특이도는 각각 85%와 99.5%였다. 이러한 primer 세트로 인유두종바이러스가 검출되지 않은 20개의 조직표본의 경우, 또 다른 HPV primer를 사용한 추가적인 multiplex PCR을 시행하여 7개 표본에서 제 7형 및 65형의 인유두종바이러스가 검출되었다. 이상의 결과는 본 연구를 통해 새롭게 고안된 multiplex PCR 기법을 통해 보통사마귀에서의 인유두종바이러스를 보다 정확하고 빠르게 검출할 수 있다는 것을 보여 준다.
임상가검물에서 생화학 검사와 항생제 감수성 검사를 통하여 45주의 Staphylococcu aureus를 분리하여 역학적 연구를 위한 형별 분류로써 항생제 감수성 검사, bacteriophage typing,효소중합 연쇄반응 등을 실시하였으며, methicillin 내성과 관련이 있는 mecA 유전자를 검출 및 역학적 변별력이 있는 가변지역의 중합효소증폭반응을 실시하여, 약제 내성과 관련된 구조 유전자의 발현 양상을 비교하여 특정 유전자 배열의 상동성을 밝히고자 하였다. 45주의 Staphylococcus aureus중에서 mecA 유전자 양성주는 30주였으며, 그 중에서 26주가 methicillin에 내성을 보였다. 약제 내성양상에 따라 9개의 antibiogram으로 분류되었으며, SA6을 제외한 균주에서 penicillin, oxacillin, gentamicin 및 chloramphenicol 에서는 높은 내성을 보였으며, SAl3, SAl4 및 SA27에서는 rifampin에 내성을 보였다. 27주에서 bacteriophage 형별 분류가 가능하였으며, Iytic group III가 12주로 가장 많았다. mecA 유전자와 mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction을 실시한 결과 모든 methicillin resistant Staphylococcus aureus 에서는 533 bp의 증폭 band가 관찰되었으나, methicillin 감수성 균주에서는 증폭된 band가 관찰되지 않았다. mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction에서는 200 bp에서 600 bp사이에 분포하여 4개의 유형으로 분류되었으며, 410bp인 C형이 10균주로 가장 많았다. C형 가변부위의 DNA sequence에서 40 bp가 반복되는 dru sequence를 관찰할 수 있었으며, 이러한 dru sequence는 4 unit가 직접적으로 중복됨을 알 수 있었다.
SiC/Co 반응커플을 Ar/4 vol% $H_2$분위기하에서 $950^{\circ}C$에서 $1250^{\circ}C$ 범위에서 4시간에서 100시간까지 열처리하였다. $950^{\circ}C$ 이상의 온도에서의 고상반응으로 여러 가지 규소화물과 탄소석출이 형성되었다. 이 반응 zone에 있어서의 전형적인 반응층의 순서는 $SiC/CoSi + C/Co_2Si + C/Co_2Si/Co_2Si + C/{\cdots\cdots}/Co_2Si/Co$이었다. 그리고 탄소 석출거동을 동반한 주기적인 띠구조의 형성기구가 반응운동학과 열역학적인 고찰을 통하여 조사되어졌고 논하여졌다. 이 반응의 zone의 서장은 시간의 함수관계를 가지며 이러한 반응운동학이 반응상수의 측정을 통하여 제시되어진다. 또한 microhardness 측정을 통하여 반응 zone의 기계적인 물성이 조사되어졌다.
Kim, Tae-Yung;Kim, Cheol-Ho;Lee, Sang-Gil;Kang, Chung-Boo
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제18권6호
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pp.892-897
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2005
Macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) is a growth factor required for growth and differentiation of mononuclear phagocyte lineage. Total and 16 poly (A) mRNA of bovine M-CSF were isolated from healthy bovine peripheral mononuclear cells stimulated by phobol 12-myristste 13-acetate (TPA). The more compatible cultured mononuclear cells were 5${\times}$10/ml for RNA isolation. TPA-activated mononuclear cells increased the level of M-CSF-mRNA more than concanavalin A (Con A) and lipopolysaccharide (LPS). The optimal analysis of reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) for14 Macrophage colonystimulating factor (M-CSF) as a growth factor required for bovine M-CSF was denaturation at 94$^{\circ}C$ for 1 minute, annealing at 57$^{\circ}C$ for 1 minute, extension at 72$^{\circ}C$ for 1 minute for 30 cycles. The size of cDNA of bovine M-CSF by RT-PCR was 774 base pairs. A 774 base pairs cDNA encoding bovine M-CSF was synthesized by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Ligated cDNA was transformed to competent cells and then plasmid isolation and digestion was performed. Molecular cloning and sequencing were performed for cDNA of bovine M-CSF. The size of cloned cDNA of bovine M-CSF was 774base pairs. The homology of base sequence and amino acid sequence was 88% and 86% compared with known human M-CSF, respectively. From a high degree of sequence similarity, the obtained cDNA of bovine M-CSF is thought be a specific gene of bovine M-CSF.
Short tandem repeats (STRs) loci are the genetic markers used for forensic human identity test. With multiplex polymerase chain reaction (PCR) assays, STRs are examined and measured PCR product length relative to sequenced allelic ladders. In the repeat region and the flanking region of the commonly-used STR may have DNA sequence variation. A mismatch due to sequence variation in the DNA template may cause allele drop-out (i.e., a "null" or "silent" allele) when it falls within PCR primer binding sites. The STR markers were co-amplified in a single reaction by using commercial PowerPlex$^{(R)}$ 16 system and AmpFlSTR$^{(R)}$ Identifiler$^{(R)}$ PCR amplification kits. Separation of the PCR products and fluorescence detection were performed by ABI PRISM$^{(R)}$ 3100 Genetic Analyzer with capillary electrophoresis. The GeneMapper$^{TM}$ ID software were used for size calling and analysis of STR profiles. Here, this study described a forensic human identity test in which allelic drop-out occurred in the STR system D18S51. During the course of human identity test, two samples with a homozygous (16, 16 and 21, 21) genotype at D18S51 locus were discovered using the PowerPlex$^{(R)}$ 16 system. The loss of alleles was confirmed when the samples were amplified using AmpFlSTR$^{(R)}$ Identifiler$^{(R)}$ PCR amplification kit and resulted in a heterozygous (16, 20 and 20, 21) genotype at this locus each other. This discrepancy results suggest that appropriate measures should be taken for database comparisons and that allele should be further investigated by sequence analysis and be reported to the forensic community.
폴리부틸렌테레프탈레이트 (poly(butylene terephthalate), PBT)와 파라아세톡시벤조산 (p-acetoxybenzoic acid, ABA)의 조성비를 4/6, 5/5, 6/4로 하고, 온도를 각각 250, 260, 27$0^{\circ}C$로 하여 용융 에스테르 교환반응시킴으로써 poly(butylene terephthalate-co-oxybenzoate) (PBOT)를 합성하였다. 이에 대한 양성자 핵자기 공명 분광($^1$H FT-NMR) 분석을 통해서 분자내 서열 분석을 해본 결과 연속된 oxybenzoate 단위의 수는 1.2에서 1.5사이의 값을 가졌다. 이 값은 같은 조성비 및 같은 반응온도에서 합성된 폴리에틸렌테레프탈레이트(poly(ethylene terephthalate), PET)/ABA (PEOT)쌍에 비해 상대적으로 큰 값임을 알 수 있었다. 이와 같은 블록길 이상의 차이는 열분해 거동에 영향을 미치며 그 결과 폴리옥시벤조에이트(POB), PBT 및 PEOT가 1단계의 열분해를 하는 반면 PBOT는 2단계의 열분해 거동을 나타내었다. 또한 PBOT는 PBT-rich 상, PBT와 ABA의 랜덤분포 상 및 ABA-rich 상의 3상 구조를 가지는 것으로 추측되었다.
A new strain of Cucumber mosaic virus (CMV) from easter lily (Lilium longiflorum), Ly2-CMV, was identified and compared to the well-characterized Mf-CMV (subgroupⅠ) and LS-CMV (subgroupⅡ) by host reaction in several indicator plants, dsRNA analysis, serological property, RT-PCR analysis, restriction enzyme profile of the PCR products and nucleotide sequence of coat protein (CP) gene. Remarkable differences in symptoms of Ly2-CMV were found between Mf-CMV or LS-CMV in tobacco plants and Datura stramoinium. Ly2-CMV induced small necrotic ringspots on the inoculated leaves of Nicotiana tabacum cvs. Xanthi nc and Burley 21 and D. stramonium, and failed to infect these species systemically. Of the indicator plants tested, N. benthamiana only reacted with systemic infection by inoculation of Lr2-CMV. In experiments of dsRNA analysis, serology and RT-PCR of CP gene, Ly2-CMV was come within subgroupⅠ CMV. However, restriction enzyme analysis of the PCR products using MspⅠ showed that Ly2-CMV was distinct to Mf-CMV. The CP gene of Ly2-CMV contains 657 nucleotides, and the nucleotide sequence is similar to that of Mf-CMV. There is also a high degree of conservation between their putative gene products in Ly2-CMV and Mf-CMV, with five amino acid changes in the 218 amino acids of the CPs.
전통 발효식품인 된장으로부터 mannanase의 생산균으로 분리된 WL-8 균주는 형태적 특성, 생화학적 성질 및 16S rRNA의 염기서열에 근거하여 Bacillus subtilis로 동정되었다. B. subtilis WL-8은 locust bean gum 보다는 밀기울이 첨가된 LB 배지에서 mannanase 생산성이 높았으며, 24시간 배양하였을 때 약 20 U/ml에 이르렀다. 분리균 WL-8의 mannanase 유전자를 클로닝하여 그 염기서열을 결정한 결과 mannanase 유전자는 362 아미노산으로 구성된 단백질을 코드하며 1,086 뉴클레오티드로 이루어졌다. 아미노산 잔기배열을 분석한 결과 WL-8의 mannanase는 GH family 26에 속하며 B. subtilis의 mannanases와 매우 상동성이 높았다. B. subtilis WL-8의 mannanase 유전자를 함유한 재조합 대장균의 배양상등액과 균체파쇄상등액을 사용하여 반응특성을 조사한 결과 pH 5.5와 $60^{\circ}C$에서 최대 반응활성을 보였으며, $60^{\circ}C$보다 높은 온도에서 배양상등액보다는 균체파쇄상등액에 존재하는 mannanase가 더 높은 활성을 보였다.
종자를 자연건조시킨 상태에서 ${\beta}-glucuronidase$ (GUS) 유전자와 hygromycin phosphotransferase (HPT) 유전자를 가진 plasmid DNA 용액을 imbibition시켰다. GUS 유전자의 경우 품종, vector의 종류, imbibition의 온도에 따라 표지유전자의 발현율에 차이가 있었으며 약 30-50%의 transient expression을 나타내었다. Hygromycin B (HmB)배지에서 선별된 개체의 genomic DNA를 뽑아 외부유전자의 존재를 dot 분석을 통하여 확인하였다. Inverse polymerase chain reaction 결과 만들어지는 생성물을 cloning하고 sequencing한 결과 CaMV35S promoter sequence를 찾았다. Hygromycin이 첨가된 배지에서 선별된 개체들에서 GUS 유전자의 primer를 이용하여 PCR를 수행한 결과 20개체 중 18개체에서 GUS 유전자가 안정되게 존재하여 HmB 배지에서 GUS 유전자의 존재비율은 90%였다. 본 연구의 결과로부터 두 개의 유전자를 소유한 pYJH vector system이 고등식물의 형질전환에 유용하게 이용될 수 있음을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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