To study effects of cellular FLICE (FADD-like IL-$1{\beta}$-converting enzyme)-inhibitory protein (c-FLIP) inhibition by RNA interference (RNAi) on sensitivity of U2OS cells to tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)-induced apoptosis, plasmid pSUPER-c-FLIP-siRNA was constructed and then transfected into U2OS cells. A stable transfection cell clone U2OS/pSUPER-c-FLIP-siRNA was screened from the c-FLIP-siRNA transfected cells. RT-PCR and Western blotting were applied to measure the expression of c-FLIP at the levels of mRNA and protein. The results indicated that the expression of c-FLIP was significantly suppressed by the c-FLIP-siRNA in the cloned U2OS/pSUPER-c-FLIP-siRNA as compared with the control cells of U2OS/pSUPER. The cloned cell line of U2OS/pSUPER-c-FLIP-siRNA was further examined for TRAILinduced cell death and apoptosis in the presence of a pan-antagonist of inhibitor of apoptosis proteins (IAPs) AT406, with or without 4 hrs pretreatment with rocaglamide, an inhibitor of c-FLIP biosynthesis, for 24 hrs. Cell death effects and apoptosis were measured by the methods of MTT assay with 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide and flow cytometry, respectively. The results indicated that TRAIL-induced cell death in U2OS/pSUPER-c-FLIP-siRNA was increased compared with control cells U2OS/pSUPER in the presence or absence of AT406. Flow cytometry indicated that TRAIL-induced cell death effects proceeded through cell apoptosis pathway. However, in the presence of rocaglamide, cell death or apoptotic effects of TRAIL were similar and profound in both cell lines, suggesting that the mechanism of action for both c-FLIP-siRNA and rocaglamide was identical. We conclude that the inhibition of c-FLIP by either c-FLIP-siRNA or rocaglamide can enhance the sensitivity of U2OS to TRAIL-induced apopotosis, suggesting that inhibition of c-FLIP is a good target for anti-cancer therapy.
Kim, Ji Young;Choung, Sorim;Lee, Eun-Ju;Kim, Young Joo;Choi, Young-Chul
Molecules and Cells
/
제24권2호
/
pp.247-254
/
2007
Improvement in the pharmacokinetic properties of short interfering RNAs (siRNAs) is a prerequisite for the therapeutic application of RNA interference technology. When injected into mice as unmodified siRNAs complexed to DOTAP/Chol-based cationic liposomes, all 12 tested siRNA duplexes caused a strong induction of cytokines including interferon ${\alpha}$, indicating that the immune activation by siRNA duplexes is independent of sequence context. When modified by various combinations of 2'-OMe, 2'-F, and phosphorothioate substitutions, introduction of as little as three 2'-OMe substitutions into the sense strand was sufficient to suppress immune activation by siRNA duplexes, whereas the same modifications were much less efficient at inhibiting the immune response of single stranded siRNAs. It is unlikely that Toll-like receptor 3 (TLR3) signaling is involved in immune stimulation by siRNA/liposome complexes since potent immune activation by ds siRNAs was induced in TLR3 knockout mice. Together, our results indicate that chemical modification of siRNA provides an effective means to avoid unwanted immune activation by therapeutic siRNAs. This improvement in the in vivo properties of siRNAs should greatly facilitate successful development of siRNA therapeutics.
복숭아순나방(Grapholita molesta)은 두 가지 주요 성페로몬 성분(Z-8-dodecenyl acetate and E-8-dodecenyl acetate)을 갖고 있다. 이 성페로몬 성분의 생합성 과정 분석은 포화지방산의 10번 탄소에 이중결합을 합성하는 불포화효소($10{\Delta}$ DES)가 종 특이적 광학이성체 형성에 필수적이라고 제시하였다. 그러나 이 효소의 분자적 특징에 대해서 분석되지 않았다. 본 연구는 복숭아순나방 성페로몬 샘의 전사체에서 $10{\Delta}$ DES로 추정된 불포화효소(Gm-comp1575)의 단백질 기능 영역을 분석하였다. Gm-comp1575 유전자는 370개의 아미노산 서열 정보를 암호하고 있으며 분자량은 약 43.2 kDa 그리고 등전위점(pI)은 8.77로 추정되었다. 이 불포화효소는 4개의 막투과영역을 지니고 있으며, 6개의 탄수화물 결합 위치가 아미노 말단과 세포내 영역에서 갖는 것으로 추정되었다. 분자계통분석은 Gm-comp1575가 다른 종에서 알려진 $10{\Delta}$ DES와 유사성이 높은 것으로 밝혀졌다. Gm-comp1575 전사체는 암컷 성페로몬 샘 및 다른 복부 조직에서 발현되었다. 이 유전자 발현에 대한 RNA 간섭 처리는 처녀 암컷으로 하여금 사과원에서 수컷을 유인하는 능력을 크게 감소시켰다. 이러한 결과는 Gm-comp1575가 복숭아순나방의 성페로몬 생합성과 관련이 있는 유전자라고 제시하고 있다.
Park, Geon Tae;Seo, You-Mi;Lee, Su-Yeon;Lee, Kyung-Ah
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
/
제39권2호
/
pp.87-93
/
2012
Objective: Lin28 has been known to control the proliferation and pluripotency of embryonic stem cells. The purpose of this study was to determine the downstream effectors of Lin28 in mouse embryonic stem cells (mESCs) by RNA interference and microarray analysis. Methods: The control siRNA and Lin28 siRNA (Dharmacon) were transfected into mESCs. Total RNA was prepared from each type of transfected mESC and subjected to reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis to confirm the downregulation of Lin28. The RNAs were labeled and hybridized with an Affymetrix Gene-Chip Mouse Genome 430 2.0 array. The data analysis was accomplished by GenPlex 3.0 software. The expression levels of selected genes were confirmed by quantitative real-time RT-PCR. Results: According to the statistical analysis of the cDNA microarray, a total of 500 genes were altered in Lin28-downregulated mESCs (up-regulated, 384; down-regulated, 116). After differentially expressed gene filtering, 31 genes were selected as candidate genes regulated by Lin28 downregulation. Among them, neuropeptide Y5 receptor and oocyte-specific homeobox 5 genes were significantly upregulated in Lin28-downregulated mESCs. We also showed that the families of neuropeptide Y receptor (Npyr) and oocyte-specific homeobox (Obox) genes were upregulated by downregulation of Lin28. Conclusion: Based on the results of this study, we suggest that Lin28 controls the characteristics of mESCs through the regulation of effectors such as the Npyr and Obox families.
Objective: Previously, we found that oocyte specific homeobox (Obox) 4 plays significant role in completion of meiosis specifically at meiosis I-meiosis II (MI-MII) transition. The purpose of this study was to determine the mechanism of action of $Obox4$ in oocyte maturation by evaluating downstream signal networking. Methods: The $Obox4$ dsRNA was prepared by $in$$vitro$ transcription and microinjected into the cytoplasm of germinal vesicle oocytes followed by $in$$vitro$ maturation in the presence or absence of 0.2 mM 3-isobutyl-1-metyl-xanthine. Total RNA was extracted from 200 oocytes of each group using a PicoPure RNA isolation kit then amplified two-rounds. The probe hybridization and data analysis were used by Affymetrix Gene-Chip$^{(R)}$ Mouse Genome 430 2.0 array and GenPlex 3.0 (ISTECH, Korea) software, respectively. Results: Total 424 genes were up (n=80) and down (n=344) regulated after $Obox4$ RNA interference (RNAi). Genes mainly related to metabolic pathways and mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway was changed. Among the protein kinase C (PKC) isoforms, PKC-alpha, beta, gamma were down-regulated and especially the MAPK signaling pathway PKC-gamma was dramatically decreased by $Obox4$ RNAi. In the cell cycle pathway, we evaluated the expression of genes involved in regulation of chromosome separation, and found that these genes were down-regulated. It may cause the aberrant chromosome segregation during MI-MII transition. Conclusion: From the results of this study, it is concluded that $Obox4$ is important upstream regulator of the PKC and anaphase-promoting complex action for maintaining intact germinal vesicle.
Drawbacks of conventional cancer treatments, with lack of specificity and cytotoxicity using current approaches, underlies the necessity for development of a novel approach, gene-directed cancer therapy. This has provided novel technological opportunities in vitro and in vivo. This review focuses on a member of an apoptosis inhibitor family, survivin, as a valuable target. Not only the gene but also its promoter are applicable in this context. This article is based on a literature survey, with especial attention to RNA interference as well as tumor-specific promoter action. The search engine and databases utilized were Science direct, PubMed, MEDLINE and Google. In addition to cell-cycle modulation, apoptosis inhibition, interaction in cell-signaling pathways, cancer-selective expression, survivin also may be considered as specific target through its promoter as a novel treatment for cancer. Our purpose in writing this article was to create awareness in researchers, emphasizing relation of survivin gene expression to potential cancer treatment. The principal result and major conclusion of this manuscript are that survivin structure, biological functions and applications of RNA interference systems as well as tumor-specific promoter activity are of major interest for cancer gene therapy.
Hira Abbas;Nazia Nahid;Muhammad Shah Nawaz ul Rehman;Tayyaba Shaheen;Sadia Liaquat
The Plant Pathology Journal
/
제40권1호
/
pp.59-72
/
2024
A comprehensive survey of mungbean-growing areas was conducted to observe leaf spot disease caused by Alternaria alternata. Alternaria leaf spot symptoms were observed on the leaves. Diversity of 50 genotypes of mungbean was assessed against A. alternata and data on pathological traits was subjected to cluster analysis. The results showed that genotypes of mungbean were grouped into four clusters based on resistance parameters under the influence of disease. The principal component biplot demonstrated that all the disease-related parameters (% disease incidence, % disease intensity, lesion area, and % of infection) were strongly correlated with each other. Alt a 1 gene that is precisely found in Alternaria species and is responsible for virulence and pathogenicity. Alt a 1 gene was amplified using gene specific primers. The isolated pathogen produced similar symptoms when inoculated on mungbean and tobacco. The sequence analysis of the internal transcribed spacer (ITS) region, a 600 bp fragment amplified using specific primers, ITS1 and ITS2 showed 100% identity with A. alternata. Potato virus X (PVX) -based silencing vector expressing Alt a 1 gene was constructed to control this pathogen through RNA interference in tobacco. Out of 50 inoculated plants, 9 showed delayed onset of disease. Furthermore, to confirm our findings at molecular level semi-quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction was used. Both phenotypic and molecular investigation indicated that RNAi induced through the VIGS vector was efficacious in resisting the pathogen in the model host, Tobacco (Nicotiana tabacum). To the best of our knowledge, this study has been reported for the first time.
Ali, Mussa M.;Obregon, Demian;Agrawal, Krishna C.;Mansour, Mahmoud;Abdel-Mageed, Asim B.
BMB Reports
/
제43권11호
/
pp.732-737
/
2010
RNA interference is a post-transcriptional silencing mechanism triggered by the bioavailability and/or exogenous introduction of double-stranded RNA (dsRNA) into cells. Here we describe a novel method for the synthesis of siRNA in a single vessel. The method employs in vitro transcription and a single-stranded DNA (ssDNA) template and design, which incorporates upon self-annealing, two promoters, two templates, and three loop regions. Using this method of synthesis we generated efficacious siRNAs designed to silence both exogenous and endogenous genes in mammalian cells. Due to its unique design the single-stranded template is easily amenable to adaptation for attachment to surface platforms for synthesis of siRNAs. A siRNA synthesis platform was generated using a 3' end-biotinylated ssDNA template tethered to a streptavidin coated surface that generates stable siRNAs under multiple cycles of production. Together these data demonstrate a unique and robust method for scalable siRNA synthesis with potential application in RNAi-based array systems.
Jung, Young Jun;Seol, Min-A;Choi, Wonkyun;Lee, Jung Ro
Proceedings of the National Institute of Ecology of the Republic of Korea
/
제2권3호
/
pp.210-218
/
2021
Recently, pest-resistant living modified (LM) crops developed using RNA interference (RNAi) technology have been imported into South Korea. However, the potential adverse effects of unintentionally released RNAi-based LM crops on non-target species have not yet been reported. Coccinella septempunctata, which feeds on aphids, is an important natural enemy insect which can be exposed to the double-stranded RNA (dsRNA) produced by RNAi-based LM plants. To assess the risk of ingestion of Snf7 dsRNA by C. septempunctata, we first identified the species through morphological analysis of collected insects. A method for species identification at the gene level was developed using a specific C. septempunctata 12S rRNA. Furthermore, an experimental model was devised to assess the risk of Snf7 dsRNA ingestion in C. septempunctata. Snf7 dsRNA was mass-purified using an effective dsRNA synthesis method and its presence in C. septempunctata was confirmed after treatment with purified Snf7 dsRNA. Finally, the survival rate, development time, and dry weight of Snf7 dsRNA-treated C. septempunctata were compared with those of GFP and vATPase A dsRNA control treatments, and no risk was found. This study illustrates an effective Snf7 dsRNA synthesis method, as well as a high-concentration domestic insect risk assessment method which uses dsRNA to assess the risk of unintentional released of LM organisms against non-target species.
다운증후군은 추가적으로 존재하는 인간염색체 21번에 위치한 유전자의 과발현으로 발병한다. 다운증후군 환자에서 보이는 여러 증상들 중 학습과 기억능력 저하와 같은 뇌기능 저하는 다운증후군 환자가 독립적인 생활을 영위하는데 가장 큰 걸림돌이 된다. 인간염색체 21번에 위치하는 Dyrk1A는 신경발달에 중요한 역할을 하는 단백질로 Dyrk1A를 과발현 하는 형질전환 생쥐에서 심각한 해마 의존적 학습과 기억 장애가 보고되었다. 본 연구에서는 인간 Dyrk1A를 과발현 하는 형질전환 생쥐와 RNA interference (RNAi) 방법을 이용하여 endogenous mouse Dyrk1A의 발현은 정상적으로 유지하면서 exogenous human Dyrk1A 발현은 특이적으로 저해함으로써 인간 Dyrk1A 과발현에 의한 학습과 기억 능력저하를 회복시킬 수 있는지 동물모델에서 검증하기 위한 첫 단계로 인간 Dyrk1A 특이적 lentiviral short hairpin RNA (shRNA)를 발굴하였다. 발굴된 shRNA를 이용한 형질전환 모델생쥐에서의 증상의 회복 가능성 검증은 다운증후군의 뇌기능저하 치료제 개발에 중요한 정보를 제공할 것이다.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.