• Archives of Pharmacal Research
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• 제25권2호
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• pp.170-177
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• 2002

The herb, Chrysanthemum zawadskii var, latilobum commonly known as Gu-Jul-Cho in Korea, used in traditional medicine to treat pneumonia, bronchitis, cough, common cold, pharyngitis, bladder-related disorders, gastroenteric disorders, and hypertension. Linarin is the main active compound and the biological mechanisms of its activity are unclear. It is believed that effects of this herb may be exerted through the pluripotent effectors of linarin due to its ability to treat a variety of afflictions. In this study, the effects of linarin on the mouse macrophages cell line, RAW 264.7, were investigated. It was found that linarin could activate macrophages by producing cytokines. Monocytes and tissue macrophages produce at least two groups of protein mediators of inflammation, interleukin 1 (IL-1 ) and the tumor necrosis factor (TNF). Recent studies have shown that TNF and IL-1 modulate the inflammatory function of endothelial cells, leukocytes, and fibroblasts. $TNF-{\alpha}$ production by macrophages treated with linarin occured in a dose dependent manner However, IL-1 production was largely unaffected by this natural product. This study demonstrated the ability of linarin to activate macrophages both directly and indirectly. Linarin also affect both cytosine production and nitric oxide inhibition, in addition to the expression of some surface molecules. Nitric oxide (NO), derived from L-argin-ine, is produced by two forms(constitutive and inducible) of nitric oxide synthase (NOS). The NO produced in large amounts by inducible NOS is known to be responsible for the vasodilation and hypotension observed in septic shock. Linarin was found to inhibit NO production in the LPS-activated RAW 264.7 cells. Linarin may be a useful candidate as a new drug for treating endotoxemia and the inflammation accompanied by NO overproduction. The linarin-treated total Iymphocytes exhibited cytotoxicity in a dose dependent manner between $20{\;}{\mu}g/ml{\;}and{\;}40{\;}{\mu}g/ml$. These results suggest that linarin may function through macrophage activation.

• 생명과학회지
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• 제19권6호
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• pp.744-750
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• 2009

토양에서 분리한 세포외 다당류 생산균주 PS-12는 형태학적, 생리학적, 화학적 분석에 의하여 Bacillus sp.에 속하는 균주로 동정되었으며, 분리균주 PS-12는 Bacillus sp. PS-12로 명명하였다. Bacillus sp. PS-127가 생산하는 세포외 다당류는 에탄올 침전, cetylpyridinium chloride (CPC) 침전과 gel permeation chromatography를 이용하여 정제하였으며, 정제된 다당류 PS-12의 당조성은 glucose, mannose, galactose와 fucose가 7:3.2:2:1의 몰비로 구성되어있었다. Bacillus sp. PS-12로부터 분리된 다당류 PS-12를 이용하여 면역증강효과를 확인하였다. TNF-${\alpha}$ 및 lL-6 측정은 RAW264.7 대식세포주를 사용하였으며 cytokine 정량을 위하여 ELISA kit를 이용하였다. RAW264.7 세포주에 대한 PS-12의 세포독성을 확인하기 위하여 세포독성이 10% 미만을 나타내는 농도인 2 ${\mu}g$/ml을 PS-12의 최대농도로 측정하였다. PS-12는 ${\mu}g$/ml에서 TNF-${\alpha}$를 정상세포보다 50배 이상 높은 수치로 생산하였다. 또한 lL-6의 생산을 농도 의존적으로 증가시켰다. 이러한 결과로부터 PS-127가 면역세포에 대해 세포독성을 거의 나타내지 않는 농도에서 대식세포로부터 TNF-${\alpha}$와 11-6의 cytokine 생산을 함으로써 면역증강효과를 나타낸다는 것을 확인하였다.

• 한국식생활문화학회지
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• 제30권6호
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• pp.797-803
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• 2015

Atopic dermatitis (AD) is usually caused by foods such as wheat, egg, milk, and peanuts, leading to common health problems in early childhood with complications like urtication. The aim of this study was to evaluate ethanol extracts of rice and rice snacks concentrated until the ethanol was completely eliminated and hot-air dried. In vitro analyses were carried out using murine macrophage RAW 264.7 cells. We measured cytotoxicity, nitric oxide (NO) production, and inflammatory cytokine level. The NO level of the cells exposed to lipopolysaccharide (LPS) was significantly reduced by rice and rice snack extracts. $TNF-{\alpha}$ level decreased in contrast to the LPS group, although a significant difference was not observed. On the other hand, IL-6 significantly decreased in both rice and rice snack extracts in a dose-dependent manner. The results of the present study suggest that rice and rice snack decreased NO and inflammatory cytokine levels. Therefore, rice could be useful as a raw material for relieving child atopic dermatitis caused by snacks made from wheat.

• 생명과학회지
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• 제28권2호
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• pp.216-222
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• 2018

Desmodium heterocarpon은 콩과에 속하는 덩굴식물로 주로 한국, 일본 등의 아시아 국가에 분포되어 있다. 본 연구에서는 식물에 존재하는 신규 기능성 소재 개발의 일환으로 Desmodium heterocarpon 에탄올 추출물(DHEE)의 항산화 및 항염증 생리활성을 DPPH 라디칼 소거능, ROS 소거능, NO 생성 억제능 및 관련 단백질 발현을 통해 분석하였다. 먼저 DHEE의 항산화능을 DPPH 라디칼 소거능을 통해 분석한 결과 높은 소거활성을 보여 DHEE가 매우 강한 항산화능을 보유함을 확인하였다. 또한 RAW 264.7 세포주에서 H2O2에 의해 유도된 ROS에 대한 DHEE의 소거능을 분석한 결과 농도의존적인 강한 ROS 소거능을 보였다. 뿐만 아니라 대표적인 항산화 효소 중 하나로 항산화능 보유 천연물에 의해 발현이 유도되는 HO-1 및 그 전사 인자인 Nrf2의 단백질 발현이 DHEE의 처리에 의해 유의적으로 증가됨을 보였다. 한편 DHEE가 LPS에 의해 유도된 NO 생성에 미치는 영향을 분석한 결과 농도 의존적인 NO 생성 저해능을 보였으며 이는 NO 생성 단백질인 iNOS의 발현 저해에서 기인함을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 DHEE의 높은 항산화능과 항염증 활성을 확인하였으며 향후 잠재적인 기능성 소재로서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 판단된다. 추후 계속적인 연구를 통해 활성 물질의 규명이 필요할 것으로 보인다.

• 대한약침학회지
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• 제6권2호
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• pp.45-56
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• 2003

Objective : The purpose of this study was to investigate the effects of Bee Venom on the lipopolysaccharide(LPS), sodium nitroprusside(SNP), hydrogen peroxide$(H_2O_2)$-induced expression inducilble nitric oxide synthetase(iNOS), tumor necrosis factor-${\alpha}$(TNF-${\alpha}$) and nuclear factor kappa B(NF-kB) in RAW 264.7 cells, a murine macrophage cell line. Method : The expressions of expression iNOS and TNF-${\alpha}$ were determined by western blotting with corresponding antibodies. The expressions of expression NF-kB was assayed by EMSA method. Results : 1. The 0.5, 1 and $5{\mu}g/mg$ of bee venom on LPS-induced expression of iNOS, the $5{\mu}g/mg$ of bee venom on SNP-induced expression of iNOS and the $1{\mu}g/mg$ of bee venom on $H_2O_2$-induced expression of iNOS compared with control were inhibited significantly. 2. The 0.5, 1 and $5{\mu}g/mg$ of bee venom inhibited significantly LPS and $H_2O_2$-induced expression of TNF-${\alpha}$ compared with control, respectively. The $0.5{\mu}g/mg$ of bee venom increased significantly SNP-induced expression of TNF-${\alpha}$ compared with control. 3. The $5{\mu}g/mg$ of bee venom on LPS-induced expression of NF-kB, the $0.5{\mu}g/mg$ of bee venom on SNP-induced expression of NF-kB and the 0.5, $5{\mu}g/mg$ of bee venom on $H_2O_2$-induced expression of NF-kB were inhibited significantly compared with control, respectively.

• 한국식품과학회지
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• 제45권2호
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• pp.206-212
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• 2013

민들레의 부위별 항산화활성을 검토하기 위하여 지상부 및 지하부의 물, 50, 70, 100% 에탄올 용액과 열수추출조건을 이용하여 얻은 추출물의 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능을 분석하였다. 민들레 지상부 및 지하부 열수추출물의 DPPH 라디칼 소거능이 가장 우수한 것으로 분석되었으며, 추출물의 DPPH 라디칼 소거력은 열수추출물 > 70% 에탄올 추출물 > 50% 에탄올 추출물 > 100% 에탄올 추출물 > 물 추출물 순으로 나타났다. 추출물의 ABTS 라디칼 소거활성을 검토한 결과 지상부 및 지하부의 추출물중 열수추출물이 가장 높은 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸 반면 물추출물은 가장 낮은 소거능을 나타내어 DPPH 라디칼 소거능을 분석한 결과와 유사한 경향을 나타내었다. 또한 항산화활성이 가장 우수한 것으로 나타난 열수추출물을 이용하여 극성별 유기용매(클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올)을 이용한 분획물을 얻어 이들의 항산화활성을 검토하였다. ABTS 및 DPPH 라디칼 소거활성, 총 페놀성화합물의 함량을 분석한 결과 에틸아세테이트 분획물의 항산화 활성이 가장 우수한 것으로 나타났으며, 에틸아세테이트 분획물을 제외한 클로로포름, 부탄올, 물 분획물의 경우 지상부 분획물이 지하부보다 라디칼 소거능이 우수한 것으로 나타났다. 각 분획물들이 RAW 264.7 대식세포주에서 LPS 처리에 의한 nitric oxide 생성에 미치는 영향을 검토하였다. 지상부 및 지하부의 에틸아세테이트 분획물이 LPS 처리에 의해 증가한 nitric oxide의 생성을 효과적으로 억제하였으며, 지상부 에틸아세테이트 분획물 $20{\mu}g/mL$ 처리시 LPS 처리에 의해 증가된 NO 생성을 약 50% 저해하는 것으로 나타났으며, 이러한 효과는 지하부 에틸아세테이트 분획물보다 우수한 것으로 분석되었다. 본 연구는 민들레 부위별 다양한 추출조건에서 획득한 추출물들의 총 항산화활성을 비교분석하여 제시함으로써 소재개발을 위한 추출조건을 설정하는데 활용될 수 있을 것으로 판단되며, 또한 각 분획물들의 총 항산화활성 및 RAW 264.7 대식세포주를 이용하여 LPS 처리에 의해 증가된 nitric oxide의 생성억제능을 비교분석하여 제시함으로써 기능성 소재개발에 있어서 기초자료로 활용 할 수 있을 것으로 판단된다.

• 대한본초학회지
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• 제32권2호
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• pp.77-85
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• 2017

Objectives : This study aimed to investigate the unknown mechanisms behind the anti- inflammatory activity of Hyeonto-dan(HT) 70% ethanol extract on LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Methods : Cells were treated with Hyeonto-dan 1 h prior to addition of 200 ng/mL of LPS. Cell viability was measured by the MTS assay. Nitric oxide levels were determined by the Griess assay. $PGE_2$ were measured using EIA kit. Pro-inflammatory cytokine production was measured by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The expression of COX-2, iNOS, and MAPKs was investigated by Western blot, qRT-PCR. $NF-{\kappa}B$/p65 localization and interaction of the TLR-4 receptor with LPS was examined by immunofluorescence assays. Results : Hyeonto-dan had no cytotoxicity at the measured concentration. Hyeonto-dan inhibited NO production and pro-inflammatory cytokines such as IL-6, $TNF-{\alpha}$, and PGE2 as well as the protein and mRNA expression of iNOS and COX-2. Moreover, Hyeonto-dan inhibited the interaction between LPS and TLR-4 in murine macrophages. It suppressed phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK 1/2), c-jun N-terminal kinase (JNK 1/2) and p38. Finally, it inhibited translocation of $NF-{\kappa}B$ in response to competitive LPS. Conclusions : Based on the results of this study, Hyeonto-dan inhibited the binding of TLR-4 receptor to LPS and inhibited the phosphorylation of extracellular signaling pathway MAPKs. These inhibitory effects are thought that the amount of $NF-{\kappa}B$ delivered to the nucleus was decreased and the inflammatory reaction was prevented by decreasing the production of LPS-induced $PGE_2$, NO, IL-6 and $TNF-{\alpha}$.

• 대한본초학회지
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• 제33권2호
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• pp.19-28
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• 2018

Objectives : Epimedii Herba has been frequently used in Korean Traditional Medicine to treat impotence, spermatorrhoea, exophthalmos, and forgetfulness. Present study investigated anti-inflammatory effects of Epimedii Herba water extract (EWE) and attempted to elucidate molecular mechanisms involved. Methods : To explore anti-inflammatory effects of EWE, RAW 264.7 cells, a murine macrophage cell line, were pretreated with $10-100{\mu}g/m{\ell}$ of EWE, and then subsequently exposed to $1{\mu}g/m{\ell}$ of lipopolysaccharide (LPS). Levels of nitric oxide (NO), interleukin-6, $interleukin-1{\beta}$, and tumor necrosis $factor-{\alpha}$ were monitored in the medium. Expression levels of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 were determined by immunoblot and real-time PCR analyses. Signaling pathways related with nuclear $factor-{\kappa}B$ ($NF-{\kappa}B$) and mitogen-activated protein kinases were monitored to elucidate molecular mechanisms involved. Finally, the role of three flavonoid compounds in EWE on LPS-mediated NO production were investigated. Results : In conditioned medium, pretreatment of EWE ($100{\mu}g/m{\ell}$) significantly inhibited LPS-stimulated NO and pro-inflammatory cytokine production. In addition, EWE attenuated the expressions of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 by LPS. EWE prevented the phosphorylation and degradation of inhibitory ${\kappa}B{\alpha}$, nuclear translocation of $NF-{\kappa}B$, and DNA binding of $NF-{\kappa}B$, while EWE did not change the phosphorylation of mitogen-activated protein kinases by LPS. Moreover, icariin, icaritin, and quercetin partly, but significantly, inhibited the LPS-stimulated NO production. Conclusions : These results suggest that EWE has an ability to prevent inflammation in macrophages through inhibition of $NF-{\kappa}B$ signaling pathway.

• 한국식품과학회지
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• 제37권6호
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• pp.983-988
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• 2005

제주자생 재래감귤종이 하나인 진귤(Citrus sunki Hort. ex Tanaka)의 과피는 전통적으로 매우 중요한 한약재 성분으로 사용되어 왔으나 그 약리학적 효과에 대해서는 과학적인 분석이 되어 있지 못하다. 본 연구에서는 진귤과피추출물과 과피발효 추출물의 1차 항산화활성을 검색하여 발효 후 추출물이 더욱 효과적인 활성을 가지고 있는 사실을 발견하였고 이를 바탕으로 대식세포인 Raw264.7세포에서 산화질소의 생성, 염증유발 단백질(NOS2, Cox-2)의 수준을 억제할 뿐 아니라 동 세포의 생존능을 개선시키는 결과를 얻었다. 그러나 상피세포유래 세포주인 CHO-IR 세포 및 사람의 간암세포주인 HepG2 세포의 생존능은 반대로 발효후 추출물에 의해 억제되는 것으로 나타났다. 이러한 결과들은 진피의 발효후 추출물이 대식세포의 항염증활성을 증가시키는 반면, 종양세포의 증식을 억제하고 세포사멸을 유도하는 다양한 약리효과를 가지고 있음을 의미한다.

• 생명과학회지
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• 제19권4호
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• pp.479-485
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• 2009

본 연구는 BS 열수추출물의 항염증 활성을 조사하기 위하여 LPS로 자극된 RAW 264.7세포에서 세포가 방출하는 NO, $PGE_2$, COX생성량과 염증성 사이토카인인 $IL-1{\beta}$, IL-6, $TNF-{\alpha}$의 생성량의 변화를 조사하여 항염증성 기능의 유무와 정도를 알아보고자 하였다. 마우스 대식세포인 RAW 264.7에 대한 BS추출물의 농도별(0, 50, 100, $200\;{\mu}g/ml$) 세포독성을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하여 $200\;{\mu}g/ml$ 이하의 농도에서는 세포독성이 낮아 기본적으로 세포의 생존율에 영향을 주지 않는다는 사실을 알 수 있었다. RAW 264.7세포에 BS추출물을 전처리하고 LPS를 18시간 동안 처리한 후 NO의 생성량은 정상세포에 비하여 약 8배 이상 증가되었으며, BS추출물을 $100\;{\mu}g/ml$ 농도 이상으로 처리한 실험군에서는 농도의존적으로 nitrite의 생성량이 유의하게 감소되었다. $PGE_2$의 생성량은 LPS처리에 의하여 정상세포에 비하여 약 14배 이상 증가되었으며 BS추출물을 100 및 $200\;{\mu}g/ml$의 농도로 처리한 실험군에서는 농도의존적으로 유의하게 각각 55.1%, 39.9% 감소되었다. COX의 생성량은 LPS처리에 의하여 정상세포에 비하여 약 5.6배 증가되었으며 $100\;{\mu}g/ml$ 이상의 농도처리군에서는 농도의존적으로 유의하게 감소되었다. LPS처리후 $IL-1{\beta}$, IL-6, $NF-{\alpha}$의 생성량은 정상세포에 비하여 급격하게 증가되었으며, 여러 농도(50, 100, $200\;{\mu}g/ml$)의 BS추출물로 처리한 실험군에서는 각각 아무런 처치를 하지 않은 세포에 비하여 농도의존적인 각각의 생성량이 감소되었다. 특히 $100\;{\mu}g/ml$ 농도 이상의 BS처리군에서는 모두 통계학적 유의성이 인정되었다. 이러한 결과는 BS에서 염증억제 효과가 있음을 in vitro 연구에서 확인할 수 있었고, 향후 유효성분 추출을 통한 항염증 물질의 연구 또는 예방하거나 치료할 수 있는 염증 억제 성분의 분리 및 그 작용기전 연구에 중요한 기초 자료가 될 것이라 사료된다.