• 미생물학회지
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• 제39권4호
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• pp.223-229
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• 2003

2,4,6-Trinitrotoluene (TNT)을 분해할 수 있는 Stenotrophomonas sp. OK-5에서 분리한 NAD(P)H-nitroreductase의 특성을 조사하였다. 먼저 ammonium sulfate precipitation, DEAE-sepharose, 그리고 Q-sepharose 등의 일련의 정제 과정을 통하여 NAD(P)H-nitroreductase을 분리정제하였다. 분취기로부터 얻어진 시료로부터 NAD(P)H-nitroreductase의 효소활성을 가지는 3개의 다른 fractions (I, II 및 III)이 탐침되었다. NAD(P)H-nitroreductase의 fractions I, II, 그리고 III의 비활성(specific activity)은 각각 5.06 unit/mg, 4.95 unit/mg, and 4.86 unit/mg이었으며, crude extract와 비교하여 각각 10.5배, 9.8배, 8.9배 이상 농축되었다. 이 실험에서 이들 3개의 fractions 가운데, fraction I이 가장 높은 비활성을 나타내었다. NAD(P)H-nitroreductase (fractions I, II 및 III)의 효소활성에 영향을 미치는 몇 가지 요인을 조사하였다. 모든 NAD(P)H-nitroreductase (fractions I, II 및 III)의 최적 온도는 30$^{\circ}C$이었으며, 최적 pH는 약 7.5이었다. 4Ag^+, Cu_2^+, Hg_2^+$ 등의 금속이온은 약 80%의 효소활성을 저해하였으나, $Mn_2^+ 이나 Ca_2^+$의 첨가 시에는 약 30~40% 정도의 활성이 감소되었다. 그러나 $Fe_3^+$은 이들 효소의 활성을 증진시켰다. SDS-PAGE에 의해 측정된 NAD(P)H-nitroreductase의 fractions I, II 및 III의 분자량은 모두 약 27 kDa임이 확인되었다.

• 생명과학회지
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• 제17권5호
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• pp.625-633
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• 2007

알긴산분해효소(EC 4. 2. 2. 3)를 균체외로 생산하는 새로운 방선균을 전라남도 완도의 연안토양으로부터 분리하고 이 균주를 Streptomyces sp. MET 0515라 명명하였다. 이 균주가 생산하는 균체외 알긴산분해효소를 아세톤 침전, 음이온 교환 크로마토그래피(Q-Sepharose and DEAE-Sepharose), 젤 크로마토그래피(Sephacryl S-200 HR gel filtration chromatography)를 이용하여 정제하였다. 이 효소의 최적 활성 온도과 pH는 각각 $70^{\circ}C$와 pH 7.5이고, 온도 안정성은 $0-50^{\circ}C$, pH 안정성은 pH 6.0-9.0였다. 이 효소는 $Mn^{2+}$ 이온 첨가시에는 활성이 증가하였으며 1mM $Fe^{3+}$, 1mM EDTA, 1mM $Zn^{2+}$ 이온 첨가시에는 활성이 억제되었다. 또한 이 효소는 poly-alpha 1,4-L-guluronate와 poly-beta 1,4-D-mannuronate두 종류의 기질에 대하여 활성을 나타냈다. 따라서 본 효소는 다른 미생물 기원의 효소와 비교해 볼 때 Streptomyces sp.가 생산하는 첫번째 효소로 인정되었다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제18권6호
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• pp.648-653
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• 1997

Acetolactate synthase was purified from Escherichia coli MF2000/pTATX containing Arabidopsis thaliana acetolactate synthase gene. Purification steps included DEAE cellulose ion exchange column chromatography, phenyl sepharose hydrophobic column chromatography, hydroxylapatite affinity column chromatography, and Mono-Q HPLC. Molecular weight was estimated to be ∼65 KDa and purification fold was 109 times. The enzyme showed a pH optimum of 7 and the $K_M$ value was 5.9 mM. The purified enzyme was not inhibited by any of the end products, valine, leucine, and isoleucine.

• BMB Reports
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• 제28권4호
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• pp.306-310
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• 1995

A Mono Q HR 5/5 anion-exchange column with a FPLC system was used to separate exogenously expressed calmodulin from endogenous tobacco calmodulins. Transgenic tobacco calmodulins were purified by fractionation with ammonium sulfate, precipitation with sulfuric acid and hydrophobic chromatography on phenyl-Sepharose CL-4B. The purified calmodulins were chromatographed in the FPLC using the column. This method was selected because of the slight differences in the net charge of foreign and endogenous plant calmodulins due to amino acid sequence differences. By this approach, the exogenously expressed calmodulin was isolated from endogenous tobacco calmodulins. The isolated calmodulin was characterized by amino acid composition analysis as well as methylation analysis.

• 한국동물학회지
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• 제30권3호
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• pp.219-230
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• 1987

Two allelotypes of sMDH variation, namely A and B type, are known in the dark chub, Zacco temmincki. We attempted to clarify their probable functional enzymatic difEerence with temperature change. Two types of sMDH were purified separately by successive chromatography on DEAE-cellulose and blue 2-Sepharose amEnity columns, and their ensymatic activities to temperature change were measured. Q10 of Vmax and Vmax/Km were significantly different between two types, i.e. A type being higher in Q10 values than B type. Based on the result it is assumed that A type may be more sensitive to temperature change than B type.

• Journal of Microbiology
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• 제39권1호
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• pp.67-73
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• 2001

A validation study was conducted to evaluate the efficacy and mechanism of the cryo-precipitation, monoclonal anti-FVIIIc antibody (mAb) chromatography, Q-Sepharose chromatography, and lyophilization steps involved in the manufacture of high purity factor VIII (GreenMono) from human plasma, in the removal and/or inactivation of hepatitis A virus (HAV). Samples from the relevant stages of the production process were spiked with HAV and subjected to scale-down processes mimicking the manufacture of the high purity factor VIII concentrate. Samples were collected at each step and immediately titrated using a 50% tissue culture infectious dose (TCID$\_$50/) and then the virus reduction factors were evaluated. HAV was effectively partitioned from factor VⅢ during cryo-precipitation with the log reduction factor of 3.2. The mAb chromatography was the most effective step far removal of HAV with the log reduction factor of $\geq$4.3. HAV infectivity was not detected in the fraction of factor VⅢ, while most of HAV infectivity was recovered in the fractions of flow through and wash during mAb chromatography. Q-Sepharose chromatography showed the lowest efficacy for partitioning HAV with the log reduction factor of 0.7. Lyophilization was an effective step in inactivating HAV with the log reduction factor of 2.3. The cumulative lag reduction factor, $\geq$10.5, achieved for tile entire manufacturing process was several magnitudes greater than the potential HAV load of current plasma pools.

• 한국식품영양학회지
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• 제9권4호
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• pp.404-408
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• 1996

콩 단백질은 글리시닌과 $\beta$-콘글리시닌을 주요 성분으로 한다. 영양성 및 가공 특성을 개선하기 위하여 유전자공학적인 방법을 시도하였다. 즉 $\beta$-콘글리시닌의 $\beta$-서브유니트를 유전자 클로닝하고 대장균에서 발현시켰다. 발현벡타는 pET 21d이며 플라스미드를 구축하여 E. coli BL21(DE3)에 형질전환 시켰다. 발현된 단백질은 균체 전체 단백질의 20%이며 가용화 상태로 축적되었다. 축적 발현단백질은 천연의 $\beta$-콘글리시닌과 동일항 트리머로 확인되었다. 정제는 황산암모늄 20~40% 분별침전, Q-Sepharose 이온교환크로마토그라피, Butyltoyopearl 소수성 컬럼크로마토그라피로 하였다. 이것은 콩 단백질의 특성을 규명하는데 필요한 대장균 대량 발현계를 확립하고 발현 단백질의 정제방법을 확립한 결과이다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제13권6호
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• pp.897-905
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• 2003

Phospholipase D (PLD) and ADP-ribosylation factor (ARF) were partially purified on a series of column chromatography, and their biochemical properties were characterized to understand the regulatory mechanism of PLD activation by ARF protein in the antigen-induced immune responses in guinea pigs. Heparin Sepharose and high-Q Sepharose column chromatographies were used for the purification of PLD, and Sephadex G-25, DEAE Sephacel, Source 15 PHE (HIC), Superdex-75, and Uno-Q column chromatographies were used for the purification of ARF. The purified PLD and ARF proteins were identified with anti-rabbit PLD- or ARF-specific antibodies, showing about 64 or 85 kDa for the molecular mass of PLD and 29 or 35 kDa for the sizes of ARF. Partial cDNA of ARF3 was cloned by RT-PCR in guinea pig lung tissue and its nucleotides and amino acids were sequenced. Guinea pig ARF3 showed 92% of nucleotides sequence identity and 100% of amino acid sequence homology with human ARF3. The ARF-regulated PLD activity was measured in the oleate or ARFs-containing mixed lipid vesicles. The purified and recombinant ARF (rARF) activities were assessed with the $GTP{\gamma}S$ binding assay. The PLD activity was induced by oleate in a dose-dependent manner. The purified ARF and recombinant ARF3 increased PLD activity in guinea pig lung tissues. These data show that the activity of membrane-bound PLD can be regulated by the cytosolic ARF proteins, suggesting that ARF proteins in guinea pig lung can act as a regulatory factor in controlling the PLD activity in allergic reaction.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권5호
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• pp.420-426
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• 1998

Glutamic acid의 분해능이 뛰어난 aminopeptidase를 생산하는 세균을 토양으로부터 분리하였다. 이 균은 형태적 생리적 특성으로부터 Bacillus licheniformis로 동정되었다. 이 균을 최적 배지에 접종하고 37$^{\circ}C$에서 진탕배양한 후 균이 생산한 aminopeptidase를 ammonium sulfate 침전, Phenyl Sepharose CL-4B, Resource Q, Superose 12HR column을 통해 분리하여서 20.6%의 수율로 17.6배 정제된 glutamyl p-nitroanilide을 기질로 했을 때 9.2unit/mg의 순수효소를 얻었다. SDS-PAGE와 Native-PAGE로 부터 이 효소의 분자량이 42,000Da와 22,000Da으로 구성된 헤테로다이커로 약 64,000Da임이 밝혀졌고 효소의 등전점은 5.2로 나타났다. 이 효소의 반응 최적 온도는 55$^{\circ}C$, 반응최적 pH는 8.0이었고, EDTA와 1,10-phenanthroline에 의해서 효소활성이 저해되는 metalloenzyme으로 판명되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제30권5호
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• pp.1169-1178
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• 1998

무화과 PE를 추출하여 ammonium sulfate로 분획 투석한 후 Q-Sepharose column 및 CM-cation exchanger column을 이용한 chromatography와 HPLC에 의해 1개의 음이온성 PE와 2개의 양이온성 PE로 분리되었으며, 이들은 모두 전기영동상에 분자량 27,000정도의 밀접한 두 개의 band로 나타난 부분 정제된 단백질이었다. 이 효소 단백질들은 보관 중에 활성을 급격히 상실되므로 현실적인 이용성을 고려하여 분말화한 시료 현탁액을 이용한 in situ PE의 특성을 조사하였다. 그 결과 분말 시료는 냉동 저장뿐 만 아니라 $5^{\circ}C$에서도 장기간 저장할 수 있었으며, 최적 pH는 8.5, 최적온도는 $50^{\circ}C$이였고, 활성화 에너지는 7,671 cal $mol^{-1}\;K^{-1}$ 이었으며 $55^{\circ}C$까지는 열 안정성을 유지하였다. 또한 $0.2{\sim}0.4$ M NaCl에서 활성이 촉진되었으며 PE의 용출은 0.8 M 이상의 NaCl 에서 효과적이였고 $0{\sim}1.0$ M NaCl까지의 범위에서는 특별히 안정성에 영향을 미치지 않았다.