국내 20개 지역의 소나무재선충병에 감염된 소나무와 잣나무에서 분리된 소나무재선충으로부터 총 110개의 세균을 분리하여 동정한 결과 Cedecea neteri(64균주)가 가장 높은 빈도로 검출되었으며, 다음으로 Ewingella americana(21균주), Pseudomonas sp.(15균주), Flavobacterium sp.(8균주), Rahnella aquatilis (2균주) 순으로 분리되었다. 분리된 세균의 phytotoxin 생성능을 조사한 결과 Pseudomonas sp.(Ba2) 세균은 해송 유묘에 갈변과 고사를 유발하였다. 21개의 항생물질을 이용하여 분리된 3개의 세균, Pseudomonas sp.(Ba2), E. ameircana(Ba4), C. neteri(Ba10)에 대한 감수성 조사 결과 carbenicillin, doxcycline, tetracycline에서 생장억제 효과가 높게 나타났다.
A marine bacterium which produces extracelluar agarase was isolated from sea water. Isolated strain was identified as Pseudomonas sp. by the morphological and biochemical properties (1). HindIII restriction fragment of 3.2 kb from Pseudomonas genomic DNA was cloned into pUC19 to obtain recombinant plasmid pJA1 which enables E. coli JM83 to produce agarase. Most of agarase produced in E. coli was secreted into the culture medium. The enzyme (pJA1) showed the highest agarase activity during the stationary phase (20 hrs) of E. coli. The optimum temperature and pH were 40$\circ$C and 7.8, respectively. Restriction gene map anlaysis revealed that it has different restriction pattern with three kind of agarase gene reported.
Fro the purpose of producing glouse from cellobiose or oligo saccharide and obtaining genetic information of beta-1,4-glucosidase gene, alpha beta-1,4-glucosidase gene of Pseudomonas sp. LBC505, potent cellulase complex and xylanase producing strain, was cloned in Esherichia coli and Bacillus subtilis into pUC19 and pBD64, respectively. Recombinant plasmid pGL1 contained 1.2kb EcoRI fragment was isolated from transformants forming blue color around colony on LB agar plate containing 20 ng/ml of 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-glucopyranoside(X-glu) and ampicillin.
Metal ions contamination may inhibit microorganisms involved in the biodegradation of organic compounds and affect biodegradation rates. Therefore, it is likely that bioremediation of xenobiotics-contaminated soils and waste will require inoculation with efficient biodegrading microbial communities, with capabilities of being resistant to heavy metals as well. Two different transconjugants (Pseudomonas sp. KMl2TC and P. aeruginosa TC) were constructed by conjugation experiments. Results on MIC, induction and growth inhibition strongly indicated that arsenic-resistant plasmid, pKM20, could be mobilized, and the newly acquired phenotype of pKM20 was not only expressed but also well regulated, resulting in newly acquired resistances to $As^{5+},\;As^{3+},\;and\;Sb^{3+} in\;addition\;to\;Cd^{2+},\;Zn^{2+},\;and\;Hg^{2+}$. The phenol- degradation efficiencies of Pseudomonas sp. KMl2TC were maintained significantly even at high heavy metal concentrations at which these efficiencies of P. aeruginosa TC were completely impaired. The results in this study on the effects of heavy metals on phenol degradation, especially after conjugation, are the first ever reported. All the results described in this study encourage to establish a goal of making "designer biocatalysts" which could degrade certain xenobiotics in the area contaminated with multiple heavy metals.
해양으로부터 alginate lyase분해능이 있는 Pseudomonas sp.을 분리하여 이 균으로부터 alginate lyase 유전자를 E. coli에 cloning 하여 재조합 alginate lyase의 특성을 검토하였다. 재조합 alginate lyase는 E. coli에서 $50\%$ 이상이 expression되었다. 또한 생산된 재조합 alginate lyase는 세포외로의 분비가 없었으며, 전자현미경으로 확인한 결과 대부분이 inclusion body를 형성하지 않고 세포질내에서 soluble한 형태로 존재하고 있는 것으로 나타났다. 활성을 나타내는 최적 조건은 온도 $20^{\circ}C$, pH 7.0으로 보여주고 있으며 기질에 대한 Km값은 $0.4\%$, Vmax는 625 unit/mg이었다.
김치에서 분리한 Pediococci를 동정한 결과 Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidilactici 및 Pediococcus halophilus의 세종으로 밝혀졌다. 이 Pediococci의 미생물 생육저해 작용을 조사한 결과 P. pentosaceus는 모두 Streptococcus faecalis와 Pseudomonas sp., P20에 대하여 생육저해작용을 나타내었다. P. acidilatici는 S. faecalis와 Vibrio parahaemolyticus의 생육을 저해하였으나 P. halophilus는 4종의 test organism에 대하여 저해작용이 없었다. 이들 Pedicocci는 균주에 따라 한개로 부터 일곱개의 plasmid DNA를 가지고 있으며 그 분자량은 약 1 Mdal에서부터 약 60 Mdal 사이의 여러 크기의 plasmid DNA가 존재함이 밝혀졌다.
부패한 나무, 퇴비, 제지공장의 폐지 및 폐수 등으로부터 분리한 300여 종류의 섬유소 분해균 중 xylanase 활성이 다른 균주에 비해 비교적 높았던 33번 균주를 균의 형태학적, 생화학적 특성과, 균체 지방산 조성에 의하여 Pseudomonas sp.로 동정하였다. Xylanase 활성의 최적 온도외 최적 pH는 각각 $50^{\circ}C$와 5.5이었고, 효소의 안정성은 $45^{\circ}C$ 이하의 온도와 pH 5.0에서 7.0 사이에서 유지되었다. 이 균주가 생산하는 xylanase는 효소반응분해물의 paper chromatography에 의하여 주로 exo-type의 xylanase임이 밝혀졌다.
본 연구는 단일 탄소원인 포도당으로부터 PHA를 생산하는 공시균 Pseudomonas sp. HJ의 유가배양 을 검토함으로써, PHA 대량생산을 위한 기초자료 를 얻는데 그 목적을 두었으며 그 결과는 다음과 같다. U 발효조를 이용하여 배양시 교반속도 4 400rpm, 통기량 2vvm, 종균 배양시간 18 시간 및 종균 접종량 5%(v/v)일때 최적 생육을 나타내었다. 공시균 Pseudomonas sp. HJ는 용존산소의 결핍 에 의해서 PHA 축적율이 향상되지 않았으며, P PHA 생산단계에 충분한 수준으로 용존산소를 유지 시켜 주어야 함을 알 수 있었다. 공시균 Pseudomo7 nas sp. HJ를 회분배양했을 때 24시간만에 $6.251g/\ell$의 건조균체량과 20% 의 PHA 축적율을 나타내었으며, constant feeding fed-batch culture로 배 양 45시간만에 최고$33.24g/\ell$의 건조균체량과 48.9%의 PHA 축적율을 나타내었다. 또한 intermitt tent feeding fed-batch culture로 공시균 Pseu domonas sp. HJ를 배양했을때, 배양 45시간만에 $37.89g/\ell$의 건조균체량과 53.5%의 PHA 축적율을 나타내였다.
충북 청주시의 공단폐수 유입지로부티 탈질화에 의한 페놀분해 세균이 분리되었다. 분리된 균의 형태적, 생화학적 및 생리학적 특성을 분석한 결과 Pseudomonas sp.로 판명되었고 HL100으로 명명하였다. 분리된 균은 nitrate가 최종전자 수용체로서 공급되는 경우 페놀을 단일 탄소 및 에너지원으로 이용하였다. 배지에 첨가된 nitrate가 nitrite로 환원되면서 3mM의 페놀을 약 110시간만에 완전히 분해하였으며 관찰된 최대 doubling time은 20시간이었다. 적절한 조건에서 nitrate로부터 $N_2$를 생성하는 능력을 보여 분리된 균의 경우 탈질작용의 전과정을 수행할 수 있는 것으로 확인되었다. 최적 생장온도와 pH는 각각 37$^{\circ}C$와 7.0으로 판명되었으며 탈질화에 의한 생장시 toluene을 탄소원으로 이용하였지만 Xylene과 benzene은 이용하지 못하였다.
본 연구에서는 poly (3-hydroxyalkanoate) (PHA)의 생산 비용을 줄이기 위해, 토양에서 분리된 균주 Pseudomonas sp. EML8을 이용하여 폐 튀김유(waste frying oil, WFO)를 단일 탄소원으로 하여 균주의 최적 생장 및 PHA의 생합성 조건을 확립하였다. WFO를 단일 탄소원으로 이용하여 Pseudomonas sp. EML8에 의해 생합성된 PHA를 gas chromatography (GC)와 GC mass spectrometry로 분석한 결과, 7.28 mol% 3-hydrxoyhexanoate, 39.04 mol% 3-hydroxyoctanoate, 37.11 mol% 3-hydroxydecanoate 및 16.58 mol% 3-hydoryxdodecanoate의 단량체로 이루어진 medium-chain-length PHA (mcl-PHAWFO)라는 것을 확인하였다. 플라스크로 배양한 결과, Pseudomonas sp. EML8의 최대 건조세포중량(dry cell weight, DCW) 및 mcl-PHAWFO의 최대 생산수율(g/l)은 WFO 20 g/l, (NH4)2SO4 0.5 g/l, pH 7 및 25℃의 조건에서 확인되었다. 이 결과를 바탕으로 3 l 발효기를 이용하여 48시간 배양한 후에 가장 높은 DCW, mcl-PHAWFO의 함량 및 mcl-PHAWFO의 생산수율(3.0 g/l, 62 wt% 및 1.9 g/l)을 얻었다. 대조군인 신선한 튀김유(fresh frying oil, FFO) 20 g/l를 탄소원으로 사용하여 이와 유사한 DCW, mcl-PHAFFO의 함량 및 mcl-PHAFFO의 생산수율(2.7 g/l, 62 wt%, 1.6 g/l)을 확인했다. 겔 투과 크로마토그래피 분석을 통해 mcl-PHAWFO 및 mcl-PHAFFO의 평균 분자량이 165-175 kDa인 것을 확인했으며, 열중량을 분석한 결과, mcl-PHAWFO 및 mcl-PHAFFO는 각각 260 및 274.7℃의 분해온도값을 보여주었다. 결론적으로 본 연구에서는 Pseudomonas sp. ML8과 WFO는 mcl-PHA의 생산을 위한 새로운 균주와 탄소원으로서의 사용 가능성을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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