• Journal of Plant Biology
• /
• 제29권1호
• /
• pp.11-18
• /
• 1986

Protopasts were isolated from cultured cells of potato (Solanum tuberosum L.) tuber tissue. The ability of callus formation from the culture cells was higher in cultivars Dejima and Superior than in Shimabara and Irish Cobbler on Lam's medium. Therefore, the former was used as sources for protoplast isolation. Friable calli were transferred to liquid media and cells in exponential phase were used for protoplast isolation. In both of Dejima and Superior, the yield of protoplasts was high in the enzyme solution of 2% Onozuka cellulase and 1% macerozyme. Also, viability of isolated protoplasts was very good. Thus, it seems that these protoplasts would be applicable to various aims of research.

• 한국식물병리학회지
• /
• 제3권2호
• /
• pp.124-130
• /
• 1987

수도 도열병균(Pyricularia oryzae)의 균사체로부터 다량의 원형질체의 분리 및 세포벽 재생을 하기 위하여 필요한 몇가지 조건을 선발하였다. 나출을 위하여 기본용액으로 0.02M potassium phosphate buffer와 pH 5.2, 0.6M KCl로 삼투압을 조절하였고 분해효소는 ml당 각각 20mg Cellulase R-10, 5mg Macerozyme $-10, 10mg Driselase를 사용하였는데 각각의 단독처리구보다 3가지 효소의 복합처리구에서 원형질체 나출 정도가 우수하였다. 또한 선발된 복합효소액에 2일간 액체배양된 어린 균사체를 3시간, $30^{\circ}C$ 항온기에서 진탕했을 때 가장 많은 원형질체가 분리되었다. 원형질체로부터 세포벽의 재생은 순수 정제한 원형질체를 0.2M potassium phosphate와 0.6M KCl을 삼투압을 조절한 감자한철배지에 접종시켜 가장 높은 재생율을 얻을 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제16권2호
• /
• pp.156-162
• /
• 1988

섬유소 분해효소를 생산하는 P. verruculosum F-3 의 세포융합에 관한 연구의 일환으로 균사체로부터의 원형질체 형성과 재생 최적조건을 검토하였다. 세포벽 분해효소로 유효한 각종시판효소제제중 0.5%(w/v) Novozym 234가 가장 효과적이었고 PDY 배지로 3$0^{\circ}C$ 20시간 배양한 균사체 400mg을 3$0^{\circ}C$ 1시간 반응시 가장 많은 원형질체가 형성되었다. 원형질체 형성을 위한 최적 삼투압 조절제는 0.7M sorbitol(pH5.6)이었고 원형질체 재생을 위한 최적 삼투압 조절제는 0.6M MgSO$_4$(pH 5.6)이었으며 RCM에서의 재생율은 4.6~27.8%였다. 원형질체를 RLM에 배양시 균사체로 환원되는 형태적 변화가 관찰되었다.

• 미생물학회지
• /
• 제22권1호
• /
• pp.49-56
• /
• 1984

Novozym 234에 의한 K. fragilis와 C. pseudotropicalis의 원형질체 형성과 재생에 관한 연구를 하였다. intact cell을 원형질체로 전환시키는데 정지기의 세포보다 대수기에 있는세포가 효과적이었으며 osmotic stabilizer로는 $(NH_4)_{2}SO_4$가 두 종 똑같이 원형질체 형성이나 재생에 있어서 적합했고 최적 효소농도는 K. Fragilis에서는 3mg/ml, C. pseudotropicalis에서는 1~3mg/ml이었다. 반응 후 관찰된 세포 중의 원형질체 형성 수율은 K. fragilis에서 약 95%, C. pseudotropicalis에서 약 100%였으나 원형질체의 재생은 Glusulase와 비교해 볼 때 매우 낮았다. 그러나 세포 이물질이 없는 원형질체를 얻는데는 Novozym 234가 적합한 것 같다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제21권1호
• /
• pp.23-28
• /
• 1994

Nicotiana tabaccum 'Xanti', Petunia hybrida 'Blue Star' 그리고 Chrysanthemum morifolium 'Baeckwang'을 공시하여 엽조직 유래의 mesophyII protoplast(MP)와 paraveinal mesophyII protoplast (PVMP) 간의 세포 활성을 조사하기 위하여 urea 투과성을 측정하였다. 아울러 엽육 조직에서 원형질체 나출을 위한 각종 효소제를 처리하고 경과 시간별로 관찰했으며, 나출 원형질체로부터 식물체 재생을 위한 NAA와 thidiazuron의 효과를 조사하였다. Vibratome을 이용한 엽육조직 절단방법은 엽조직의 상해를 최소화하고 조직절편도 최소 50 $\mu\textrm{m}$까지 절단할 수 있기 때문에 urea 투과성 검정과 원형질체 나출을 위한 필수적인 기술이다. 세포활성에 대한 urea투과성 측정은 공시한 3종 식물의 PVMP에서 모두 Ks=2.Ox$10^{-5}$cm/sec 정도가 MP보다 높았다. 효소혼합 용액(1.5% Cellulase R-10, l% Driselase, 0.5% Macerozyme R-10, 0.05% Pectolyase)을 4-8 시간 처리하는 것이 PVMP 나출에 유효하였다. 나출 원형체로부터의 캘러스 유기와 식물체 재생에는 2 mg/L NAA + 0.01 mg/L thidiazuron 처리구에서 가장 양호하였으며 조직별로는 PVMP에서 월등한 결과를 나타내었다. 따라서 엽조직을 대상으로한 원형질체 배양에 있어서 엽록소의 함량이 많은 MP보다는 재생력이나 세포 활성이 강한 paraveinal 엽육조직 유래의 세포를 집약적으로 나출시켜 실험재료로 이용한다면 더 높은 식물체 재생률을 얻을 수 있을 것으로 사료된다.

• Food Science and Biotechnology
• /
• 제14권4호
• /
• pp.543-546
• /
• 2005

Optimized conditions for protoplast preparation and regeneration from young hyphae of Monascus ruber were established. Heat shock treatment of spores gave rapid and synchronized germination. Spores collected from cultures grown for 7-8 days at $30^{\circ}C$ were germinated until over 70% germ tubes reached to 3-5 spore length. Enzymatic digestion of young hyphae was optimal with 50 mg/mL Glucanex in 0.1 M sodium citrate buffer containing 0.8 M mannitol as an osmotic stabilizer. Regeneration rate was around 10% when 0.8 M sorbitol was used as an osmotic stabilizer in regeneration medium. These conditions will be applied in genetic study of M. ruber that produces citrinin at high level and thus is good model strain for molecular genetic dissection of citrinin biosynthesis.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제1권4호
• /
• pp.246-250
• /
• 1991

Conditions for the production and regeneration in Lactobacillus bulgaricus protoplasts were investigated. Protoplasts of L bulgaricus strains were obtained by treatment with mutanolysin and lysozyme together in a protoplast forming buffer containing 0.02 M N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid (HEPES) (pH 7.0) and 0.5 M sucrose. High protoplast yield was obtained from cells cultured in the de Man, Rogosa and Sharpe(MRS) medium at the middle to late logarithmic growth phase. Regeneration was efficiently accomplished with a complex medium containing 1% sucrose, 20 mM $MgCl_2$, 5% gelatin, and 0.5% bovine serum albumin. The frequency of regeneration of protoplasts was 10~20% after 5 days of incubation at $30^{\circ}C$.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제7권3호
• /
• pp.169-174
• /
• 2005

The optimal culture conditions were studied for plant regeneration from mesophyll protoplasts of Solanum sisymbriifolium. Axenic seedlings of S. sisymbriifolium were used as a explant for protoplast culture. Many viable protoplasts were isolated by incubating leaf slices in an enzyme solution containing 0.25% Meicerase and 0.05% Macerozyme for 16 hr at $25^{\circ}C$ without shaking. Protoplast density of $5.0{\times}10^4\;ml^{-1}$ in Kao medium containing 5.0 mg/L NAA, 1.0 mg/L 2,4-D and 1.0 mg/L BA was optimal for colony formation. Most colonies were formed when protoplasts were cultured at $25^{\circ}C$ after initial culture at $30^{\circ}C$ for one week. On the MS agar medium with 1.0 mg/L zeatin, 38.4% of protoplast-derived calli differentiated shoots. These shoots rooted on 1/2MS medium with 5.0 g/L sucrose and 2.5 g/L gellan gum, and developed into whole plants.

• 한국자원식물학회지
• /
• 제19권3호
• /
• pp.418-421
• /
• 2006

In this study, we surveyed the influence of IOA (iodoacetamide) and media upon protoplast fusion for the efficient production of the somatic hybrid among S. sisymbriifolium and other Solanum species (S. intergrifolium and S. toxicarium). Regardless of a breed, as the IOA concentration increases, the cell division tends to decrease. As the influence of the media on the colony formation, we could get 5 colonies from the fusion of S. sisymbriifolium and IOA-treated S. integrifolium protoplast, but none was observed in other fusions. As a result of analyzing their IDH isozyme, we found a somatic hybrid in 2 objects.

• Archives of Pharmacal Research
• /
• 제16권4호
• /
• pp.300-304
• /
• 1993

Genetic transformation of streptomyces gaespitosus by plasmid plJ 702 was camied out. Optimal conditions for the protoplast preparation of streptomyces casepitosus, its regeneration, and its transformation by plJ 702 were evaluated. Addition of 2% glycine to the culture broth was optimal for protoplast yield. Formation and regeneration of protoplasts were most efficient when the mycelium were harvested at between late log and stationary growth phase. The regeneration frequency of the protoplasts was 15% when the protoplats were regenerated on R2YE agar media containing 0.5M sucrose. Under the best condition for protoplats (M.W. 4,000) treatment for 2 minutes.