• 한국자원식물학회:학술대회논문집
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• 한국자원식물학회 2003년도 심포지엄
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• pp.50-58
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• 2003

Isolation and culture of leaf protoplasts from two chilli cultivars (Capsicum annuum var. accumnatum and Bird chilli) were developed to enhance selection process in the somatic hybridization programmes. In order to isolate the protoplasts from leaves of these two chilli cultivars different incubation periods (3, 5 and 10 hours) were tested with combinations of enzyme mixtures containing cellulase and macerozyme. Leaves were incubated on three enzyme mixtures (2% cellulase + 0.4% macerozyme, 1% cellulase + 0.2% macerozyme and 0.5% cellulase + 0.1 % macerozyme in 13% mannitol) at 251oC in the dark. Three hours of incubation using 2% cellulase and 0.4% macerozyme was the best for the protoplast isolation of both chilli cultivars tested. The yield was 5 ${\times}$ 108protoplasts/ml/ g leaf tissue in both chilli varieties. It was found that in the mixed nurse method using Nagata and Takebe (NT) medium supplemented with 1.0mg/12,4-D, NAA and BAP with 0.5M mannitol and 1.2% Sea Plaque agarose is the best medium for protoplast culture. Protoplasts of Capsicum annum var. accumnatum were alive for 14 days forming cell walls and initiating cell division.

• 한국산림과학회지
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• 제73권1호
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• pp.33-42
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• 1986

현사시 (Populus alla${\times}$P. glandulosa)의 기내배양(器內培養) 엽육조직(葉肉組織)으로부터 원형질체(原形質體)의 분리(分離) 및 배양(培養)을 시험하였다. 무균(無菌)의 엽육조직(葉肉組織)을 육성(育成)하기 위한 shoot의 대량증식에는 MS기본배지에 BAP 0.4 mg/l을 첨가하였을 때 가장 증식효과가 높았으며, 원형질체(原形質體)의 분리(分離)를 위한 효소농도는 Cellulase 2%, Macerozyme 0.8%, Hemicellulase 1.2%, Driselase 2%, Pectolyase Y-23 0.05%가 가장 효과적이었다. 효소용액의 삼투압은 mannitol 0.6 M이 적합하였으며, pH는 5.6이 적절하였다. 원형질체(原形質體)의 안정성을 높이기 위하여 DTT와 MES buffer를 첨가하여 좋은 결과를 얻었다. 분리(分離)된 원형질체(原形質體)의 정제를 위해서는 부유용액(浮遊溶液)의 sucrose 농도를 0.6M로 하였을 때가 가장 적합하였으며 dextran의 첨가효과도 높았다. 본 연구의 특징은 다소 높은 농도의 효소용액을 처리하여 단시간에 원형질체(原形質體)를 분리(分離)하는 것으로서 이 방법에 의해 나출(裸出)된 원형질체(原形質體)의 배양(培養)에 있어서 반응여부를 조사한 결괴 배양 3주 후에까지도 좋은 반응을 보였다.

• 약학회지
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• 제38권6호
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• pp.696-702
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• 1994

An interspecific fusant strain, MS1, was obtained by protoplast fusion between S. peucetius subsp. caesius and S. platensis. We studied on the microbiological and cultural characteristics of the fusant MS1. In liquid culture, the viscosity of culture broth of S. peucetius increased during incubation However the fusant MS1 formed pellet like S. platensis without viscosity change. On agar medium the colony morphology of MSI resembled S. platensis but the color was similar to S. peucetius. The fermentation products of the fusant MS1 was identical with S. peucetius.

• 한국연초학회지
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• 제1권2호
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• pp.138-149
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• 1979

본 시험은 담배 신품종 육종기술확립을 위하여 효율적으로 原形質體(protoplast)를 얻을수 있는 방법과 protoplast 배양조건을 조사하였다. 1. protoplast를 효율적이며 경제적으로 얻을 수 있는 세포붕괴, 細胞模解離 酵素의 농도는 0.5% macerozyme + 2% cellulase (또는 meicellase)였다. 2. 효소처리시간은 품종간에 약간의 차이는 있었으나 4시간 이상이 필요하였으며 1인 작업량으로 보아 4시간이 가장 적합하였다. 3. 等張液을 만들기 위하여는 0.5∼0.7M의 mannitol이나 sorbitol을 이용하는 것이 좋았다. 4. 세포융합시에 Ca++ 이온의 농도는 중요하며 9mM CaCl2를 포함한 PEG용액(0.5g/ml)을 쓰는 것이 가장 효과적이었다. 5. 분리된 protoplast는 B-5 培地에서 계속분열하여 colony를 형성하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제22권6호
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• pp.311-316
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• 1995

Pelargonium aridum과 P. zonale 아속간의 체세포 잡종을 얻기 위하여 이들로부터 원형질체를 유리하여 polyethylene glycol (PEG)와 electrofusion 방법으로 융합시켰다. 원형질체는 자엽과 본엽을 550 mM sucrose, 0.7% cellulase (OnozukaR-10), 0.4% Macerozyme이 함유된 MS 배지로 유리하였다. 배양밀도는 배지 mL당 원형질체수는 6 x $10^4$이 배양에 적당하였다. Electrofusion 방식으로 융합된 원형질체는 PEG방식으로 융합된 것보다 세포분열이 덜 활발하였다. 두종간의 원형질융합체는 550mM glucose, 1~2 mg/L NAA와 0.5~l mg/L BA가 함유된 M 배지에서 배양하였을 때 캘러스를 형성하였다.

• 한국균학회지
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• 제21권1호
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• pp.1-8
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• 1993

Phytophthora capsici에서 원형질체를 형성, 재생 시키는데 관여하는 요인에 대해 조사연구하였다. 삼투압조절제로서 0.35 M $CaCl_2$가 첨가된 Novozym 234를 6-9시간 처리하면 균사체에서 원형질체가 양호하게 나출되었다. 24시간 배양한 어린 균사체에서 가장 많이 원형질체를 나출시킬 수 있었으며, 또한 Novozym 234의 농도가 진할수록 효과적으로 원형질체가 나출되었다. 원형질체를 재생시키는데는 0.4 M mannitol과 0.1 M $CaCl_2$를 혼합한 것이 삼투압 조절제이었다. 원형질체의 재생률은 모든 영양소가 첨가된 Henninger 합성배지에서 가장 높았다. 아미노산이나 ${\beta}-sitosterol$은 원형질체의 재생에 영향을 미쳐 두 영양소가 빠지면 원형질체의 재생이 억제되었다. 특히 아미노산 중 L-aspartic acid와 L-glutamic acid는 원형질체의 재생을 촉진시켰다. 그러나, 미량원소는 원형질체의 재생에 영향을 주지 않았다.

• 한국작물학회지
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• 제42권1호
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• pp.33-41
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• 1997

작물 원형질체를 배양하면서 세포의 생존과 노화 그리고 고사의 상태를 대사적으로 정확히 판단이 가능한 marker물질을 확인하고 간편한 측정법을 확립하기 위하여 일련의 연구를 수행하였던 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 담배와 벼의 원형질체를 나출하여 MS와KM-8P를 기본배지로 하여 2,4-K와 CM을 첨가하였던 바, ABA는 경시적으로 감소하였으며 CM첨가에 의해서 더 많이 감소하였다. GA$_3$, IAA, zeatin은 반대로 증가하는 경향을 나타내었다. 특히 ABA의 감소율과 zeatin의 증가율이 가장 크게 나타났다. 2. Osmoticum(mannitol)을 적정 농도 이상으로 처리하였을 때 ABA는 일시적으로 증가되었다가 감소되었고, 다른 성장 호르몬은 모두 증가폭이 농도가 증가될수록 둔화되었다. 3. Supermine 10mM과 NaCl을 처리하였을 때 담배와 벼에서 각 호르몬의 증감은 서로 반대로 나타났다. 특히 담배는 NaCl의 stress가 크게 나타났다. 그리고 배양 후반기에는 원형질체의 분열이 중지되었다. 4. 원형질체의 배지 성분을 제거하고 32$^{\circ}C$로 고온 배양에 의해서 인위적으로 노화를 촉진시켰을 때 세포의 활력은 48시간 이후에 크게 감소되었다. 세포의 활력 상실과 반비례적으로 ABA는 배양 10일까지 크게 증가되었다. 이와 반대로 성장 호르몬들은 모두 증가되지 않고 감소가 이루어졌다. 특히 zeatin의 감소가 크게 나타났다. 5. 이상의 결과에 따라서 식물 호르몬은 원형질체가 처한 환경 요인이나 부여된 어떤 조건에 따라서 민감하게 변동하고 있음을 확인하였다.

• 한국미생물학회:학술대회논문집
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• 한국미생물학회 2000년도 추계학술발표대회
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• pp.85-91
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• 2000

Aspergillus oryzae is a filamentous fungus classified in the group Aspergillaceae Ascomycetes. It is an important microorganism for industrial production of enzymes and fermented food productions. It secrets large quantities of proteins or enzymes into the culture medium which makes this organism appealing for the production of heterologous proteins. Recently Electric field-mediated transformation method, electroporation, has been applied to fungal transformation. In this study, fungal transformation was carried out by bypassing the protoplast isolation step, decreasing the culturing time and non-protoplast transformation for the increment of transformation efficiency. Transformants were obtained with electroporation in optimal condition 2,500 voltage, 1,540 ohm and 0.50 capacitance. More than 1,000 transform ants were obtained with 6-10 hrs cultured mycelia without enzyme treatment, called non-protoplast transformation.

• Journal of Plant Biology
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• 제34권1호
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• pp.19-23
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• 1991

벼의 종자로부터 embryogenic callus를 유도하고 이로부터 개체로의 재분화를 유도하였으며, embroyogenic cell suspension culture를 통하여, 이로부터 원형질체를 분리, 배양하여 embryogenic callus를 형성하였다. 또한, 분리된 원형질체를 electroporation하였을 때 생존율(viability)에 미치는 여러 요인들을 조사하였다. 원형질체의 생존율은 voltage와 capactiance가 증가할수록 감소를 보였으며, HBM buffer에서 $4^{\circ}C$로 electroporation 하였을 때 생존율에 보다 효과적이었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제38권1호
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• pp.69-76
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• 2011

This study describes the effect of myo-inositol on sustained cell division and plant regeneration from cotyledon-derived protoplast of cabbage (Brassica oleracea var. capitata). Freshly isolated protoplasts were cultured in modified Murashige and Skoog (MS) medium removed ammonia ions and containing $0.4\;mg\;l^{-1}$ thiamine HCl, $100\;mg\;l^{-1}$ myo-inositol, $2\;mgl^{-1}$ 2,4-D, $0.5\;mgl^{-1}$ BA, $30\;gl^{-1}$ sucrose and several concentrations of myo-inositol (2, 4, 6, 8, 10% (w/v)) as an osmotic stabilizer. After 3 weeks of culture in the dark at $25^{\circ}C$, the plating efficiency of cabbage protoplasts reached to $22.5{\pm}2.9%$ when cultured in modified MS medium supplemented with $2\;mgl^{-1}$ 2,4-D, $0.5\;mgl^{-1}$ BA, $30\;gl^{-1}$ sucrose and 8% (w/v) of myo-inositol at a density of $2{\times}10^5$ protoplasts/ml. Rapidly growing cell colonies after 3 weeks of culture were transferred to the same culture medium removed osmoticum. To induce shoot regeneration from calluses, calluses with about 2 mm in diameter were transferred to the MS medium containing $2\;mgl^{-1}$ BA and $0.5\;mgl^{-1}$ NAA. After further three weeks of incubation onto the medium in the light, green shoots were formed on the surface of calluses at a frequency of 30%. Upon transfer to half-strength MS basal medium, roots were formed onto the bottom of regenerated shoots without auxin treatments. These regenerated plantlets were successfully acclimatized to soil transfer, grown to normal mature plants. The cabbage protoplast culture system established in this study could be applied for production of somatic hybrids or cybrids by asymmetric protoplast fusion and mass proliferation of elite somatic clones of cabbage.