• 식물조직배양학회지
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• 제21권1호
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• pp.23-28
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• 1994

Nicotiana tabaccum 'Xanti', Petunia hybrida 'Blue Star' 그리고 Chrysanthemum morifolium 'Baeckwang'을 공시하여 엽조직 유래의 mesophyII protoplast(MP)와 paraveinal mesophyII protoplast (PVMP) 간의 세포 활성을 조사하기 위하여 urea 투과성을 측정하였다. 아울러 엽육 조직에서 원형질체 나출을 위한 각종 효소제를 처리하고 경과 시간별로 관찰했으며, 나출 원형질체로부터 식물체 재생을 위한 NAA와 thidiazuron의 효과를 조사하였다. Vibratome을 이용한 엽육조직 절단방법은 엽조직의 상해를 최소화하고 조직절편도 최소 50 $\mu\textrm{m}$까지 절단할 수 있기 때문에 urea 투과성 검정과 원형질체 나출을 위한 필수적인 기술이다. 세포활성에 대한 urea투과성 측정은 공시한 3종 식물의 PVMP에서 모두 Ks=2.Ox$10^{-5}$cm/sec 정도가 MP보다 높았다. 효소혼합 용액(1.5% Cellulase R-10, l% Driselase, 0.5% Macerozyme R-10, 0.05% Pectolyase)을 4-8 시간 처리하는 것이 PVMP 나출에 유효하였다. 나출 원형체로부터의 캘러스 유기와 식물체 재생에는 2 mg/L NAA + 0.01 mg/L thidiazuron 처리구에서 가장 양호하였으며 조직별로는 PVMP에서 월등한 결과를 나타내었다. 따라서 엽조직을 대상으로한 원형질체 배양에 있어서 엽록소의 함량이 많은 MP보다는 재생력이나 세포 활성이 강한 paraveinal 엽육조직 유래의 세포를 집약적으로 나출시켜 실험재료로 이용한다면 더 높은 식물체 재생률을 얻을 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국식품과학회지
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• 제21권1호
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• pp.37-44
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• 1989

Monascus 균주의 적색색소의 최적 생산조건을 규명하기 위하여, Monascus anka IFO 4478과 IFO 6540의 영양요구성 돌연변이주인 M. anka, 4478-27-37 $(Thi^-,\;Met^-),\;4478-27-62\;(Thi^-,\;Arg^-)$와 M. anka, 6540-185-24 $(Pan^-,\;Leu^-)$ 6540-185-72$(Arg^-)$의 균주를 이용하여 세포융합을 시도하였다. Protoplasts의 생성은 chitinase (10mg/ml), cellulase (5mg/ml) 및 ${\beta}-glucuronidase\;(5mg/ml)$의 혼합처리가 효과적이었고, 융합조건은 protoplasts를 30% PEG 6.000, $0.01M-CaCl_2$ 및 0.05M-glycine, pH 6.0으로 처리했을 때 융합빈도는 0.7%-0.85%이였다. 융합주 중에서 No. 14와 42의 색소 생산능이 가장 높았다.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권2호
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• pp.81-88
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• 1998

Southeast Asian javanica 벼 품종 Tinawen의 진탕 배양세포로부터 나출된 원형질체의 효과적인 배양과 식물체 재분화가 조사되었다. Lolium multiforum과 Oryza ridleyi의 진탕 배양세포들을 feeder cell로 사용했고 여러가지 재분화 배지를 이용하여 원형질체로부터 유도된 colony들을 재분화 시켰으며, 또한 식물체 재분화율을 높히기 위해 원형질체로 부터 유도된 colony들을 dehydration 시켜 재분화율을 조사하였다. L multiflorum 또는 O. ridleyi의 진탕 배양세포들을 feeder cell로 사용했을 때 원형질체의 평판효율은 feeder cell type과 age에 따라 차이가 났지만 0.09%에서 1.48% 범위로 나타났고, L. multiflorum을 feeder cell로 사용했을 때가 O. ridleyi cell을 사용했을때 보다 6배 높게 원형질체 평판효율을 얻었다. Feeder cell로 L. multiflorum을 사용하여 배양된 원형질채로부터 유도된 colony들을 dehydration 시킨 경우는 19.3-31.7%, O. ridleyi을 사용한 경우는 13.0-18.0%, 또한 이들 두 진탕 배양세포들을 혼합한 것을 사용한 경우는 18.0-22.0%의 식물체 재분화율을 얻은 반면에, dehydration을 시키지 않았을 때는 각각 2.0-7.0%, 3.0-5.0%, 0-4.0%의 재분화율을 얻었다. 원형 질체에서 재분화된 식물체의 flow cytometry를 이용한 배수성 분석 결과 대부분의 식물체가 이배체로 나타난 반면, 단지 34개중 두 식물체에서만이 4배체로 나타났다. 재분화된 식물체들은 온실에 옮겨 기른 결과 정상적인 임성을 나타내었다.

• 생명과학회지
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• 제29권3호
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• pp.376-381
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• 2019

본 연구는 에탄올내성, 내열성, ${\beta}-glucanase$ 활성 및 xylose 대사가 가능한 새로운 생물시스템을 육종하기 위해 원형질체융합(protoplast fusion)이라는 방법을 사용하여 S. cerevisiae BYK-F11 균주와 P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주와의 genome shuffling을 시도하였다. P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주는 URA3 유전자를 결실시켜 uracil 영양요구주로 구축되었다. Protoplast fusion을 통해 몇몇의 융합체가 선별되었고, 두 모균주인 BYK-F11 균주와 P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주의 핵형(karyotype)를 모두 가지는 BYKPS-F8 균주가 22개의 융합체중에서 최종 선정되었다. 이어 ${\beta}-glucanase$ 활성, xylose 이용능, 에탄올내성, 내열성 및 에탄올생산성에 대한 다양한 표현형이 조사되었다. BYKPS-F8 균주는 모균주인 BYK-F11 균주가 가지는 ${\beta}-glucanase$ 활성을 가지게 되었고, P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주가 가지는 xylose 이용능도 모균주보다 1.2배 증가되었음을 확인할 수 있었다. BYKPS-F8 균주는 $40^{\circ}C$에서 내열성을 보였으며, 8% 에탄올이 첨가된 배지에서 모균주에 비해 에탄올 내성이 증가되었음을 확인 할 수 있었다. 20 g/l의 xylose가 함유된 배지에서 72시간 배양에 의해 약 7.5 g/l의 에탄올을 생산할 수 있었으며, 260시간의 장기간의 배양에도 BYKPS-F8균주에 도입한 다형질이 안정적으로 유지됨을 확인하였다. 따라서, 본 연구에서 사용된 균주 육종방법을 통해 다형질을 가진 다른 속간의 균주 융합 및 산업적으로 유용한 생물시스템의 육종이 가능함을 확인하였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제3권1호
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• pp.27-31
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• 2001

New types of cytoplasmic male sterility in Brassica species would be very useful for the production of F$_1$, hybrid seeds. Leaves and stems of rapid cycling stock of B.juncea (CrGC4-3) containing Anand CMS were used as experimental materials for plant regeneration from protoplast culture. Very high plant regeneration rate (85%) was found in the Kao & Michayluk medium supplemented with 2 mg/L zeatin, 0.5 mg/L BAP, and 1 mg/L NAA when only leaf, not stem, segments were cultured. Protoplasts were isolated from leaves using mixtures of enzymes (1% Cellulycin, 0.5% Macerozyme) in 0.4 M mannitol and 50 mM $CaCl_2$.$2H_2$O. Mcrocalli induced from protoplasts were transferred to the shoot regeneration medium containing 2 mg/L BAP, 2 mg/L zeatin, and 0.5 mg/L NAA. After 60 days of initial protoplast culture, regenerated plantlets were obtained, acclimatized, transplanted into the pots, and grown up to the flowering stage.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제6권4호
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• pp.286-291
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• 1996

A study was conducted to investigate the characteristics of segregation and alcohol fermentation of intergeneric fusants. The protoplast fusion of both Pichia stipitis CBS 5776 and Saccharomycess cerevisiae STV 89 was carried out. The fusion frequency was $5\times10^{-8}$ and among fusants selected, a fusant F5 showed the best results in ethanol production by sucrose and xylose fermentations. The performance of xylose fermentation by this fusant was better than that of P. stipitis CBS 5776 and fusant F5 exhibited sucrose fermentation patterns intermediate to the two parent strains. The fusant F5 was segregated into a pair of parental strains during the several culture passages. In the average, 91$%$ of colonies had a similar characteristics of P. stipitis while 7$%$ of colonies resembled S. cerevisiae. Only 2$%$ of colonies had the characteristics of the original fusants. At the sixth passage, all segregants resembled P. stipitis. From these results it is suggested that intergeneric protoplast fusion led to an integration of S. cerevisiae genes, rather than whole chromosomes, within the entire genome of P. stipitis.

• KSBB Journal
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• 제6권3호
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• pp.289-297
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• 1991

The insecticidal protein gene in the pKL-20-1 clone derived from Bacillus thuringiensis serovar. kurstaki plasmid was subcloned in the plant shuttle vector, pGA643. The 7.3 kb fragment was cloned in the BglII and Hpal sites of pGA643 vector and expressed in E. coli S17-1, which produced insecticidal proteins killing Bombyx mori larvae. The clone was named pHL-20. The protoplast formation, calli induction and plantlet regeneration of Nicotiana tabacum was carried out. A tremendous number of mesophyll protoplasts of N. tabacum were formed, up to 7$\times$105 protoplast per ml, for 20 hours in darkness in the enzyme solution of 0.5% cellulase and 0.1% macerosin, pH 5.8. The viabilities of the protoplasts were maintained above 80% for 6 days in the media containing 2mg/1 of NAA and 1mg/1 of kinetin. Calli were induced from the protoplasts and leaves of the N. tabacum on MS medium containing 0.5mg/1 BAP. Under the culture conditions the protoplasts underwent repeated cell division into calli. Plantlets were regenerated from callus cultures derived from protoplast and leaves. Shoots were induced in a medium containing 1mg/1 of BAP.

• 한국균학회지
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• 제15권1호
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• pp.38-41
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• 1987

Neohaplonts were obtained to improve mushroom strain from dikaryon strains of Flammulina Velutips, Ganoderma lucidum, Lyophyllum ulmarium, Pleurotus cornucopiae and Pleurotus spodoleucus by protoplast reversion. The noehaplont frequency from reversion colonies of protoplasts was 4.47-47.7%. Four more types of morphological characteristics were detected from neohaplonts of protoplast reversion in L. ulmarium, P. cornucopiae and P. spodoleucus, but one or two types were neohaplonts in F.velutipes and G. lucidum. Growth rate of neohaplonts was slow compared with dikaryon strains.

• 미생물학회지
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• 제24권4호
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• pp.364-369
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• 1986

Streptomyces tuberaidicus 의 원형질체 생성, 생성된 원형질체의 정상 균사체료의 환원 그리고 원형질체 융합에 대하여 조 사하였다. 또한 균사체로부터 원형질체가 생성되는 과정을 주사전자현미경을 사용하여 관찰하였다. 원형칠체는 슐샤의 끝부위 에서 뿐만 아니라 균샤 말단의 부풀어오른 부위 그리고 균사의 중간 부위에서도 생성이되는 세 종류의 원형질체 생성양을 보였다. 원형질체의 정상균사체로의 환원률은 tryptone-yeast extract-sodium acetate-$MgCl_2-CaCl_2$-sucrose로 조성된 배 지에서 대략 17%이었으며, 이때 $Ca^{++},\;Mg^{++}$ soccrose의 농도가 각각 50mM, 5mM, 0.4-0.SM일때 최척의 환원률을 보였다. S. tµberaidicµs의 histidine과 adenine을 요구하는 두 균주의 원형질서l간의 융합에서 30% 이상의 융합빈도플 얻

• 농업과학연구
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• 제17권2호
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• pp.77-81
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• 1990

Chitin 합성 저해제인 buprofezin이 P. ostreatus 및 P. sajor-caju 균사의 생장과 원형질체 나출 및 재생에 미치는 영향을 조사한 바를 요약하면 buprofezin은 P. ostreatus 및 P. sajor-caju.의 균사생장을 심히 저해하였고 buprofezin의 첨가농도가 높을수록 균사생장 억제가 심하였다. Buprofezin 처리에 의하여 기균사가 증가하였으나 균사의 형태에는 변화가 없었다. 원형질체의 나출량은 buprofezin 200-500 ppm 첨가구의 균사에서 무처리보다 현저히 높은 결과를 보였고, 원형질체의 재생율은 buprofezin의 처리에 의하여 증가하였다.