본 연구를 통하여 유기산 생산을 위한 본 연구를 통하여 유기산 생산을 위한 Propionibacterium acidipropionici의 발효 특성을 규명하여 보았다. P. acidipropionici ATCC 25562, 4875, 및 4965 등 세 균주를 선별하여 발효 실험에 의한 최적 성장조건을 규명한 결과, peptone $1.5\%$ (w/v), yeast extract $0.75\%$ (w/v)에서 유기산 생산성이 최대로 나타났다. 또한 주어진 영양 조건에서 온도, pH 등 환경을 제어하며 회분식 발효를 실시한 결과 세 균주 모두 pH 6.0에서 유기산 수율과 생산성이 가장 높았으며, 그 중에서도 P acidipropionci ATCC 4965 균주가 유기산 생산성이 0.29 g total acids/L/h로 가장 우수한 것으로 판명 되었다. 세 균주의 화학양론적인 유기산 생산비를 비교해본 결과 1.5몰의 글루코오스로부터 $1.60{\sim}2.34$몰의 프로피온산과 $0.74{\sim}1.05$몰의 초산을 생산하는 것으로 나타났다.
유기산 생산을 위한 Propionibacterium acidipropionici의 발효 특성을 규명하기 위하여 ATCC 4965, 4875, 25562의 세 균주를 선별하였다. 세포 성장에 따른 발효 실험에서는 Peptone, Yeast extract, pH별로 실시되었으며, 각각 1.5 %, 0.75%, $5.5{\sim}7.5$에서 유기산 생산성이 최적으로 나타났다. 회분식 발효결과 세 균주 모두 pH 6.0에서 유기산 수율과 생산성이 pH 7.0에 비해 더 높았으며, 그 중에서도 P.acidipropionci ATCC4965균주가 유기산 생산성이 0.29g total acids/L/h로 가장 우수한 것으로 나타났다.
유청농도 12% 용액에 Lactobacillus helveticus ATCC 55163과 Propionibacterium acidipropionici 5020을 혼합 배양하여 프로피온산, 초산, 젖산 등이 생성된 유청발효물을 빵 제조 시 물의 10%, 15% 대체하여 제조한 빵의 부피, pH 및 총산도, 수분함량, 수분활성도, 조직감, 유기산, 관능검사 등을 분석하였다. 부피는 대조구가 가장 컸고, pH 및 총산도에서 pH는 대조구가 가장 낮았고 총산도는 대조구가 가장 높았다. 수분은 유청발효물 함량에 따라 차이가 없었고 수분활성도는 저장기간이 길어질수록 유청발효물 10% 첨가한 것에서 가장 높았다. 조직감은 저장기간이 길어질수록 유청발효물 10% 첨가한 것의 경도 (hardness)가 가장 낮아 부드러웠다. 유기산 함량 분석에서 대조구에서는 프로피온산이 검출되지 않았고, 호박산 젖산 초산 등도 시험구보다 낮게 검출되었다. 시험구 중에는 유청발효물을 15% 첨가한 것에서 호박산, 초산, 젖산 등이 높게 검출되었고 특히 프로피온산 검출량이 높았다. 관능검사에서 유청발효물을 10% 첨가한 것이 가장 높은 점수를 얻었다. 제품의 품질 면에서 유청발효물 10%, 보존성 면에서 유청발효물 15%를 첨가하는 것이 효과가 있을 것으로 기대된다.
회분식 발효를 실시하여 균주의 최적 발효조건을 구하여 세포 재순환식 연속 발효 공정에 적용한 결과, CSL의 최적 함량은 2.5%로 나타났으며, 수율과 생산성은 각각 0.80g total acid/g glucose, 0.26g total acid/L/h이였다. 연속 발효 결과, 최대 생산물 생산성은 희석률 0.2/h에서 3.32g organic acid/L/h을 얻었다. 최적 추출시스템은 30%w/w TOA/MIBK로 나타났으며, Membrane Contactor을 이용한 추출에서는 수용액상의 200ml/min, 추출상은 100ml/min의 유량을 갖는 Counter-current가 최적 조건임을 확인했고, 또한 수용액상과 추출상의 접촉 부피비는 2:1이 여러 가지 요인을 고려했을 때 최적 조건임을 확인했다. 실제 발효를 통해 생성된 유기산의 추출은 1:1의 부피비로 counter-current로 접촉시켰을 때 Acetic acid 가 56% Propionic acid가 72.41%의 추출력을 얻을 수 있었다.
본 연구에서는 식품부산물을 원료로 사용하여 회분식 발효를 통한 Propionibacterium acidipropionici의 유기산 생산성을 검토하고 세포재순환식 연속발효를 통해 유기산의 대량생산을 위한 기초자료를 마련하고자 하였다. CSL의 함유량에 따른 회분식 발효를 실시하여 균주의 생산성이 최대가 되는 발효조건을 구하여 연속 발효공정에 적용하였다. 희석률을 $0.1{\sim}0.2\;hr^{-1}$로 변화시키며 세포재순환식 연속발효를 실시한 결과 $0.2\;hr^{-1}$에서 최대 세포량은 150 g drycell/L으로 회분식 발효에 비해 21배 증가하였으며, 유기산의 최대 생산성은 3.32 g total acids/L/h로서 13배가 향상된 것으로 나타났다. 따라서 이 발효공정을 scale-up한다면 유기산뿐만 아니라 바이오매스 자원으로서 세포량의 대량생산도 가능할 것으로 판단된다.
The potential use of spin filter device to retain Propionibacterium acidipropionici in the bioreactor under continuous mode of fermentation, and improve acid productivity, was examined. The yield of propionic acid based on lactose concentration was 51% in batch and 54% in continuous (dilution rate = 0.05 h(sup)-1) operation. The yield in continuous fermentation with cell retention using spin filter of 10 micron size (dilution rate = 0.05 h(sup)-1) was even higher at 70% (w/w). The volumetric productivity under batch and continuous mode of operation were 0.312g L(sup)-1 h(sup)-1 and 0.718g L(sup)-1 h(sup)-1 respectively. Continuous fermentation with cell retention demonstrated even higher volumetric productivities at 0.98g L(sup)-1 h(sup)-1 with out clogging problems. It could be used for utilization of cheese whey to produce propionic acid at higher yield and productivities.
본 연구의 목적은 식품부산물로부터 유기산 생산 및 분리 농축에 있다. 회분식 발효를 실시하여 균주의 최적 발효조건을 구하여 세포 재순환식 연속 발효공정에 적용한 결과, CSL의 최적 함량은 2.5%로 나타났으며 수율과 생산성은 각각 0.80g total acid/g glucose, 0.26g total acid/L/h로 향상 되었다. 세포 재순환식 연속발효 결과, 최대 유기산 생산성은 희석률 0.2/h에서 3.32g organic acid/L/h로 회분식 발효와 비교해 볼 때 최대 생산성으로는 13배, 세포량으로는 22배 증가한 것으로 나타났다. 또한, 최적 추출시스템은 30%w/w TOA/MIBK로 나타났으며, 발효액내의 유기산을 약 90%까지 분리 및 농축할 수 있음을 확인하였다.
Three microorganisms and one chemical preservative were tested for their effects on the fermentation and aerobic stability of whole-crop wheat, sorghum and maize silages. Wheat at the early dough stage, sorghum at the late milk stage and maize at the one-third milk line stage were harvested and ensiled in 1.5-l anaerobic jars untreated or after the following treatments: control (no additives); Lactobacillus plantarum (LP) at $1.0{\times}10^6$ colony-forming units (CFU)/g of fresh forage; L. buchneri (LB) at $1.0{\times}10^6$ CFU/g; Propionibacterium acidipropionici (PA) at $1.0{\times}10^6$ CFU/g; and a formic acid-based preservative (FAP) at 3 ml/kg of fresh forage weight. Three jars per treatment were sampled on d 90 after ensiling, for chemical and microbiological analysis. At the end of the ensiling period, 90 d, the silages were subjected to an aerobic stability test lasting 5 d. In this test, $CO_2$ produced during aerobic exposure was measured along with chemical and microbiological parameters which serve as spoilage indicators. The silages inoculated with LP had higher concentration of lactic acid compared with the controls and the other treated silages (p<0.05). The controls and LP-inoculated silages spoiled upon aerobic exposure faster than LB, PA and FAP-treated silages. The controls and LP-inoculated silages spoiled upon aerobic exposure faster than LB, PA and FAP-treated silages due to more $CO_2$ production (p<0.05) in these two groups and development of yeasts unlike the other groups. In the experiment, the silages treated with LB, PA and FAP were stable under aerobic conditions. However, the numbers of yeasts was higher in the LP-inoculated wheat, sorghum and maize silages compared with the LB, PA and FAP-treated silages. The LB, PA and FAP improved the aerobic stability of the silages by causing more extensive heterolactic fermentation that resulted in the silages with high levels of acetic and propionic acid. The use of LB, PA and FAP as silage additives can improve the aerobic stability of whole-crop wheat, sorghum and maize silages by inhibition of yeast activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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