• 한국어류학회지
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• 제6권2호
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• pp.237-243
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• 1994

감성돔을 대상으로 부화직후에서 양성생식소단계에 이르기까지 성분화과정을 규명하기 위해 시원생식세포의 출현과 원시생식소의 형성 그리고 자웅 성분화과정을 조직학적으로 조사하였다. 1. 시원생식세포 (primordial germ cell) 는 부화후 3 일 전장 2.4 mm된 전기 자어의 장관과 척색사이 체벽중배엽상피 위에서 크기 $6.8{\sim}7.2\;{\mu}m$인 3~4개의 세포가 섬유성 간충직에 묻혀 식별되었다. 2. 부화후 21일 전장 6.4 mm 개체에서, 색소세포가 다소 집착된 복막체강상피에 생식원세포(proto-gonial cell)가 위치한다. 3. 부화후 59일 전장 20.8 mm 개체에서, 섬유성 간충직으로 선상의 원시생식소를 따라 생식원세 포들은 후복막쪽으로 이동한다. 4. 부화후 186일 전장 7.8 cm 개체에서, 섬유질이 풍부하고 호산성 과립세포가 다수 분포하는 선상의 원시생식소에 유사분열중인 생식원세포들이 나타나고 있다. 5. 부화후 254일 전장 9.5 cm 개체에서, 섬유질이 풍부한 생식소내에 정모세포, 정세포 무리들이 나타나고 있다. 6. 부화후 13개월 전장 10.5 cm 개체에서, 생식소는 피층과 수층으로 구분된다. 피층에는 소수의 정모세포 무리들과 원생식세포 무리들이 나타나고, 수층에는 섬유질이 풍부한 간충직 조직과 소수의 원생식세포들이 드문드문 분포하고 있다. 7. 부화후 16개월 전장 14.7 cm 개체에서, 생식소는 섬유성 결합조직에 의해 정소부위와 난소부위로 구분되며, 정소부위에는 포낭내에 정원세포들이 분포하고, 난소부위에는 난소강과 주변인기 난모세포들로 구성된다.

• BMB Reports
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• 제43권6호
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• pp.438-444
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• 2010

Dnd (dead end) gene encodes an RNA binding protein and is specifically expressed in primordial germ cells (PGCs) as a vertebrate-specific component of the germ plasma throughout embryogenesis. By utilizing a technique of specific nucleic acids associated with proteins (SNAAP), 13 potential target mRNAs of zebrafish Dnd (ZDnd) protein were identified from 8-cell embryo, and 8 target mRNAs have been confirmed using an RT-PCR analysis. Of the target mRNAs, the present study is focused on the regulation of geminin, which is an inhibitor of DNA replication. Using electrophoretic mobility shift assay (EMSA), we demonstrated that ZDND protein bound the 67-nucleotide region from 864 to 931 in the 3'UTR of geminin mRNA, a sequence containing 60.29% of uridine. Results from a dual-luciferase assay in HEK293 cells showed that ZDND increases the translation of geminin. Taken together, the identification of target mRNA for ZDnd will be helpful to further explore the biological function of Dnd in zebrafish germ-line development as well as in cancer cells.

• 한국수정란이식학회지
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• 제27권2호
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• pp.113-119
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• 2012

Epigenetic modification including genome-wide DNA demethylation is essential for normal embryonic development. Insufficient demethylation of somatic cell genome may cause various anomalies and prenatal loss in the development of nuclear transfer embryos. Hence, the source of nuclear donor often affects later development of nuclear transfer (NT) embryos. In this study, appropriateness of porcine embryonic germ (EG) cells as karyoplasts for NT with respect to epigenetic modification was investigated. These cells follow methylation status of primordial germ cells from which they originated, so that they may contain less methylated genome than somatic cells. This may be advantageous to the development of NT embryos commonly known to be highly methylated. The rates of blastocyst development were similar among embryos from EG cell nuclear transfer (EGCNT), somatic cell nuclear transfer (SCNT), and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) (16/62, 25.8% vs. 56/274, 20.4% vs. 16/74, 21.6%). Genomic DNA samples from EG cells (n=3), fetal fibroblasts (n=4) and blastocysts from EGCNT (n=8), SCNT (n=14) and ICSI (n=6) were isolated and treated with sodium bisulfite. The satellite region (GenBank Z75640) that involves nine selected CpG sites was amplified by PCR, and the rates of DNA methylation in each site were measured by pyrosequencing technique. The average methylation degrees of CpG sites in EG cells, fetal fibroblasts and blastocysts from EGCNT, SCNT and ICSI were 17.9, 37.7, 4.1, 9.8 and 8.9%, respectively. The genome of porcine EG cells were less methylated than that of somatic cells (p<0.05), and DNA demethylation occurred in embryos from both EGCNT (p<0.05) and SCNT (p<0.01). Interestingly, the degree of DNA methylation in EGCNT embryos was approximately one half of SCNT (p<0.01) and ICSI (p<0.05) embryos, while SCNT and ICSI embryos contained demethylated genome with similar degrees. The present study demonstrates that porcine EG cell nuclear transfer resulted in hypomethylation of DNA in cloned embryos yet leading normal preimplantation development. Further studies are needed to investigate whether such modification affects long-term survival of cloned embryos.

• 한국양식학회지
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• 제16권4호
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• pp.240-244
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• 2003

양식산 넙치를 대상으로 아치사 만성농도의 PCBs가 자어기의 원시생식소와 신장의 발달에 미치는 영향을 살펴보았다. 원시생식소 발달 과정은 4단계; 원시생식세포(primodial germ cell, PGC) 단계, 생식융기 (genital ridge type, GRT) 단계, 원시생식소 I형(primitive gonad type I, PGT I) 단계 및 원시생식소 II형(primitive gonad type II, PGT II) 단계로 구분할 수 있었다. 시원생식세포는 부화 후 3일에 발견되었고, 원시 생식소는 대조구에서 부화 후 24일에 나타나며 처리구에서는 부화 후 22일에 나타났다. 신장 발달과정은 4단계; 단일관형 중신관(unitubular type of mesonephric duct, UTMD) 단계, 분지형 중신관(the branched mesonephric duct, BMD) 단계, 세뇨관 형성(convoluted tubule formation CTF) 단계 및 사구체 출현(glomerulus appearance, GA) 단계로 구분할 수 있었으며, 신장의 구조적 완성시기는 대조구와 처리구 모두 부화 후 25∼30일로 나타났다. 하지만 원시 생식소와 신장 모두 대조구와 처리구에서 유의한 차를 보이지 않았다 (P>0.05). 그러므로, 넙치 자어기의 원시 생식소와 신장의 발달에 따른 PCBs(3.0 $\mu\textrm{g}$/L)의 영향은 없었다.

• Molecules and Cells
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• 제38권9호
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• pp.743-749
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• 2015

Production of genome-edited animals using germline-competent cells and genetic modification tools has provided opportunities for investigation of biological mechanisms in various organisms. The recently reported programmed genome editing technology that can induce gene modification at a target locus in an efficient and precise manner facilitates establishment of animal models. In this regard, the demand for genome-edited avian species, which are some of the most suitable model animals due to their unique embryonic development, has also increased. Furthermore, germline chimera production through longterm culture of chicken primordial germ cells (PGCs) has facilitated research on production of genome-edited chickens. Thus, use of avian germline modification is promising for development of novel avian models for research of disease control and various biological mechanisms. Here, we discuss recent progress in genome modification technology in avian species and its applications and future strategies.

• 한국가금학회지
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• 제40권3호
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• pp.197-205
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• 2013

동결 닭 원시생식세포의 생식계열 키메라를 이용한 생체에의 복원을 실용화하기 위해서는, 닭 원시생식세포의 동결보존기술의 향상에 의해 동결 및 융해 후의 많은 생존세포를 확보하는 것이 반드시 필요하다. 닭 원시생식세포는 배양 5.5일령의 닭 원시생식선으로부터 채취하고, MACS 방법에 의해서 순수 닭 원시생식세포를 분리했다. 15% 각각의 EG를 동결보호제로 사용한 처리군이 각 군의 농도에 상관없이 유의적(p<0.05)으로 PG 처리군보다 동결 및 융해 후의 세포의 생존율이 높음을 확인하였다. 특히, 10% EG 처리군에서 85.63%로 동일한 농도의 PG 처리군(66.81%)보다 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 생존율을 보였다. 한편, 상업용 닭(한협3호)에서도 오계와 비슷한 경향의 결과를 확인하였다. 이상의 결과들로부터 유리화 동결에 있어서 가장 높은 생존율을 보인 10% EG이 최적의 동결 보호제로서 사용 가능함을 확인하였다.

• 한국양식학회지
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• 제13권3호
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• pp.215-222
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• 2000

은어, plecoglossus altivelis의 생리학적 성전환을 위한 기초적인 연구로 성분화 과정을 조직학적으로 조사하였다. 부화 후 2일째 (평균전장 : 0.66 cm)에 중신관과 장 사이의 장간막에 원시생식세포가 나타났으며, 부화 후 30일째(평균전장:1.29 cm)의 초기 생식소는 genital ridge를 형성하는 원시 생식소 구조를 나타내었다. 부화 후 90-100일째 (평균전장:3.42 cm~4.50 cm)의 생식소는 암, 수로 분화가 이루어졌다. 정소는 부화 후 90일째 (평균전장:3.42 cm) 많은 정원세포들이 분포하고 정소 소관 (efferent duct, ED)이 관찰되었으며, 난소에서는 난소를 특징지을 수 있는 parovarian sac의 구조가 난소 가장자리로부터 나타났다. 부화 후 110일째 정소에서는 정소 소관의 수와 정원세포의 수가 점점 증가하였다. 부화 후 100일째 (평균전장: 4.5 cm) 난소에서는 난소를 특징지을 수 있는 parovarian sac이 형성되기 시작하였고, 부화 후 120일째 (평균전장:5.45 cm) 난소에서는 난소 소염의 형성 및 분리와 함께 난모세포가 소엽 내에 가득 차기 시작하여 기능적 난소의 형태로 분화하였다. 이상의 결과 본 종은 초기 성분화 과정에 자성 단계를 거치지 않고 정소와 난소로 분화되는 분화형 자웅이체였다.

• 한국어류학회지
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• 제13권4호
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• pp.248-253
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• 2001

대농갱이, Leiocassis ussuriensis의 생리학적 성전환을 위한 기초적인 연구로 성분화 과정을 조직학적으로 조사하였다. 부화 후 1일째에 중신관과 장 사이의 장간막에 원시생식세포가 나타났으며, 부화 후 5일째의 초기 생식소는 생식융기를 형성하는 원시생식소 구조를 나타내었다. 부화 후 20일째의 생식소는 암, 수로의 분화가 이루어졌는데 정소는 부화 후 20일째에 유사분열 단계의 원시생식세포들이 분포하였으며, 난소에서는 난소를 특징지을 수 있는 entovarian sac의 구조가 난소 중앙부분에 나타났다. 부화 후 40일째 정소에서는 정원세포의수가 점점 증가하였고, 부화 후 50일째 난소에서는 난소강이 더 뚜렸해지며 부화 후 100일째 난소에서는 초기 난모세포가 난소내에 가득 차기 시작하여 기능적 난소의 형태로 분화하였다. 이상의 결과 본 종은 초기 성분화 과정은 자성 단계를 거치지 않고 정소와 난소로 분화되는 분화형 자웅이체였다.

• 한국가축번식학회지
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• 제19권1호
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• pp.55-63
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• 1995

The putative totipotency germ cells has a relative abundance of alkaline phosphatases. Thus, histological staining of AP activity offers a new route to isolate totipotent cells and also provides insights into culture systems of these cells. Furthermore, the AP staining technique is simple and fast, requires only the napthol AS/MS substrate in combination with trapping diazonium salts such as fast red or fast blue. However, our unexpected finding was that AP staining of mouse ES cells were detected in the undifferentiaed epiblast-derived cells as well as several types of differentiating cells. This findings are different from results of Talbot et al. (1993) reported usefulness of the AP staining and implies that histological staining of AP may not by useful to determine undifferentiaed state or totipotency of ES cells. Thus, we have investigated the patterns of AP expression by RT-PCR in order to identify a marker of undifferentiated ES/primordial germ (PG) cells. In RT-PCR analysis, embryonic (E)-AP was detected only in undifferentiated ES cells, but intestinal(I)-AP was not detected in all of the examined ES and PG cells. In addition, nonspecific (NS)-AP wasdetected in undifferentiated PG cell from day 7, 5 to 13 of gestation. Histological activity of AP in ES cells was completely suppressed by addition of L-phenylalanine (Phe), L-homoarginine (Har), and L-phenylalanylglycylglycine (PheGlyGly) as an inhibitor, but RT-PCR showed the same results as in the absence of an inhibitors. Our findings suggested that expression of E-AP and NS-AP may use as a marker to determine the undifferentiated status in ES and PG cells.

• BMB Reports
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• 제44권3호
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• pp.147-157
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• 2011

The meiotic process from the primordial stage to zygote in female germ cells is mainly adjusted by post-transcriptional regulation of pre-existing maternal mRNA and post-translational modification of proteins. Several key proteins such as the cell cycle regulator, Cdk1/cyclin B, are post-translationally modified for precise control of meiotic progression. The second messenger (cAMP), kinases (PKA, Akt, MAPK, Aurora A, CaMK II, etc), phosphatases (Cdc25, Cdc14), and other proteins (G-protein coupled receptor, phosphodiesterase) are directly or indirectly involved in this process. Many proteins, such as CPEB, maskin, eIF4E, eIF4G, 4E-BP, and 4E-T, post-transcriptionally regulate mRNA via binding to the cap structure at the 5' end of mRNA or its 3' untranslated region (UTR) to generate a closed-loop structure. The 3' UTR of the transcript is also implicated in post-transcriptional regulation through an association with proteins such as CPEB, CPSF, GLD-2, PARN, and Dazl to modulate poly(A) tail length. RNA interfering is a new regulatory mechanism of the amount of mRNA in the mouse oocyte. This review summarizes information about post-transcriptional and post-translational regulation during mouse oocyte meiotic maturation.