• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2003년도 학술발표대회 발표논문초록집
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• pp.33-33
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• 2003

This study was conduct to compare the efficacy to produce male and female somatic cloned piglets. Maturation of porcine COCs was accomplished by incubation in NCSU-23 medium supplemented with 0.6 mM cysteine, 10% porcine follicular fluid, 1mM dibutyryl cyclic adenosine monophosphate (dbc-AMP, Sigma, USA), and 0.1 IU/ml human menopausal gonadotrophin (hMG, Teikokuzoki, Japan) for 20h and then cultured without dbcAMP and hMG for another 18 to 24 h. Female and male fetal cells were isolated from each fetus, cultured in ES-DMEM medium containing 10% FCS. Enucleated oocytes were fused with fetal fibroblasts (passage 4 to 15). Reconstructed embryos were cultured in NCSU-23 with 4 mg/ml BSA under mineral oil at 39$^{\circ}C$ in 5% $CO_2$ in air. A total of 12,328 nuclear-transferred embryos (1- to 4-cell stage) were surgically transferred into 69 surrogate gilts. Three recipients aborted during the period of conception. Three gilts delivered eleven female piglets, and five recipients gave rise to birth 22 male piglets. The average birth weigh of the cloned piglets was 1.52 kg (1.38~1.83 kg) in female piglets and 0.84 kg (0.45~1.25 kg) in male piglets. Alive cloned pigs was seven in female piglets (63.6%) and four in male piglets (18.2%). The other two recipients is ongoing. This study suggests that female-derived fetal cell as a nuclear donor has more capability on production of cloned piglets than male.

• BMB Reports
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• 제41권9호
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• pp.664-669
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• 2008

Znf230, the mouse homologue of the human spermatogenesis-related gene, ZNF230, has been cloned by rapid amplification of cDNA ends (RACE). This gene is expressed predominantly in testis, but its expression in different testicular cells and spermatogenic stages has not been previously analyzed in detail. In the present study, the cellular localization of the Znf230 protein in mouse testis and epididymal spermatozoa was determined by RT-PCR, immunoblotting, immunohistochemistry and immunofluorescence. It is primarily expressed in the nuclei of spermatogonia and subsequently in the acrosome system and the entire tail of developing spermatids and spermatozoa. The results indicate that Znf230 may play an important role in mouse spermatogenesis, including spermatogenic cell proliferation and sperm maturation, as well as motility and fertilization.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제30권4호
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• pp.235-245
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• 2006

Di-n-butyl phthalate (DBP), diisononyl phthalate (DINP) and di-(2-ethylhexyl) adipate (DEHA) are ubiquitously distributed chemicals that are widely used as plasticizers and also found at low levels in foods. The aims of this study were to determine whether perinatal exposure to DBP, DINP and DEHA could alter normal patterns of neonatal development. Dams were provided with pulverized soy-free diet containing 20, 200, 2,000 and 10,000 ppm of DBP, 40, 400, 4.000 and 20,000 ppm of DINP, or 480, 2,400 and 12,000 ppm of DEHA from gestational day 15 to postnatal day 21. Exposure to the high doses of DBP, DINP and DEHA during gestational period significantly decreased food consumption and body weight gain of dams. These chemicals reduced neonatal body weight as well as that of the after maturation. Also, exposure to DINP of all the doses used and the higher doses (2,400 and 12,000 ppm) of DEHA decreased AGD at PND 1 in male neonates, though that to DBP did not affect AGD in males. In female neonates, an increase in AGD was observed in DBP- and DINP-exposed animals at the highest doses. Moreover, these chemicals affected survival rate of pups at PND 5, and delayed onset of eye opening in all chemica1-exposed groups at PND 17. These results suggest that perinatal exposure to these chemicals may affect the normal development and/or growth of offspring.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제18권4호
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• pp.293-300
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• 2014

Direct cell-cell communication through connexin (Cx) complexes is a way to achieve functional accordance of cells within a tissue or an organ. The initial segment (IS), a part of the epididymis, plays important roles in sperm maturation. Steroid hormones influence on expression of a number of genes in the IS of adult animals. However, developmental effect of sex hormones on the gene expression in the IS has not been examined. In this study, estradiol benzoate (EB, an estrogen agonist) or flutamide (Flu, an androgen antagonist) was exogenously administrated at 1 week of postnatal age, and expressional changes of Cx genes in the IS were determined at 4 months of age by a quantitative real-time PCR analysis. Treatment of EB at $0.015{\mu}g/kg$ body weight (BW) increased expression of Cx30.3, 31.1, and 43 genes. However, treatment of 1.5 mg EB/kg BW resulted in expressional decreases of Cx31, 32, and 45 genes and caused increases of Cx30.3 and 43 gene expression. Significant decreases of Cx31, 31.1, 32, 37, and 45 gene expression were detected with a treatment of $500{\mu}g\;Flu/kg$ BW, while expression of Cx43 gene was significantly increased with a treatment of $500{\mu}g\;Flu/kg$ BW. A treatment of $50{\mu}g\;Flu/kg$ BW led to significant increases of Cx30.3, 32, 37, 40, and 43 gene expression. These findings imply that exogenous exposure of steroidal hormones during the early developmental period would result in aberrant expression of Cx genes in the adult IS.

• Applied Microscopy
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• 제46권1호
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• pp.58-66
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• 2016

Thymosin ${\beta}4$ ($T{\beta}4$) has been recently reported to play a role in dentinogenesis by regulating the expression of dentin matrix proteins. Based on previous studies, it is hypothesized that $T{\beta}4$ is associated with the formation of the enamel matrix and thus plays an important role in ameloblast. However, there is no report on the function of $T{\beta}4$ during tooth development so far. Therefore, in this study, we aimed to investigate the expression of $T{\beta}4$ and its function in ameloblasts during mouse tooth development. $T{\beta}4$ was expressed strongly in the tooth bud at the bud stage and in the dental lamina and oral epithelium at the cap stage. In advanced bell stage at postnatal day 4, large elongated ameloblasts were observed and the expression of the $T{\beta}4$ protein was the highest, with the enamel being was thicker than that in the early bell stage. The length of ameloblasts increased from the presecretory to the secretory stage and decreased from the maturation to the protective stage. These results suggest that $T{\beta}4$ participates not only in the proliferation of oral epithelial cells during the early stage of tooth development but also regulates enamel protein secretion in ameloblasts and enamel mineralization.

• 대한한방소아과학회지
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• 제15권1호
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• pp.105-115
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• 2001

The relation of endocrine in the western medicine and zangfu-organ functions in Korean medicine, related to growth disturbance, was studied and derived the following results. 1. The hormone most related to growth disturbance is, directly secreted from the anterior pituitary or is stimulated and secreted in the target grands, growth hormone, thyroid, adrenocortical hormone, gonadial hormone and is insulin secreted from $\beta$ cell of langerhans' slands of pancreas. 2. the pituitary has the most close relation with the kidney in the five zang-organ. Because the kidney is innate origin(先天之本) and promotes qi and blood(生化氣血), stores the essence of life(藏精), dominates the bones(主骨) and promotes the marrow(生骨髓). Especially it is connected with brain(通於腦). 3. In the children growth, the endocrine action in the pituitary has the most close relation with the kidney, As in the reports of the brain and spinal cord, bone, store essence of life, sexual maturation and decline(kidney-qi, sexual functions of both sexes(天癸)) etc, and cause of cretinism, dwarf in the main subject. 4. Somatomedin is the most important factor of the growth factors, IGF in another word. The unification of IGF and secretion is controlled firstly according to growth hormone, however is very closely related to the nutrition status in the non-hormonic causes. Also, it is affected very much by the insulin. 5. Insulin is one of the important hormone related to the growth and is secreted from the pancreas. Pancreas belongs to the functional system of spleen in oriental medicine, thus the growth disturbance, occurred due to error in insulin secretion and nutrition(in another words, the lack of postnatal essential substance from food-stuff(水穀精氣)), is closely related to the spleen. 6. From the results driven above, the hormone action of endocrine and problem in secretion, related to the growth disturbance, must be focused on the differentiation of symptoms and signs of the kidney and the spleen in oriental medicine.

• Molecules and Cells
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• 제45권8호
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• pp.588-602
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• 2022

Various RNA-binding proteins (RBPs) are key components in RNA metabolism and contribute to several neurodevelopmental disorders. To date, only a few of such RBPs have been characterized for their roles in neocortex development. Here, we show that the RBP, Rbms1, is required for radial migration, polarization and differentiation of neuronal progenitors to neurons in the neocortex development. Rbms1 expression is highest in the early development in the developing cortex, with its expression gradually diminishing from embryonic day 13.5 (E13.5) to postnatal day 0 (P0). From in utero electroporation (IUE) experiments when Rbms1 levels are knocked down in neuronal progenitors, their transition from multipolar to bipolar state is delayed and this is accompanied by a delay in radial migration of these cells. Reduced Rbms1 levels in vivo also reduces differentiation as evidenced by a decrease in levels of several differentiation markers, meanwhile having no significant effects on proliferation and cell cycle rates of these cells. As an RNA binding protein, we profiled the RNA binders of Rbms1 by a cross-linked-RIP sequencing assay, followed by quantitative real-time polymerase chain reaction verification and showed that Rbms1 binds and stabilizes the mRNA for Efr3a, a signaling adapter protein. We also demonstrate that ectopic Efr3a can recover the cells from the migration defects due to loss of Rbms1, both in vivo and in vitro migration assays with cultured cells. These imply that one of the functions of Rbms1 involves the stabilization of Efr3a RNA message, required for migration and maturation of neuronal progenitors in radial migration in the developing neocortex.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제49권6호
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• pp.677-685
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• 2006

목 적 : 임신 기간 중 지속적으로 알코올을 섭취하는 모체에 thyroxine을 투여하여 알코올의 유해한 영향으로 인한 대뇌의 태아 알코올 효과를 개선시킬 수 있는지를 알아보고자 했다. 방 법 : 실험동물은 매일 35칼로리 정도의 알코올을 섭취한 알코올군, 알코올 대신 dextrin이 첨가된 유동액을 섭취한 정상군, 알코올군과 같은 양의 알코올을 매일 섭취하고 thyroxine을 매일 $5{\mu}g/kg$ 피하 주사한 알코올＋$T_4$ 군으로 분류하였다. 임신한 흰쥐 모체가 분만이 끝나면 각 군에서 태어난 새끼들은 그 어미와 분리하여 사료와 물을 자유롭게 섭취하는 대리모에게 키우게 하였다. 한 배의 새끼 1마리씩 총 4마리를 생후 0, 7, 14, 21, 28일에 희생시켜 면역조직화학염색을 시행하여 대뇌겉질 및 해마에서 생후 연령에 따른 NPY 함유 신경세포의 발달과 성숙양상을 관찰하였다. 결 과 : 대뇌겉질에서는 알코올＋$T_4$ 군에서 생후 7일에 NPY 함유 신경세포들이 알코올군과 정상군보다 더 뚜렷한 양성반응을 나타내기 시작하였으며, 생후 14일 이후부터는 대뇌겉질의 전 층에 걸쳐 광범위하게 NPY 함유 신경세포들이 관찰되었고 연령 증가에 따른 세포의 감소가 나타나지 않았으나 알코올군은 NPY 함유 신경세포가 생후 28일에 다른 군에 비해 현저히 감소하는 양상을 나타냈다. 해마에서는 알코올＋$T_4$ 군에서 생후 7일부터 정상군과 유사한 분포 양상을 나타냈으며 알코올군과는 뚜렷한 차이를 보였다. 특히 생후 14일에 대뇌겉질 및 해마 모두에서 알코올＋$T_4$ 군의 NPY 함유 신경세포 분포 및 신경얼기 형성이 두드러졌다. 결 론 : 임신 중 알코올 남용을 하는 모체에 지속적인 $T_4$ 투여는 그 후손들의 뇌에 분포하는 NPY 함유 신경세포의 발달을 정상 군과 유사하게 촉진시킬 수 있을 것으로 생각되며 모체 $T_4$ 투여가 특히 출생 초기의 NPY 합성에 영향을 미쳐 태아 알코올 효과를 개선시킬 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제7권2호
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• pp.119-126
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• 2003

본 연구실에서는 이전의 실험에서 suppression subtractive hybridization(SSH)을 통하여 생쥐의 생후 1일자 난소와 5일자 난소에서 차이 나게 발현하는 유전자들의 목록을 얻었고 그 중에서 MT transposon-like element, clone MTi7(MTi7)이 성장하는 난포에서 더 높게 발현한다는 것을 알아냈다(Park et al., 2002). In situ hybridization과 RNA interference를 이용한 연구결과, MTi7은 난자에서 특이 적으로 발현하는 유전자로 특히 난자성숙에 관여하는 것으로 관찰되었다(Park et at., 2003). 그러나 현재까지 MTi7의 염기서열은 생쥐에서만 알려져 있다. 따라서 본 연구는 두 부분으로 나누어서 첫째, MTi7이 다른 포유류에도 존재하는지 알아보기 위해 소,돼지, 흰쥐 그리고 사람 등 각기 다른 네 종의 난소 cDNA를 사용하여 새로운 MTi7을 분리하고자 하였으며, 둘째, 생쥐의 MTi7이 transposon의 특징을 갖고 있어 다른 유전자에 삽입되어 있는지를 알아보기 위해 inverse PCR을 시행하여 MTi7주변의 유전자가 있는지를 조사하였다. 네 종의 난소 cDNA를 사용하여 생쥐의 MTi7과 매우 유사한 염기서열을 갖고 있음을 알았다(87%∼98%). Inverse PCR 결과, 생쥐의 MTi7은 beta-carotene 15, 15'-monooxygenase(Bcdo) 유전자 혹은 serine protease inhibitor, Kunitz type I(Spint 1) 유전자에 삽입되어 있음을 알 수 있었다. 본 연구의 결과로 여러 포유류의 MTi7 sequence를 알아내고, 또한 생쥐의 MTi7이 삽입되어 있는 유전자를 알아냄으로써 머지 않은 장래에 난자형성 및 난포형성과정에 있어서 MTi7의 역할을 밝혀 낼 수 있을 것으로 기대된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제23권3호
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• pp.247-268
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• 1996

여포와 난포의 성숙, 배란과 착상, 임신의 유지와 태아의 성장 발달, 분만 및 유선발육과 비유 등 일련의 생식현상에서 있어서 성선자극호르몬과 스테로이드 호르몬의 작용이 중추적인 역할을 한다는 사실은 오래 전부터 알려져왔다. 그러나 이러한 일련의 현상에 고전적인 호르몬 외에도 다수의 성장인자가 관여되고 있음이 최근의 연구 결과 밝혀지고 있다. 생식기관에서 성장인자들은 대부분 autocrine/paracrine mode로 작용하여, 성선자극호르몬과 스테로이드 호르몬의 작용을 매개하거나 이들 호르몬 등과 교호적인 작용(synergy)을 한다. 생식기관 내 insulin-like growth factor(IGF) system은 최근 가장 활발히 연구된 분야 중의 하나로 생식현상의 전반에 걸쳐 중요한 역할을 하고 있음이 밝혀졌다. 본 지면에서는 IGF system에 관한 개괄적인 정보를 소개하고 현재까지 보고된 intrauterine IGF system에 관한 연구를 요약하고자 한다. IGF family는 IGF-I과 IGF-II ligands, 두종류의 IGF receptors(수용체), 그리고 지금까지 발견된 6종류의 IGF-binding proteins(IGFBPs)로 이루어져 있다. IGF-I과 IGF-II는 proinsulin과 상동한 구조를 가진 peptide로서 포도당과 아미노산 운반을 자극하는 등 insulin과 유사한 작용을 한다. 이 외에도 IGFs는 세포분열촉진제(mitogens)로서 여러 형태의 세포에 걸쳐 세포증식을 자극하고, 세포의 분화(differentiation)과 세포기능의 발현에 관여한다. IGFs는 간과 주로 messenchymal cells에서 발현되어 endocrine mode는 물론 autocrine/paracrine mode로 거의 모든 조직에 작용한다. IGF 수용체는 두종류가 알려져 있는데 type I IGF receptor는 tyrosine kinase로서 IGF-I과 IGF-II에 공히 high-affinity를 나타내고, 상기한 대부분의 IGFs의 작용을 매개한다. Type II IGF receptor 혹은 IGF-II/mannose-6-phosphate receptor는 두개의 서로 다른 binding sites를 가지고 있는데 IGF-II binding site는 IGF-II에만 high-affinity를 나타낸다. Type II IGF receptor의 주요 역할은 IGF-II를 lysosomal targeting하여 ligand를 파괴하는데 있다. 체액 속의 IGFs는 대부분 IGFBP에 결합되어 있다. IGFBPs는 IGF의 저장/운반체 혹은 IGF 작용을 조절하는 역할을 하는 것으로 알려져 있으나 개개 IGFBP의 역할에 대해서는 지극히 제한된 정보만이 알려져 있다. IGFBPs의 IGF ligands에의 affinity는 IGF receptors의 IGFs에의 affinity보다 크기 때문에 대부분의 in vitro 상황 하에서 IGFBPs는 IGF 작용을 억제한다. IGFBP에 결합되어 있는 IGF가 어떤 기작에 의해 IGFBP로부터 분리되어 IGF receptor에 도달하는지는 알려지지 않고 있으나, 혈액과 조직액에 들어있는 불특정 IGFBP protease activity는 IGF의 방출과정에서 일역을 하는 것으로 믿어지고 있다. 최근 연구보고에 의하면 특정 in vitro 상황 하에서 IGFBP-1, -3, -5 등은 IGF와 무관한 작용도 있다는 증빙이 있어 IGF system의 또 다른 차원을 예고하고 있다. IGF family members의 mRNAs & proteins는 영장류, 설치류 및 가축의 자궁조직과 수태물(conceptus)에서 발현되어 자궁과 태아의 성장 발달에 중요한 역할을 한다. 자궁조직의 IGF system의 발현은 성선호르몬, 국소 생리조절인자 등에 의해 발현시기와 장소의 특이성이 결정되며, 발현된 IGFs와 IGFBPs는 autocrine/paracrine mode로 자궁조직에 작용하기도 하고, 자궁강에 분비되어 수태물의 성장 발달에 관여한다. 착상을 전후하여 수태물에서도 IGF system이 발현되는데 개개 IGF family member의 발현 시기는 모체로부터 유래된 mRNA의 유무, 수태물 자체의 genetic programming, 모체와의 상호작용 등에 의해 결정되고, IGFs의 작용 부위 역시 시간(생리적 상태)과 장소의 특이성이 있다. 이와같이 conceptus IGF system의 발현이 시간적, 공간적으로 조절되고있다는 사실은 IGFs가 수태물의 성장 발달에 일역을 한다는 가설을 간접적으로 지지해 준다. 자궁조직과 수태물에서 발현된 IGFs는 세포의 증식과 분화, 포도당과 아미노산의 운반과 단백질합성, placental lactogen과 prolactin 등과 같은 유선자극호르몬의 생성을 자극하고 스테로이드 호르몬의 합성에도 관여한다. 태아의 성장 발달에 있어서 IGFs의 역할은 embryo의 IGF-I, IGF-II, 혹은 IGF receptor gene을 homologous recombination technique에 의해 파괴(gene targeting)하여을 때의 결과로써 입증되었다. 생쥐의 IGF and/or IGF-II gene 혹은 IGF receptor gene을 파괴했을 때 출생 전후 모두 성장 발달이 지연되며 출생시 무게는 정상치의 30-60% 수준에 머물고, 특히 type I IGF receptor gene 혹은 IGF-I과 IGF-II genes를 모두 파괴했을 경우에는 출생 후 곧 치사한다. 자궁 내의 IGFBPs는 IGF ligands를 자궁 내에 제한시키거나 IGFs의 receptor binding을 억제하는 negative regulators 역할을 하는 것으로 믿어지고 있다. 그러나 영장류의 자궁에서 IGFBP-I과 같은 특정 IGFBP는 IGFs보다 월등히 많은 양이 발현 분비되고 있는 것으로 추산되고 있으며, 또한 이 단백질은 모체탈락막세포에서 분비되는 주요 단백질 중의 하나라는 점을 감안할 때 IGFBP-I이 IGF과 무관한 작용이 있을 가능성도 배제할 수 없다. 따라서 IGFBPs의 역할 규명은 IGF system을 이해하는데 중요한 부분을 차지하고 있어 향후 이 분야의 연구에 많은 기대와 촛점이 모여지고 있다.