Conditions for the culture of Pleurotus spp. mycelium using rancid frying oils were investigated. Among the six strains tested, Pleurotus ostreatus CBS 03 showed the greatest mycelial growth on fish paste and ramyon frying oil, and was used in this study. The optimum temperature and pH for mycelial growth were from 25 to $30^{\circ}C$ and pH 5.5 to 6.0, respectively. Tryptone for mycelial growth was better than any other nitrogen sources. The addition of $KH_2PO_4 and MgSO_4$ enhanced mycelial growth at 0.2 and 0.01% on fish frying oil, and at 0.1 and 0.03% on ramyon frying oil. Among the vitamins used, thiamine and nicotinic acid were the most effective ones.
Isolates of Trichoderma spp. collected from Pleurotus ostreatus and P. eryngii beds, which included loosened substrate compactness and development of green colour, were grouped into three species. The occurrence of different species of Trichoderma was as T. cf. virens(70.8%), T. longibrachiatum(16.7%) and T. harzianum(12.5%). The conidia of Trichoderma spp. were ellipsoidal, obovoid and phialides were bowling pins, lageniform and the length of phialides was $3.5{\sim}10.0{\times}1.3{\sim}3.3{\mu}m$. Phialides of T. cf. virens and T. harzianum were tending clustered, but it was solitary disposition in T. longibrachiatum. T. cf. virens was characterized by predominantly effuse conidiation, sparingly branched, and fertile to the apex and it was penicillate type. RAPD analysis could detect variability amongst three different species of Trichoderma using two newly designed URP-primers. However, intra-specific variation could not be detected in all the isolates except for rDNA sequence data classified Trichoderma isolates into three distinct groups representing three species. The profiles of rDNA sequences of isolates representing a species showed high similarity in T. cf. virens and T. harzianum. However, there was a variation in rDNA sequences of isolates representing T. longibrachiatum. The results of present study reveals that molecular techniques of RAPD and rDNA sequencing can greatly aid in classification based on morphology and precise identification of fast evolving species of Trichoderma.
The genetic variations and the rate of mycelial growth in the dikaryon and the monokaryon stages of Pleurotus spp. were surveyed during their subcultures. The highest growth rate was observed on both the 3rd and the 4th subcultures. The remarkably rapid growth rate was detected in P. ostreatus dikaryon. Genetic similarities in the dikaryon and the monokaryon of P. ostreatus were more than 57.5% and 85.7%, respectively, and those of P. eryngii were more than 85.2% and 84.8%, respectively. The genetic similarities of monokaryotic P. ostreatus were higher than those of dikaryotic. The topology of phylogenetic trees showed that the divergence and the clustering patterns of branch did not correlated with the number of subcultures. This suggests that genetic variations occur very randomly on mycelial cultures. These results suggest that the monokaryotic mycelia is genetically more stable than the dikaryotic in subcultures, and that it is very useful to stock monokaryotic mycelia for making spawns and breeding of Pleurotus spp.
The mycelial growth of some mushrooms was inhibited by benomyl treatment. The $ED_{50}$ of benomyl to that of Pleurotus spp., Agaricus bisporus and Flammulina velutipes was 25ppm, 50ppm and 200ppm, respectively, which indicates the former was the most sensitive to the fungicide. The mycelial growth of mushrooms growing on artificial media amended by benomyl was increased when they were cultured successively 5 times and 10 times on the media. The increasing rate of that of each mushroom was the highest at the concentration of $ED_{50}$ of benomyl. The mycelial growth of P. ostreatus was increased progressively as the number of successive culturing increased, while that of P. florida and A. bisporus was increased until they were cultured successively up to 5 times and 7 times, respectively, but they were decreased after that. Mutant sectors of mycelia were induced by successive treatment of benomyl. Mutant sectors of P. ostreatus appeared earlier than those of P. florida and all of them were induced earlier on the media of low contration of benomyl than on that of high concentration. The mycelia of mutant sectors induced by benomyl treatment grow faster than those of mother colony treated with benomyl successively, but there was no difference in resistance against the fungicide between them. The increase of mycelial growth of the mushrooms culturing successively on media containing benomyl indicated that they might obtain the resistance against benomyl.
This study was carried out to identify the phylogenetic relationship among several isolates of Pleurotus species by comparing ITS II region of ribosomal DNA(rDNA) repeat unit. Two primers from ribosomal DNA sequences were chosen to amplify the specific internal transcribed spacer (ITS) II region of Pleurotus spp. The exact ITS II region with an unique band from six species of Pleurotus genus could be amplified using the two primers taken from at the 3'-end of 5.8S rDNA and 5'-end of 28S rDNA. Six representative species of the Pleurotus genus were easily characterized according to the length differences of ITS II region. Furthermore, within P. ostreatus species, different sizes of ITS II region could be observed in the isolates of ASI 2025 and ASI 2095 although they were classified as P. ostreatus by the conventional observation. The nucleotide sequence analyses of PCR-amplified ITS II region indicated that the isolates ASI 2025 and ASI 2095 were different from other Pleurotus spp. When the nucleotide sequences of six Pleurotus species were compared, three typical ITS II regions were highly variable especially at both ends of this region. The phylogenetic tree obtained by the Neighbor program of Felsenstein PHYLIP package with all the nucleotide sequence of Pleurotus spp. indicated that P. ostreatus, P. florida, P. sajor-caju and P. eryngii were closely related to one phylogenetic branch and P. cystidious was related to other branch with P. cornucopiae. The isolates ASI 2025 and 2038, however, were not closely related to any other Pleurotus spp. and formed their own individual branches.
Double-stranded RNA (dsRNA) viruses and single-stranded RNA(ssRNA) viruses were detected in a strain of Pleurotus mushroom cultivated in a farm. Those fungal virsus were purified in the pH 6.0 or pH 7.2 using CsCI or Cs$_{2}$SO$_{4}$ buoyant density centrifugation. Each viral particles were not completely separated at any trials. However, mushroom bacili-form virus contains a single major nucleic acid with 0.7 Kb ssRNA, which might code for 20 Kd viral capsid protein. The dsRNAs are encapsidatred into spherical-form viruses, whereas ssRNA viral genomes are encapsidated into two different sizes of bacili-form particles. A healthy-looking mushroom also contained some spherical-form viruses with dsRNAs. Laboratory strains of Pleurotus ostreatus and a cultivated strain of P. sajor-caju did not show any viral particles. Mushrooms with specific disease symptoms. however, contained at least four different sizes of spherical-form viruses. Thus, we concluded that a bacilli-form virus case a severe disease symptoms of adnormal on mushroom development.
This study was conducted to find out the effects of Thiabendazole on controlling green mold causing serious damage to oyster mushroom, Pleurotus spp. during the cultivation. In vitro, the strains of oyster mushroom such as ASI 2018, 2072 and 2016 were inhibited by 500 ppm of the fungicide, but the strain of ASI 2001 and ASI 2070 was inhibited by 100 and 500 ppm on oatmeal agar, respectively. The mycelial growth of the oyster mushroom started to be inhibition by soak treatment at a 0.2g/1000 ml aqueous solution of the fungicide. When the oyster mushroom and green mold inoculated both or separately on the substrates of soak treatment, the green mold did not grow at all, but the oyster mushroom grown well. The maximum control effect of the green mold showed when $2g/m^2\;and\;5g/m^2$ of the fungicide was sprayed on the surface of substrates before pasteurization. The highest yield of the sporophores of oyster mushroom was obtained from $5g/m^2$ treatment.
Isolates of the different species groups of Trichoderma from the mushroom culture beds were identified according to Rifai's classification and influence of antibiotics produced by them against the oyster mushroom was examined. Trichoderma islolates were identified as Trichoderma hamatum, Trichoderma viride and Trichoderma koningii. Among the Trichoderma isolates, fungistatic action of Trichoderma viride was found to be most remarkable. Pleurotus ostreatus and Pleurotus sajor-caju were the most susceptable of the edible mushrooms tested, followed by Lentinus edodes, Flammulina velutipes and Auricularia auricula. A needle-shaped crystal gained from the chloroform extract of the culture filtrate of Trichoderma viride repressed distinctively the mycelial growth of the oyster mushroom. The grade of repression of the crystal at 500ppm and 1/10 aequous solution of the chloroform extract against the oyster mushroom, seemed equal to that of cycloheximide at $100{\sim}200ppm$.
The production of cellulolytic enzymes by Pleurotus sajor-caju JAFM 1017 was stimulated by folic acid and thiamine-HCl. Among the inorganic salts, optimum concentrations of $KH_2PO_4$ and $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ were 0.2% (w/v) and 0.04% (w/v), respectively, but other inorganic salts were not effective for the production of the enzymes. The optimum culture temperature and pH for the production were $25^{\circ}C$ and 5.5 for avicelase, and $30^{\circ}C$ and 5.0 for CMCase, and $30^{\circ}C$ and 6.5 for ${\beta}-glucosidase$, respectively.
This study was conducted in order to perform efficient extraction of lignocellulolytic enzymes amylase (EC 3.2.1.1), cellulase (EC 3.2.1.4), laccase (EC 1.10.3.2), and xylanase (EC 3.2.1.8) from spent mushroom compost (SMC) of Pleurotus ostreatus, P. eryngii, and P. cornucopiae. Optimal enzyme recovery was achieved when SMCs were extracted with 50 mM sodium citrate (pH 4.5) buffer at $4^{\circ}C$ for 2 hr. Amylase, cellulase, and xylanase activities showed high values in extracts from P. ostreatus SMC, with 2.97 U/g, 1.67 U/g, and 91.56 U/g, respectively, whereas laccase activity and filter paper degradation ability were highest in extracts from P. eryngii SMC, with values of 9.01 U/g and 0.21 U/g, respectively. Enzymatic activities varied according to the SMCs released from different mushroom farms. The synthetic dyes remazol brilliant blue R and Congo red were decolorized completely by the SMC extract of P. eryngii within 120 min, and the decolorization ability of the extract was comparable to that of 0.3 U of commercial laccase. In addition, laccase activity of the SMC extract from P. eryngii was compared to that of commercial enzymes or its industrial application in decolorization.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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