Klochkova, Tatyana A.;Kwak, Min Seok;Kim, Gwang Hoon
ALGAE
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제31권4호
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pp.379-390
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2016
When a multinucleate cell of Bryopsis plumosa was collapsed by a physical wounding, the extruded protoplasm aggregated into numerous protoplasmic masses in sea water. A polysaccharide envelope which initially covered the protoplasmic mass was peeled off when a cell membrane developed on the surface of protoplast in 12 h after the wounding. Transmission electron microscopy showed that the protoplasmic mass began to form a continuous cell membrane at 6 h after the wounding. The newly generated cell membrane repeated collapse and rebuilding process several times until cell wall developed on the surface. Golgi bodies with numerous vesicles accumulated at the peripheral region of the rebuilding cell at 24 h after the wounding when the cell wall began to develop. Several layers of cell wall with distinctive electron density developed within 48-72 h after the wounding. Proteome profile changed dramatically at each stage of cell rebuilding process. Most proteins, which were up-regulated during the early stage of cell rebuilding disappeared or reduced significantly by 24-48 h. About 70-80% of protein spots detected at 48 h after the wounding were newly appeared ones. The expression pattern of 29 representative proteins was analyzed and the internal amino acid sequences were obtained using mass spectrometry. Our results showed that a massive shift of gene expression occurs during the cell-rebuilding process of B. plumosa.
The non-edible plant Jatropha curcas L. is one of the most promising feedstock for sustainable biodiesel production as it is not a source of edible vegetable oils, produces high amounts of oil (approx. 30-60% in dry seeds) and does not require high-cost maintenance. However, as with other undomesticated crops, the cultivation of J. curcas presents several drawbacks, such as low productivity and susceptibility to pests. Hence, varietal improvement by genetic engineering is essential if J. curcas is to become a viable alternative source of biodiesel. There is to date no well-established and efficient transformation system for J. curcas. In this study, we tested various physical wounding treatments, such as sonication and sand-vortexing, with the aim of developing an efficient Agrobacterium-mediated transformation for J. curcas. The highest stable transformation rate (53%) was achieved when explants were subjected to 1 min of sonication followed by 9 min of shaking in Agrobacterium suspension. The transformation frequency achieved using this protocol is the highest yet reported for J. curcas.
옥잠화속 식물 중 잎의 무늬가 다양하고 절엽 수명도 길어 절엽용 품종으로 적합한 'Ellerbroek', 'Francee', 'Halcyon'의 3품종을 대상으로 번식 효율을 높이기 위한 생장조절제인 BA 및 물리적 처리방법간의 액아발생 촉진 효과를 구명하고자 수행하였다. BA의 처리시기 및 농도별 액아 발생정도는 무처리에 비해 월등한 효과가 입증되지 않았다. 물리적 처리방법별 액아 발생 정도는 지상부 절단방법보다는 기부 상처가 더 효과적이었다. 'Ellerbroek'에서는 처리 방법 간에 액아 발생 증가 효과가 그다지 크지 않았으나 'Halcyon'에서는 무처리에 비해 기부 상처가 주당 4개의 액아수가 증가되었다. 또한 'Francee'에서는 액아 발생수가 BA처리나 지상부 절단 방법이 각각 주당 2개와 1.8개인데 반해 기부 상처시 주당 6.1개로 액아 발생 촉진 효과가 가장 뛰어났다.
인버타제는 설탕을 포도당과 과당으로 가수분해하며, 광합성 조직과 다양한 수용체 조직 사이의 탄수화물 재배치에서 중요한 역할을 수행한다. 인버타제는 식물에서 다양한 기능을 수행하기 위하여 여러가지 isoforms으로 존재한다. 불용성 인버타제는 고농도의 염을 포함하는 버퍼용액에서만 추출되며, 이 종류의 인버타제 중 산성 인버타제는 산성 pH(pH 4-5)에서 최적의 활성을 갖는다. 물리적인 상처에 반응하여 잎, 줄기 및 뿌리에서 불용성 산성 인버타제(INAC-INV)가 유도되는 것이 연구되어 왔다. 식물에서 효소의 localization을 검출하기 위한 면역조직화 연구를 수행하였다. 이 연구에서 인버타제의 축적은 기계적 손상 후 72시간에 최고수준에 도달하였다. INAC-INV의 활성은 대조구 잎보다 상처받은 조직에서 3배까지 증가하였다. 면역조직화 결과는 INAC-INV가 세포벽과 세포간극에 축적되어 있음을 보여주었다. INAC-INV는 또한 상처와 가까운 사부조직의 체관세포벽에 위치하였다. 종합해 볼 때, 이 연구는 상처에 의한 INAC-INV 유도는 상처치료 과정에서 필요한 높은 에너지 요구에 대한 반응에 역할을 할 수 있음을 추측케 한다.
본 연구에서는 국내에서 식용으로 재배되고 있는 팽이버섯의 균사체에 대하여 Agrobacterium을 이용한 형질전환을 시도하였다. 특히 물리적 연마제인 미세 aluminum oxide 입자를 팽이 균사체와 함께 강하게 교반함으로써 물리적 상해를 지니는 균사체를 제조하였으며 감압침윤에 의한 Agrobacterium 이용 형질전환을 시도하였다. Hygromycin 저항성을 이용한 선발 결과, 대조군에서는 균사체 생육이 전혀 관찰되지 않은 반면 물리적 상해군에서는 형질전환균사체 생육이 확인되었다. Genomic DNA PCR에 의한 유전자 도입을 확인함으로써 팽이균사체에 대한 매우 간편한 형질전환법을 제시할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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