Han, Jong Soo;Kim, Su Jin;Nam, Yoonjin;Lee, Hak Yeong;Kim, Geon Min;Kim, Dong Min;Sohn, Uy Dong
Biomolecules & Therapeutics
/
제27권1호
/
pp.101-106
/
2019
Most diabetic patients experience diabetic mellitus (DM) urinary bladder dysfunction. A number of studies evaluate bladder smooth muscle contraction in DM. In this study, we evaluated the change of bladder smooth muscle contraction between normal rats and DM rats. Furthermore, we used pharmacological inhibitors to determine the differences in the signaling pathways between normal and DM rats. Rats in the DM group received an intraperitoneal injection of 65 mg/kg streptozotocin and measured blood glucose level after 14 days to confirm DM. Bladder smooth muscle contraction was induced using acetylcholine (ACh, $10^{-4}M$). The materials such as, atropine (a muscarinic receptor antagonist), U73122 (a phospholipase C inhibitor), DPCPX (an adenosine $A_1$ receptor antagonist), udenafil (a PDE5 inhibitor), prazosin (an ${\alpha}_1$-receptor antagonist), papaverine (a smooth muscle relaxant), verapamil (a calcium channel blocker), and chelerythrine (a protein kinase C inhibitor) were pre-treated in bladder smooth muscle. We found that the DM rats had lower bladder smooth muscle contractility than normal rats. When prazosin, udenafil, verapamil, and U73122 were pre-treated, there were significant differences between normal and DM rats. Taken together, it was concluded that the change of intracellular $Ca^{2+}$ release mediated by PLC/IP3 and PDE5 activity were responsible for decreased bladder smooth muscle contractility in DM rats.
Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases (NOXs) are the major enzymatic source of reactive oxygen species (ROS). NOX2 and NOX4 are expressed in the heart but its role in hypoxia-induced atrial natriuretic peptide (ANP) secretion is unclear. This study investigated the effect of NOX on ANP secretion induced by hypoxia in isolated beating rat atria. The results showed that hypoxia significantly upregulated NOX4 but not NOX2 expression, which was completely abolished by endothelin-1 (ET-1) type A and B receptor antagonists BQ123 (0.3 μM) and BQ788 (0.3 μM). ET-1-upregulated NOX4 expression was also blocked by antagonists of secreted phospholipase A2 (sPLA2; varespladib, 5.0 μM) and cytosolic PLA2 (cPLA2; CAY10650, 120.0 nM), and ET-1-induced cPLA2 expression was inhibited by varespladib under normoxia. Moreover, hypoxia-increased ANP secretion was evidently attenuated by the NOX4 antagonist GLX351322 (35.0 μM) and inhibitor of ROS N-Acetyl-D-cysteine (NAC, 15.0 mM), and hypoxia-increased production of ROS was blocked by GLX351322. In addition, hypoxia markedly upregulated Src expression, which was blocked by ET receptors, NOX4, and ROS antagonists. ET-1-increased Src expression was also inhibited by NAC under normoxia. Furthermore, hypoxia-activated extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) and protein kinase B (Akt) were completely abolished by Src inhibitor 1 (1.0 μM), and hypoxia-increased GATA4 was inhibited by the ERK1/2 and Akt antagonists PD98059 (10.0 μM) and LY294002 (10.0 μM), respectively. However, hypoxia-induced ANP secretion was substantially inhibited by Src inhibitor. These results indicate that NOX4/Src modulated by ET-1 regulates ANP secretion by activating ERK1/2 and Akt/GATA4 signaling in isolated beating rat hypoxic atria.
Phospholipase C (PLC)는 다양한 세포주에서 세포내 신호전달에 중요한 역할을 한다고 알려져 있으나, 생쥐 난자성숙 과정과 착성전 배아발생 과정에서 PLC의 역할과 발현은 아직 연구된 바 없다. 본 연구에서는 난자성숙과 착상전 배아발생 과정에서 생쥐의 PLC \beta 1과 \gamma 1의 유전자 발현을 조사하기 위하여 한 개의 난자 혹은 배아에서 추출된 total RNA를 사용하여 경쟁적 RT-PCR 방법으로 mRNA를 정량하였다. PLC \gamma 1의 유전자 발현을 조사하기 위하여 한 개의 난자 혹은 배아에서 추출된 total RNA를 사용하여 경쟁적 RT-PCR 방법으로 mRNA를 정량하였다. PLC \gamma 1의 유전자는 전혀 발현하지 않았다. 수정후 PLC \betta 1과 \gamma 1의 유전자 발현은 상실기 배아에서 증가하기 시작하여 포배기 배아에서는 현저히 증가하였다. 난자성숙과 착상전 배아발생 과정에서 protein kinase C(PKC) 신호전달체게에 의한 PLC의 역할을 조사하기 위하여 PKC의 억제제인 sphingosin, PKC의 촉진제인 $diC_{8}$, 그리고 PLC의 억제제인 U73122의 효과를 조사하였다. Spihingosine은 처리후 1시간 이내에 대조군에 비해 20% 정도의 난자성숙을 촉지하였으나 U73122는 유효한 효과를 보이지 않았다. U73122는 상실기 배아의 compaction을 억제하였으나 $diC_{8}$에 의하여 부분적으로 극복되었다. 이상의 결과는 PLC \beta 1과 \gamma 1 유전자가 생쥐의 착상전 발생단계에서 특이젖으로 발현하고 있으며, 난자성숙과 착상전 초기배아에서 PKC-PLC 신호전달체계가 관여하고 있으리라 사료된다.
To clarify the effect of extracellular ATP in cultured C6 glioma cells, ATP-induced cytosolic free calcium ($[Ca^{2+}]_i$) mobilization and cell proliferation were investigated. ATP-induced $[Ca^{2+}]_i$ increased in a dose-dependent manner $(10^{-7}\;M{\sim}10^{-3}\;M)$. ATP-induced $[Ca^{2+}]_i$ increases were slightly slowed in extracellular calcium-free conditions especially in sustained phase. ATP-induced $[Ca^{2+}]_i$ increment was also inhibited by the pretreatment of U73122, a phospholipase C (PLC) inhibitor, in a time-dependent manner. Suramin, a putative $P_{2Y}$ receptor antagonist, dose-dependently weakened ATP-induced $[Ca^{2+}]_i$ mobilization. Significant increases in cell proliferation were observed at 2, 3, and 4 days after ATP was added. Stimulated cell proliferation was also observed with adenosine at days 2 and 3. This cell proliferation was significantly inhibited by the treatment with suramin. Ionomycin also stimulated cell proliferation in a concentration-dependent manner. In conclusion, we suggest that extracellular ATP stimulates C6 glioma cell proliferation via intracellular free calcium mobilization mediated by purinoceptor.
Mucin release from hamster tracheal surface epithelial(HTSE) cells can be stimulated by extracellular ATP via activation of P$_2$ purinoceptors located on the cell surface which appears to be coupled to phospholipase C via G proteins. However, our preliminary data indicate that the ATP-induced mucin release involves, in part, activation of PKC, but not an increase in the intracellular Ca++ level, suggesting the presence of another pathway which is separate from the PLC-PKC pathway, In this study, we intended to confirm the previous observation and subsequently identify an additional mechanism. Confluent HTSE cells were metabolically labeled with either $^3$H-glucosamine or $^3$H-arachidonic acid(AA), and release of either $^3$H-mucin or $^3$H-AA was quantified following various treatments. $^3$H-mucin was assayed using the sepharose CL-4B gel-filtration method, whereas $^3$H-AA liberation was measured by counting $^3$H-radioactivity in the chase medium. We found that: (1)Desensitization of PKC by pretreatment with PMA completely abolished the mucin releasing effect of PMA but partially inhibited the ATP-induced mucin release; (2) ATP increases release of $^3$H-AA in a dose-dependent fashion; (3) mepacrine, an inhibitor of PLA$_2$, attenuates ATP-induced mucin release in a dose-dependent fashion. These results confirm our previous notion that the PLC-PKC pathway is responsible, in part, for ATP-induced mucin release. Furthermore, activation of PLA$_2$ appears to be an additional pathway which is involved in ATP-induced mucin release.
The etiology of periodontal disease is multifactorial. Exogenous stimuli such as bacterial pathogens can interact with toll-like receptors to activate intracellular calcium signaling in gingival epithelium and other tissues. The triggering of calcium signaling induces the secretion of pro-inflammatory cytokines such as interleukin-8 as part of the inflammatory response; however, the exact mechanism of calcium signaling induced by bacterial toxins when gingival epithelial cells are exposed to pathogens is unclear. Here, we investigate calcium signaling induced by bacteria and expression of inflammatory cytokines in human gingival epithelial cells. We found that peptidoglycan, a constituent of grampositive bacteria and an agonist of toll-like receptor 2, increases intracellular calcium in a concentration-dependent manner. Peptidoglycan-induced calcium signaling was abolished by treatment with blockers of phospholipase C (U73122), inositol 1,4,5-trisphosphate receptors, indicating the release of calcium from intracellular calcium stores. Peptidoglycan-mediated interleukin-8 expression was blocked by U73122 and 1,2-bis(2-aminophenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid tetrakis (acetoxymethyl ester). Moreover, interleukin-8 expression was induced by thapsigargin, a selective inhibitor of the sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase, when thapsigargin was treated alone or co-treated with peptidoglycan. These results suggest that the gram-positive bacterial toxin peptidoglycan induces calcium signaling via the phospholipase C/inositol 1,4,5-trisphosphate pathway, and that increased interleukin-8 expression is mediated by intracellular calcium levels in human gingival epithelial cells.
This study was undertaken to elucidate the underlying mechanisms of ATP depletion-induced membrane transport dysfunction and cell death in renal proximal tubular cells. ATP depletion was induced by incubating cells with 2.5 mM potassium cyanide(KCN)/0.1 mM iodoacetic acid(IAA), and membrane transport function and cell viability were evaluated by measuring $Na^+$-dependent phosphate uptake and trypan blue exclusion, respectively. ATP depletion resulted in a decrease in $Na^+$-dependent phosphate uptake and cell viability in a time-dependent manner. ATP depletion inhibited $Na^+$-dependent phosphate uptake in cells, when treated with 2 mM ouabain, a $Na^+$ pump-specific inhibitor, suggesting that ATP depletion impairs membrane transport functional integrity. Alterations in $Na^+$-dependent phosphate uptake and cell viability induced by ATP depletion were prevented by the hydrogen peroxide scavenger such as catalase and the hydroxyl radical scavengers(dimethylthiourea and thiourea), and amino acids(glycine and alanine). ATP depletion caused arachidonic acid release and increased mRNA levels of cytosolic phospholipase $A_2(cPLA_2)$. The ATP depletion-dependent arachidonic acid release was inhibited by $cPLA_2$ specific inhibitor $AACOCF_3$. ATP depletion-induced alterations in $Na^+$-dependent phosphate uptake and cell viability were prevented by $AACOCF_3$. Inhibition of $Na^+$-dependent phosphate uptake by ATP depletion was prevented by antipain and leupetin, serine/cysteine protease inhibitors, whereas ATP depletion-induced cell death was not altered by these agents. These results indicate that ATP depletion-induced alterations in membrane transport function and cell viability are due to reactive oxygen species generation and $cPLA_2$ activation in renal proximal tubular cells. In addition, the present data suggest that serine/cysteine proteases play an important role in membrane transport dysfunction, but not cell death, induced by ATP depletion.
Objectives: Shengmaisan (SMS) is a traditional Chinese medicine prescription widely used for the treatment of diverse organs in Korea. The interstitial cells of Cajal (ICCs) are pacemaker cells that play an important role in the generation of coordinated gastrointestinal (GI) motility. We have aimed to investigate the effects of SMS in the ICCs in the mouse small intestine. Methods: To dissociate the ICCs, we used enzymatic digestions from the small intestine in a mouse. After that, the ICCs were identified immunologically by using the anti-c-kit antibody. In the ICCs, the electrophysiological whole-cell patch-clamp configuration was used to record pacemaker potentials in the cultured ICCs. Results: The ICCs generated pacemaker potentials in the mouse small intestine. SMS produced membrane depolarization with concentration-dependent manners in the current clamp mode. Pretreatment with a $Ca^{2+}$ free solution and thapsigargin, a $Ca^{2+}$-ATPase inhibitor in the endoplasmic reticulum, stopped the generation of the pacemaker potentials. In the case of $Ca^{2+}$-free solutions, SMS induced membrane depolarizations. However, when thapsigargin in a bath solution was applied, the membrane depolarization was not produced by SMS. The membrane depolarizations produced by SMS were inhibited by U-73122, an active phospholipase C (PLC) inhibitors. Furthermore, chelerythrine and calphostin C, a protein kinase C (PKC) inhibitors had no effects on SMS-induced membrane depolarizations. Conclusions: These results suggest that SMS might affect GI motility by modulating the pacemaker activity through an internal $Ca^{2+}$- and PLC-dependent and PKC-independent pathway in the ICCs.
Kim, Jung Nam;Song, Ho Jun;Lim, Bora;Kwon, Young Kyu;Kim, Byung Joo
대한약침학회지
/
제16권1호
/
pp.43-49
/
2013
Objective: Pyungwi-san (PWS) plays a role in a number of physiologic and pharmacologic functions in many organs. Interstitial cells of Cajal (ICCs) are pacemaker cells that generate slow waves in the gastrointestinal (GI) tract. We aimed to investigate the beneficial effects of PWS in mouse small-intestinal ICCs. Methods: Enzymatic digestion was used to dissociate ICCs from the small intestine of a mouse. The whole-cell patch-clamp configuration was used to record membrane potentials from the cultured ICCs. Results: ICCs generated pacemaker potentials in the GI tract. PWS produced membrane depolarization in the current clamp mode. Pretreatment with a $Ca^{2+}$-free solution and a thapsigargin, a $Ca^{2+}$-ATPase, inhibitor in the endoplasmic reticulum, eliminated the generation of pacemaker potentials. However, only when the thapsigargin was applied in a bath solution, the membrane depolarization was not produced by PWS. Furthermore, the membrane depolarizations due to PWS were inhibited not by U-73122, an active phospholipase C inhibitor, but by chelerythrine and calphostin C, protein kinase C inhibitors. Conclusions: These results suggest that PWS might affect GI motility by modulating the pacemaker activity in the ICCs.
본 연구에서는 토끼신장 근위세뇨관 일차배양세포에서 브라디키닌의 생리작용이 phospholipase D (PLD)에 의해 매개되는지를 살펴 보기위해 PLD 효소반응의 특이한 성질인 transphosphatidylation 반응의 생성물인 phosphatidylethanol (PEth) 의 세포내 양을 측정함으로 PLD 효소의 관련성을 규명할 수 있었다. 시간경과에 따른 phosphatidic acid (PA) 및 diacylglycerol (DAG) 의 생성을 살펴본 결과 PA가 DAG보다 먼저 생성되어 최고치 (30초)에 도달하였고 DAG는 1분이후부터 5분까지 서서히 생성되는 양상을 나타내었다. 또한 0.5에서 5%까지의 에탄올 존재하에 PA 및 PE소 생성량을 비교해본 결과 에탄올량이 증가함에 따라 PA는 감소하는 반민 PEth 의 생성은 계속 증가하였다. 한편 브라디키닌 농도 변화 실험에서는 브라디키닌농도가 증가함에 따라 PA 및 PEth 둘다 생성이 증가되었다. 이러한 결과로부터 토끼신장 근위세뇨관 세포막에 존재하는 브라디키닌수용체는 브라디키닌에 의해 activation 시 PLD를 직접적으로 활성화시켜 그들의 작용을 세포내로 전달한다는 사실을 알 수 있었다. 또한 PLD 효소활성의 activator로 수용체효능 제외에 칼슘이온, protein kinase C (PKC) 등이 몇몇 다른 실험에 의해 밝혀져 있고, G protein 역시 PLD 효소 활성을 조절하는 역할이 있음이 알려졌다. calcium ionophore 및 칼슘채널길항제인 verapamil을 이용한 실험에서 우리는 브라디키닌의 PLD 활성화는 칼슘이온에 의존적인 경로 및 비의존적인 경로가 같이 존재함을 알수 있었다. 또한 브라디키닌의 PLD 활성화기전이 PKC 의존적인지를 살펴보기위해 PKC activator(PMA) 및 inhibitor (staurosporine)를 이용한 실험에서 브라디키닌은 신장세포에서 PKC를 통하여 PLD를 활성화시킴으로 신호전달을 하는 것으로 추측되었다. 마지막으로 가수분해안되는 G protein 유도체인 GTPrS 및 G protein 활성물질 NaF, 백일해독소등을 이용한 실험에서 G protein 의 PLD 조절활성을 확인할 수 있었다.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.