• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권6호
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• pp.588-593
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• 1993

Xylanase(1, 4-beta-D-xylan xylanohydrolase` EC 3.2.1.8) II was purified from Penicillium verruculosum by using the techniques of two anion exchange chromatographies, and gel filtration. The molecular weight of this enzyme was about 22, 000 as determined by SDS-electrophoresis. The enzyme showed hydropytic activity toward xylan but did not catalyze hydrolysis of Rho-nitrophenyl-beta-D-xylopyranoside, Rho-nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside, Rho-nitrophenyl-beta-D-cellobiopyranoside, and celluloses such as Avicel, cotton, filter paper, carboxymethylcellulose.

• 한국식품영양학회지
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• 제7권1호
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• pp.1-7
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• 1994

To investigate the characteristics of active sites of the D-xylanase and $\beta$-xylosidase purified from Penicillium verruculosum, effects of various chemicals on the enzyme activity were analyzed. The D-xylanase was activated by Cua), however it was inhibited by metal ions, Hg2+ and Mna+, by chemicals, N-bromosuccinimide, iodine, diethylpyrocarbonate, and 2,3-butanedione. These results suggested that the D-xylanase from Penicillium verruculosum contained tyrosine, histidine, arginine and tryptophan at the active center. The $\beta$-xylosidase was inhibited by Hg2+, N-bromosuccinimide and sodium dodecyl sulfate, however it was not effected by Mn2+ and Cu2). It was suggested that the enzyme contained tryptophan at the active center.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권3호
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• pp.182-186
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• 1988

원형질체 융합기술에 의한 Penicillium verruculosum 균주개량 가능성을 검토하였다. 영양요 구변이주간의 원형질 융합체 165주중 cellulase 고생산 융합체로 선별된 6주의 cellulase 활성은 야생주에 비해 2배이상, 모균주에 비해 1.2-4.4배의 증가를 나타냈다. Cellulase 고생산 융합체는 유전적 안정성조사, DNA 함량 및 핵염색 비교검토를 통해 핵융합이 일어난 것으로 확인되었고, 핵형이 이수체이며 4 개월 이상의 계대배양 후에도 자연형질 분리가 거의 일어나지 않는 것으로 보아 이들 융합체의 안정성이 매우 높은 것으로 인정되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권2호
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• pp.163-167
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• 1988

Penicillium verruculosum으로부터 유도된 영양요구성 돌연변이주간의 원형질체 융합을 위한 조건을 검토하였다. 20시간 배양한 P. verruculosum의 균사체에 Novozym 234를 처리하여 원형질체를 추출할 수 있었다. 원형질체 생성 최적조건하에서의 원형질체 생성량은 각 영양요구성 변이주의 균사체 400mg 당 2.4~3.0$\times$$10^7$ 수준이었고, 재생율은 36.6~42. 4%, RMM에서의 환원율은 $10^{-7}$ 수준이었다. 원형질체 융합을 위한 PEG6000의 최적농도는 20%였고, PEG 최적처리시간은 10분, CaCl$_2$최적첨가농도는 10mM, 최적 pH는 5.5였으며, 융합 최적조건 하에서의 융합율은 1.8$\times$$10^{-3}$~3.5$\times$0$^{-3}$ 수준으로 나타났다.

• 한국균학회지
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• 제21권1호
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• pp.28-37
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• 1993

섬유소 분해균인 P. verrculosum의 배양 여액으로부터 endo형 cellulase 인 CMCase IV를 정제하였다. CMCase IV는 13%의 탄수화물과 4.0의 pl값을 가진 산성, 당단백질이었다. CMCase IV의 SDSPAGE 상에서 분자량은 52 KDa이었으며, 효소 활성을 위한 최적 pH 및 온도는 5.0과 $50^{\circ}C$ 였다. CMCase IV를 CMC에 반응시 대부분 glucose와 cellobiose가 생산되었으며, 또한 동시에 transglycosylation 작용을 함께 갖는 것으로 사료되었다. Cellulase 활성 염색법(zymogram)을 통해서 P. verruculosum의 cellulase component가 배지 내에서 aggregation 되어있지 않음을 알 수 있었다. P. verruculosum mRNA의 in vitro 번역을 통하여 CMCase IV를 coding하는 번역산물이 동정 되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제22권1호
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• pp.23-30
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• 1994

Intergeneric hybrids formed between Aspergillus oryzae var oryzae and Penicillium verruculosum F-3 were obtained by nuclear transfer technique. Several auxotrophic mutants isolated fromconidio-spores of the two strains mutagenized with ultraviolet and N-methyl-N-nitrosoguanidine. Optimal conditions for formation of intergeneric hybrids were investigated. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were 3$\times $10$^{-5}$ $~$1$\times $10$^{-5}$. From observation of genetic stability, conidial size, DNA content, nuclear stain, it was suggested that their karyptypes are aneuploid. The hybrid posses the 1.3$~$2.2 fold higher amylase activities than those of parental strains. It was also revealed that some hybids had different isozyme patterns compared to those of parental strains by amylase activity assays.

• 한국식품영양과학회지
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• 제21권4호
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• pp.423-427
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• 1992

Penicillium verruculosum을 xylan을 함유한 액체배지에서 26일간 배양하면서 xylan 분해활성도를 비롯한 몇 가지 변화를 관찰하였다. Xylan과 PNPX 분해활성도는 단백질량의 증가와 함께 배양 8일까지 급격히 증가하였으나 배양액 중의 환원당의 변화와는 비례하지 않았다. 배양 12일째의 배양상징 액을 탄소원으로서 cell-obiose octaacetate를 가한 배양상징액과 함께 전기영동하였을때 서로 다른 단백질 분포양상을 보였으며 본 배양상징액에 있어 섬유소 성분들에 대한 분해활성도는 거의 나타나지 않은 반면 xylan에 대해서는 매우 높은 활성도를 나타냈다. 배양 상징 액에 xylan을 가했을 때 반응 생성물로서 xylose와 xylobiose를 비롯하여 소당류들이 생성됨으로서 endo-type의 분해활성도로 추정 되었으며 이 때 xylobiose가 가장 많은 비율을 차지했다. Xylan과 PNPX분해 활성도에 대한 배양 상징액의 최적온도는 각각 50~6$0^{\circ}C$와 60~7$0^{\circ}C$였으며 최적pH는 각각 3.0-4.0과 4.0-5.0이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권2호
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• pp.156-162
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• 1988

섬유소 분해효소를 생산하는 P. verruculosum F-3 의 세포융합에 관한 연구의 일환으로 균사체로부터의 원형질체 형성과 재생 최적조건을 검토하였다. 세포벽 분해효소로 유효한 각종시판효소제제중 0.5%(w/v) Novozym 234가 가장 효과적이었고 PDY 배지로 3$0^{\circ}C$ 20시간 배양한 균사체 400mg을 3$0^{\circ}C$ 1시간 반응시 가장 많은 원형질체가 형성되었다. 원형질체 형성을 위한 최적 삼투압 조절제는 0.7M sorbitol(pH5.6)이었고 원형질체 재생을 위한 최적 삼투압 조절제는 0.6M MgSO$_4$(pH 5.6)이었으며 RCM에서의 재생율은 4.6~27.8%였다. 원형질체를 RLM에 배양시 균사체로 환원되는 형태적 변화가 관찰되었다.

• 미생물학회지
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• 제31권1호
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• pp.1-8
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• 1993

Aspergillus niger 와 Penicillium verruculosum F-3 균주의 돌연변이체 선발은 ultraviolet (UV) 단일처리와 UV 및 N-methyl-N'-nitrosoguanidine(MNNG) 이중처리에 의해 얻었다. 원형질체 형성을 위한 최적조건으로는 pH 5.8, 상투압안정제로는 0.6 M KCI이 최적이었으며, A-niger 와 P. verruculosum 의 재생율은 각각 54.6%, 49.8% 로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환율은 $7{\times}10^{5}~1{\times}10^{5}$ 이었고, 형질전환체의 유전적 안정성은 4.5%~66.5%, conidia 의 크기와 DNA 함량의 측정결과 각각 $2.6{\pm}0.7{\sim}6.5{\pm}0.5{\mu}m$, 5.7~31.3 ${\mu}g/10^{8}$ condia 를 나타내어 aneuploid 로 추측되었다. 모균주와 형질전환체들간의 유전적 안정성과 효소 활성도를 비교하여 선발되 5 균주의 전제 수용성단백질의 전기영동양상은 차이가 있었으며, 동위효소의 양상은 모균주와 유사하지만 CMCase 의 경우 2 균주(TAPW15706, TAPW157-7), $\beta$-glucosidase 의 경우 5균주 (TAPW157-1, TAPW157-4, TAPW 157-5, TAPW157-6, TAPW157-7)에서 band 의 세기가 증가하였음을 관찰할 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권4호
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• pp.232-239
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• 1991

Caboxymethyl cellulase (CMCase) I was purified from the induced culture filtrate of Penicllium verruculosum F-3 by ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 chromatography and Bio-gel P-150 filtration. The purified enzyme was assumed to be a glycoprotein consisting of 8.5% carbohydrate and having a molecular weight of 70.000 in SDS-polycrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The purified enzyme-specific anti-CMCase I IgG was obtained by rabbit immunization and protein A-sepharose CL-4B chromatography. The fungal poly($A^+$) RNA was isolated from the total RNA of the mycelium grown under cellulase induction conditions by oligo(dT)-cellulosse chromatography. The translation products in vitro were prepared by translating the isolated poly ($A^+$) RNA in rabbit reticulocyte lysate and analyzed by SDS-PAGE and fluorography. Of the translation products, CMCase I was identified by the immunoprecipitation against anti-CMCase I IgG.