유아 분변, 우분, 염소 분변, 개 분변, 돼지 분변, vaginal tract 채취물, 채소류, 부패한 과일류, 김치, 젓갈, 발효 소세지, 원유, 치즈, 발효유, 청국장, 메주, 막걸리 등 다양한 시료로부터 3,000주의 미생물을 분리하였다. 분리미생물은 L. monocytogenes, E. coli O157:H7, S. enterica serovar Enteritidis에 대해 항균활성을 측정하여 박테리오신 생산 미생물 26주를 최종 선발하였다. 16S rDNA gene sequencing 분석을 통하여 동정한 결과, Enterococcus faecalis(7주), E. faecium(8주), E. hirae(5주), Lactobacillus acidophilus(1주), L. amylovorus(1주), L. curvatus(2주), L. plantarum(1주), Pediococcus acidilactici(1주)와 같이 8종의 미생물이 박테리오신을 생산하는 것으로 확인되었다. 미생물이 생산한 박테리오신은 대부분이 단백질 또는 펩타이드성 물질이어서 인간 또는 동물의 소화효소에 의해 분해되므로 식품에서 안전한 천연보존제로 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
단백질이 풍부한 식품을 고온 하에서 조리하는 과정 중에 주로 발생되는 돌연변이원 heterocyclic amines (HCAs)에 대한 유산균의 결합력 및 제거능을 조사하였다. 당 발효능 및 16S rRNA 염기서열 분석을 통해 동정된 19종의 유산균 중 Lactobacillus acidophilus D11, Enterococcus faecium D12, Pediococcus acidilactici D19, L. acidophilus D38, Lactobacillus sakei D44, Enterococcus faecalis D66 및 Lactobacillus plantarum D70의 세포이나 배양 상등액은 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido[4,3-b]indole (Trp-P-1)과 3-amino-1-methyl-5Hpyrido[4,3-b] indole (Trp-P-2)에 의한 Salmonella typhimurium TA98 및 TA100의 돌연변이 유발을 억제할 수 있었다. HCAs에 대한 유산균 세포의 결합력은 cell wall, exopolysaccharide 및 peptidoglycan 보다 높게 나타났다. 한편, 이들의 결합력은 단백질 분해효소, 가열, sodium metaperiodate 및 산 처리에 의해 유의하게 감소되었으므로 세포벽에 존재하는 당이나 단백질 성분이 이들 HCAs을 결합시키는데 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었다. 또한 E. faecium D12, L. acidophilus D38 및 E. faecalis D66의 결합력은 SDS나 금속이온에 의해 감소되었으므로 이들세포와 돌연변이원 사이에는 이온 결합이나 소수성 결합이 작용하는 것으로 추정되었다. 한편, HCAs 결합력이 높은 L. acidophilus D38과 L. plantarum D70은 장관 상피세포에 대한 부착력이 낮으므로 돌연변이원을 세포에 결합시켜 체외로 배출함으로써 독성물질을 제거하는데 효과적인 것으로 확인되었다.
콩을 주원료로 발효하여 제조되는 조미료인 간장의 맛과 품질은 발효 중 미생물의 대사에 큰 영향을 받는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 개량식 간장의 초기 발효과정에서 미생물학적 특성을 분석하기 위해 본 연구원 보유 미생물을 스타터로 활용한 메주와 염수를 이용하여 간장을 제조하였으며, 5주간의 발효과정에서 발효 1주차, 3주차, 5주차 간장 시료의 16S rRNA 유전자를 정량적으로 분석하였다. 발효기간에 따른 미생물의 분포를 분석한 결과 발효 1주차 간장에서는 Halomonadaceae과 미생물이 89.83%를 차지하였으며, 3주차 간장과 5주차 간장에서는 각각 14.46%, 13.78%로 나타나 매우 유의한 수준으로 높은 것으로 나타났다. 종 수준에서 미생물 분포를 분석한 결과 발효 1주차 간장에서는 Chromohalobacter beijerinckii와 Chromohalobacter canadensis가 가장 우점하는 미생물로 나타났으나, 발효 3주차와 5주차 간장에서는 Bacillus subtilis, Pediococcus acidilactici, Enterococcus faecalis가 상대적으로 높은 비율로 우점하는 것으로 나타났다. 또한, 발효과정 중 우점 미생물의 분포 상관관계를 분석한 결과 Chromohalobacter는 Bacillus, Enterococcus와 음의 상관관계를 나타냈다. Beta-diversity 분석 결과 발효 1주차 간장의 미생물 군집은 발효 3주차, 5주차 간장의 미생물 군집과 통계적으로 유의한 수준의 차이가 있는 것으로 나타났으나, 발효 3주차 간장과 5주차 간장의 미생물 군집 사이에는 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다. 간장 발효기간별 바이오 마커를 분석하기 위해 선형 판별 효과 크기 분석을 수행한 결과 호염성 미생물, Bacillus 속 미생물, 유산균의 상대적인 풍부도가 발효기간에 따른 미생물 군집 구조 차이에 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다.
Bulgasem, Bulgasem Y.;Lani, Mohd Nizam;Hassan, Zaiton;Yusoff, Wan Mohtar Wan;Fnaish, Sumaya G.
Mycobiology
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제44권4호
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pp.302-309
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2016
The role of lactic acid bacteria (LAB) in honey as antifungal activity has received little attention and their mechanism of inhibitory of fungi is not fully understood. In this study, LAB were isolated from honey samples from Malaysia, Libya, Saudi Arabia, and Yemen. Twenty-five isolates were confirmed LAB by catalase test and Gram staining, and were screened for antifungal activity. Four LAB showed inhibitory activity against Candida spp. using the dual agar overlay method. And they were identified as Lactobacillus plantarum HS isolated from Al-Seder honey, Lactobacillus curvatus HH isolated from Al-Hanon honey, Pediococcus acidilactici HC isolated from Tualang honey and Pediococcus pentosaceus HM isolated from Al-Maray honey by the 16S rDNA sequence. The growth of Candida glabrata ATCC 2001 was strongly inhibited (>15.0 mm) and (10~15 mm) by the isolates of L. curvatus HH and P. pentosaceus HM, respectively. The antifungal activity of the crude supernatant (cell free supernatant, CFS) was evaluated using well diffusion method. The CFS showed high antifungal activity against Candida spp. especially The CFS of L. curvatus HH was significantly (p < 0.05) inhibited growth of C. glabrata ATCC 2001, C. parapsilosis ATCC 2201, and C. tropicalis ATCC 750 with inhibitory zone 22.0, 15.6, and 14.7 mm, respectively. While CFS of P. pentosaceus HM was significantly (p < 0.05) effective against C. krusei, C. glabrata, and C. albicans with inhibition zone 17.2, 16.0, and 13.3 mm, respectively. The results indicated that LAB isolated from honey produced compounds which can be used to inhibit the growth of the pathogenic Candida species.
김치 발효 중에 주로 나타나는 Lac. plantarum, Leu. mesenteroides, Ped. acidilactici, Lac. brevis 등의 젖산균들이 김치 발효에 미치는 영향을 규명하고자, 이 젖산균들을 순수배양하여 염도 2.31%의 김치즙에 접종한 후 $30^{\circ}C$, $21^{\circ}C$, $14^{\circ}C$, $7^{\circ}C$에서 발효시키면서 pH및 총산도의 변화, 휘발성 유기산과 비휘발성 유기산의 변화를 관찰하였다. Control group과 Leu. mesenteroides를 접종한 시료, 4종의 젖산균을 혼합 접종한 시효들의 발효온도에 따른 pH 및 산도 변화 경향은 서로 매우 유사하며, 특히 1$14^{\circ}C$에서 이러한 경향은 더 뚜렷하게 나타났다. Lac. plantarum이나 Ped. acidilactici 그리고 Lac. brevis를 접종한 시료들은 control group이나 Leu. mesenteroides, 4종의 젖산균을 혼합접종한 시료보다 더 느리게 pH 및 총산도가 변화하였으며 특히 $14^{\circ}C$에서는 control group과 Leu. mesenteroides 그리고 4종의 젖산균을 혼합 접종한 시료에서만이 발효가 진행되었다. 휘발성산과 비휘발성산의 변화 양상도 control group, Leu. mesenteroides를 접종한 시료, 4종의 젖산균을 혼합 접종한 시료에 있어서 서로 매우 유사하였다. 검출한 휘발성 유기산으로는 formfic, acetic acid뿐이었으며, 이들은 Leu. mesenteroides나 Lac. brevis 등에 의해 주로 생성됨을 알 수 있다. Leu. mesenteroides를 접종한 시료에서 다른 발효온도에서보다 $14^{\circ}C$에서 acetic acid의 함량이 높았다. 비휘발성 유기산은 모든 시료에서 lactic acid가 검출되었고, Leu. mesenteroides를 접종한 시료에서 $21^{\circ}C$와 $14^{\circ}C$에 citric aicd가 검출되었으며 succinic acid는 controlgroup과 Lac. brevis를 접종한 시료에서 검출되었다.
The recombinant DNA pLR5cat_PSAB, in which pediocin PA-1 structural and immunity genes (pedAB) fused with the promoter and deduced signal sequence of an ${\alpha}$-amylase gene from a bifidobacterial strain were inserted in Escherichia coli-lactobacilli shuttle vector pLR5cat, was transferred to Lactobacillus reuteri KCTC 3679 and the transformant presented bacteriocin activity. The recombinant L. reuteri KCTC 3679 transformed with the shortened pLR5cat(S)_PSAB, where a nonessential region for the lactobacilli replicon was removed, also showed bacteriocin activity. The molecular mass of the secreted pediocin PA-1 from the recombinant bacteria was the same as that of native pediocin PA-1 (~4.6 kDa) from Pediococcus acidilactici K10 on a sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) gel. In cocultures with Listeria monocytogenes, the recombinant L. reuteri KCTC 3679 effectively reduced the viable cell count of the pathogenic bacterium by a 3 log scale compared with a control where L. monocytogenes was incubated alone.
The objectives of this study were to identify the histamine-forming bacteria and bacteriocin- producing lactic acid bacteria (LAB) isolated from Myeolchi-jeot according to sequence analysis of the 16S rRNA gene, to evaluate the inhibitory effects of the bacteriocin on the growth and histamine accumulation of histamine-forming bacteria, and to assess the physico-chemical properties of the bacteriocin. Based on 16S rRNA gene sequences, histamine-forming bacteria were identified as Bacillus licheniformis MCH01, Serratia marcescens MCH02, Staphylococcus xylosus MCH03, Aeromonas hydrophila MCH04, and Morganella morganii MCH05. The five LAB strains identified as Pediococcus acidilactici MCL11, Leuconostoc mesenteroides MCL12, Enterococcus faecium MCL13, Lactobacillus sakei MCL14, and Lactobacillus acidophilus MCL15 were found to produce an antibacterial compound with inhibitory activity against the tested histamine-producing bacteria. The inhibitory activity of these bacteriocins obtained from the five LAB remained stable after incubation at pH 4.0-8.0 and heating for 10 min at $80^{\circ}C$; however, the bacteriocin activity was destroyed after treatment with papain, pepsin, proteinase K, ${\alpha}$-chymotrypsin, or trypsin. Meanwhile, these bacteriocins produced by the tested LAB strains also exhibited histamine-degradation ability. Therefore, these antimicrobial substances may play a role in inhibiting histamine formation in the fermented fish products and preventing seafood-related food-borne disease caused by bacterially generated histamine.
Park, Jar-Yong;Park, Sun-Jung;Nam, Su-Jin;Ha, Yeong-Lae;Kim, Jeong-Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권5호
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pp.716-721
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2002
The ldhL gene encoding the $_L$-(+) lactate dehydrogenase was cloned from Lactobacillus reuteri ATCC 55739 chromosomal DNA and characterized. An internal 750-bp fiagment of ldhL gene was amplified by PCR using primers based on the conserved region of lactobacilli ldhL genes. A genomic library off. reuteri ATCC 55739 was constructed using pBR322, and colony hybridization experiments were performed using the 750-bp fragment as aprobe. One clone harboring a 4.0-kb PstI fragment was identified, and nucleotide sequencing confirmed it as an open reading frame of 972 bp in size in the middle. In addition to IdhL gene, an ORF homologous to Streptococcus pneumoniae TIGR4 hydrolase gene and 3' part of phosphomevalonate kinase gene (mvaK2) were also found on the 4 kb fragment. $_L$-LDH of L. reuteri ATCC 55739 showed the highest degree of homology with the $_L$-LDH of Pediococcus acidilactici (62.4%), fullowed by the $_L$-LDH of Lactobacillus pentosus (58.7%). The size of IdhL transcript determined by Northern blot was 1 kb, indicating the monocistronic nature of IdhL.
From independent swab samples of the cloaca of indigenous gamecocks (CIG), anus of healthy baby goats (AHG), and vagina of goats (VG) originating from Phitsanulok, Thailand, a total of 263 isolates of lactic acid bacteria (LAB) were collected. Only three isolates, designated C707, G502, and V202, isolated from CIG, AHG, and VG, respectively, exhibited an excellent inhibitory zone diameter against foodborne pathogenic bacteria when evaluated by agar spot test. Isolates C707 and G502 were identified as Enterococcus faecium, whereas V202 was identified as Pediococcus acidilactici, based on 16S rRNA sequence analysis. When foodborne pathogenic bacteria were co-cultured with chosen LAB in mixed BHI-MRS broth at 39℃, their growth was suppressed. These LAB were found to be capable of surviving in simulated stomach conditions. Only the isolate G502 was able to survive in the conditions of simulated intestinal juice. This research suggests that selected LAB could be used as a food/feed supplement to reduce foodborne pathogenic bacteria and improve the safety of animal-based food or feed.
Jariieot is a local food prepared by fermentation of salted fish, Chromis notatus. Since its NaC' content is around 20% like other fermented seafoods, reduction NaCl concentration is desirable to minimize the risk of health hazard. Addition of KCl and enrichment of lactic acid fermentation were attempted to solve the problems resulting from low salt concentration. NaCl and KCl were added to a fish, Chromis notatus simultaneously at concentrations of 10 to 4% and 5 to 2%, respectively. Lactic acid bacteria and glucose at final concentration of 2% were also mixed with the above-salt treated fish to prepare jarijeot. The jarijeot was examined periodically for chemical changes during aging and compared with reference jarijeot containing only 20% of NaCl to find out an appropriate method for quality improvement. The content of ATP and its related compounds was not affected by the concentration of NaCl or the presence of lactic acid bacteria. Nearly no difference in contents of free amino nitrogen, trimethylamine oxide, trimethylamine and volatile basic nitrogen was observed between the jarijeot containing 20% of NaCl only and that containing 10% of NaCl, 5% of KCl, 2% of glucose and cells of Pediococcus halophilus. Moreover, sensory evaluation of both kinds of jarijeots revealed almost the same scores. The number of cells of P. halophilus was maintained at concentration of $10^5$cell/ml for 60days' fermentation in the above mentioned jarijeot containing 10% of NaCl. Its pH was dropped down to 4.2. Accordingly it is possible to prepare jarijeot enriched with lactic acid bacteria if KCl and glucose are added at concentration of 5% and 2%, respectively, in addition to NaCl at a final concentration of 10%.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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