우리나라 주요 담수어종인 미꾸라지(Misgurnus mizolepis)를 어류 염색체 조작 모델로 개발하기 위한 연구의 일환으로 동일 종내 웅성발생성 이배체 유도 조건을 개발하고 유도된 웅성발생성 이배체의 생존능력을 평가하였다. 자외선(UV; $10,800\;ergs/mm^2$)을 이용하여 난자의 유전물질을 불활성화시키고 인공수정 28분 후(제1난할 중기)에 온도처리(고온 자극 $40.5\;^{\circ}C$ 120초 후 저온 자극 $1\;^{\circ}C$ 45분)를 통해 제1난할을 억제하였다. 본 온도처리를 통해 생존력 있는 웅성발생성 이배체들이 유도되었고(평균 부화율, 26.9%), 부화 후 1주일째를 기준으로 평균 웅성발생성 이배체 수율은 최초 처리난의 7%내외로 나타났다. 그러나 웅성발생성 이배체 유도 효율은 cytoplasmic donor의 질에 크게 영향을 받음이 관찰되어 사용한 암컷 친어별로 큰 편차가 관찰되었다. Flow cytometry 분석에 의해 생존력 있는 웅성발생성 개체들의 이배체 복원이 확인되었으며 아울러 형질전환 표지를 이용하여 동형접합성 개체 유도의 가능성이 확인되었다. 웅성발생성 이배체들은 일반대조군 이배체에 비해 낮은 생존능력을 보였으며 특히 부화 후 1개월까지 유의적으로 낮은 생존율을 나타내었다. 그러나 후기 생존능력은 일반 이배체군과 유사하였다.
Toxicity tests in our laboratory are conducted usually with mass-reared organisms. They are under the same environmentel conditions throughout seasons and are supplied at specific age. A total of 38 species of aquatic organisms are being reared. We have attempted to establish pruified strains or to select clones of various parthenogenic organisms. The merits or demerits of our culturing test organisms are discussed. The differences in the susceptibility among clones or strains of test organism are also discussed. For a single species test, algae, daphnia, fish are often used. However, we usually use early stages, but occasionally, adults fish are used for reproduction tests. As an another important aspect, the toxicity through food chains has been studied. In this study, we select a pair of species belonging different trophic levels. The differences between single species tests and multispecies tests will be discussed. Even a single species test intends to assess the effects of chemicals on ecosystem levels, however, this idea is not applicable to ecosystems. Single species tests with standard organisms and multispecies tests are contradictory in concept. One type of multispecles tests is indoor microcosms being composed of severel species artificially assembled, and another is composed of natural components (both indoor and outdoor). We have used three types of outdoor mesocosms using ponds and three types of artificial streams. The mesocosms is useful to not only to analyze the floral or faun61 changes but also to study the fate or behaviour of chemicals in naturd environments. Lastly, usefulness of the field observation or experiments or semi-field experiments will be discussed. This will enhance the exploitation of early warning systems utilizing indicator organisms or animal behaviour.aviour.
Somatic cell nuclear transfer (SCNT) is a useful biotechnological tool for animal cloning. Until now, SCNT has been inefficient, especially in dog. It is believed that an embryo developmental block in SCNT embryos is cause of low production efficiency. However, no studies have been performed on canines for embryo developmental block. In this study, we attempted to evaluate the beneficial role of EDTA in canine parthenogenic (PA) embryos development to overcome embryo developmental block. The PA embryos were divided into 0.01 mM EDTA treated and non-treated groups. Embryo developmental efficiency was measured by activating chemically parthenote. After EDTA induction, PA embryos were evaluated for embryonic development, Reactive Oxygen Species (ROS) activity, mitochondrial integrity, ATP production and genomic activation. The EDTA treated PA embryos showed significantly higher survival rate and improved cavity formation compared to non-treated. Furthermore, cytoplasmic ROS level was mitigated and mitochondrial membrane potential was found significantly higher in EDTA treated group followed by higher ATP production. Moreover, major embryonic genomic activation specific markers/factors were also elevated in EDTA treated group. Conclusively, we elucidated that EDTA showed substantially positive effect to overcome embryo developmental block in canine.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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