• 한국응용곤충학회지
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• 제41권1호
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• pp.49-53
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• 2002

Paenibacillus larvae는 Gram양성의 내생포자 형성 세균으로, 꿀벌의 질병 중 가장 심각한 피해를 입히는 미국부저병(AFB)의 원인균이다. 이 P. larvae를 발병전인 봉군 또는 애벌레에서 보다 빠르게 검출하기 위하여 기니아피그를 이용하여 이 병원균에 대한 다클론 항체를 제작하였고 또한 그 항체의 성능을 평가하였다 제작된 항체를 이용한 ELISA검색법을 개발한 후, 다수의 P. larvae균주를 검사하였다. 그 결과 P. larvae ATCC 25748의 균체를 사용하여 제작된 항체는 ATCC 9545 (대표균주), ATCC 25747, 국내 분리 균주인 SJl5등과 높은 항체 친화성을 나타내었으며. 다른 세균 종들과는 반응하지 아니하였다. 또한 이 ELISA검색법은 미국 부저병의 현장검사에 적용하기 위하여 사용되었으며, 그 결과로 본 연구에서 제시하는 항체는 벌집 내 또는 애벌레 내에 존재하는 P. larvae의 빠른 동정과 모니터 링에 매우 유용함을 보여주었다.

• 한국양봉학회지
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• 제34권2호
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• pp.131-136
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• 2019

Recently, number of honeybees (Apis mellifera) has visibly decreased because they are vulnerable to some diseases like American foulbrood disease. American foulbrood disease, which is caused by Paenibacillus larvae, is emerged as great cause of decrease in number of honeybees. After antibiotic-resistant strain emerged, it is now more difficult to treat those pathogens successfully. Researches on finding alternative antibacterial compound are ongoing. In this study, we examined the antibacterial effect of honokiol on P. larvae. Honokiol showed great antibacterial effect with minimum inhibitory concentration of 12.5 ㎍/mL and minimum bactericidal concentration of 50 ㎍/mL. An agar diffusion test also confirmed the anti-Paenibacillus larvae activity of honokiol with an inhibitory zone of 9±0.5 mm. Since honokiol is known to interact membrane of some bacteria, we measured 260 nm absorbing particles, which could be induced by leakage of cells, and confirmed that the leakage of P. larvae occurred in dose-dependent manners. However, result of crystal violet assay suggested that honokiol has only mild anti-biofilm formation effect on P. larvae, which means honokiol controls the bacteria by inducing the bursting of membrane. Finally, an additive effect of honokiol with tetracycline and terramycin was found using a checkerboard assay with a fractional inhibitory concentration index value of 0.5.

• 생명과학회지
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• 제27권1호
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• pp.67-71
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• 2017

부저병이란 Paenibacillus larvae감염에 의하여 꿀벌 유충의 괴사를 유도하는 질병이다. 우리나라에서는 2008년 봄, 국내에 처음으로 대량 발병 사례가 보고되었으며, 지속적인 2차 피해로 큰 후유증을 앓고 있다. 본 연구에서는 부저병을 효율적으로 관리할수 있는 진단방법을 조사하고자 하였다. 따라서 부저병의 원인균인 P. larvae에서 특이적으로 발현되고 있는 유전자들을 동정하고자 하였으며, 이 유전자들은 주로 부저병균의 독성을 유발하는 것으로 알려진 Toxin1, Toxin2A & 2B, SplA, CBP49, SevA&SevB 들이다. 이들은 1차 PCR 에서는 검출하기 어려웠지만, 2차 nested PCR방법을 이용하여 검출이 용이함을 알 수 있었다. 한편 여러가지 식물 추출물을 혼합한 배지에서 부저병균을 배양하였을 때, 부저병균의 성장저해와 일치하게 우리가 검증한 유전자들의 발현이 감소하는 것을 알 수 있었다. 이러한 결과들은 부저병 원인균의 특이 유전자들은 향후 PCR진단마커로서 활용 가능성이 있을 것으로 사료된다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제25권2호
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• pp.195-203
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• 2012

In reared populations of Allomyrina dichotoma, commercial insects, the skin of last instar larvae was changed softer with opaque white, and infested grubs eventually died. To clarify the cause of the symptom, we collected the larvae of A. dichotoma from five farms and examined their intestinal bacterial florae using pyrosequencing technique. From those results, a member of Paenibacillus was found only in the larvae showing the symptom of disease. Through PCR analysis using a Paenibacillus specific primer set, we obtained the partial 16S rRNA gene sequence and confirmed the microbe as Paenibacillus sp. For clear identification, a whole guts was extracted from each larva showing the sign of the disease and incubated at $70^{\circ}C$ for 15 min to isolate spore forming bacteria. After then, each content of guts was cultured on $MYPGP_{NAL}$ agar medium($12.5{\mu}g/ml$ of nalidixic acid) at $30^{\circ}C$. The 16S rRNA gene sequence analysis for the isolated bacteria showed that they were closely related to P. rigui(97.9% similarity), to P. chinjuensis(96.1% similarity), and to P. soli(95.3% similarity). Additional tests including API test and cellular fatty acid composition analysis were performed, but the strain couldn't be identified at species level, suggesting it may represent novel species of the genus Paenibacillus.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제30권2호
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• pp.40-44
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• 2015

To investigate whether Serratia marcescens (Enterobacteriales: Enterobacteriaceae) isolated from Protaetia brevitarsis seulensis (Coleoptera: Cetoniidae) acts as an opportunistic bacterium in peroral infection, the primary entomopathogenic bacteria Bacillus thuringiensis (Bacillales: Bacillaceae) and Paenibacillus popilliae (Eubacteriales: Bacillaceae) were added to sawdust to perform a bioassay experiment. We found that peroral infection caused by S. marcescens could be fatal beyond a concentration of $4{\times}10^8pfu/mL$ in $2^{nd}$ stage P. b. seulensis larvae and at $6{\times}10^8pfu/mL$ in $3^{rd}$ stage P. b. seulensis larvae. In particular, mortality resulting from a combination of P. popilliae and S. marcescens was markedly increased in $2^{nd}$ stage P. b. seulensis larvae. Therefore, we confirmed that mortality was increased when S. marcescens was infected together with other entomopathogenic bacteria, and that peroral infection itself can be fatal beyond certain concentrations.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 2000년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.133.1-133
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• 2000

No Abstract, See Full Text

• 한국양봉학회지
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• 제32권2호
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• pp.99-109
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• 2017

DWV, IAPV, KBV, SBV, BQCV, kSBV, SBPV and Paenibacillus larvae, Mellisococcus plutonius, Lysinibacillus fusiformis, Klebsiella oxytoca의 뒤영벌 병원체들에 대한 다중 실시간 중합효소 연쇄반응법(PCR)을 개발하였다. 하나의 시료에서 추출된 핵산은 11종 PCR들에 같은 시간 및 조건으로 사용될 수 있으며, 각 병원체 특이 표적 DNA가 PCR 기질로 1000분자가 존재한다면, 해당 특이 PCR 증폭산물들은 정성적, 정량적으로 20분안에 성공적으로 증폭되었다. 우리가 제안하는 이 다중 PCR 검출법이 뒤영벌의 국제교역을 위한 검역검사에 사용되기를 기대한다.

• 한국양봉학회지
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• 제32권1호
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• pp.27-39
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• 2017

꿀벌 6종 주요 감염성 질병을 동시 진단하기 위한 PCR-chip 기반 초고속 다중 PCR 진단법을 개발 하였다. 6종 주요 꿀벌 감염성 병원체들은, 세균성 질병인 미국부저병의 원인균, Paenibacillus larvae와 유럽부저병의 원인균인 Melissococcus plutonius, 또한 진균인 Ascosphaera apis(백묵병), Aspergillus flavus(석고병)와 Nosema apis, Nosema ceranae(노제마병)를 선발하였다. 개발된 PCR-chip 기반 초고속 다중 PCR은, 꿀벌 주요 병원체 6종에 대하여 각기 $10^3$ 분자이상이 존재할 경우 모두 성공적 증폭을 보였으며, 증폭여부의 확인에 걸린 시간(Ct-time)은 6종 중 4종은 9분 내외, 2종은 7분 내외이었으며, 총 40회전의 PCR은 11분 42초, 융점분석 1분 15초로 총 PCR분석에 소요된 시간은 12분 57초(40회전 및 융점분석)이었다. 표준 DNA 기질을 사용한 PCR-chip 기반 초고속 다중 PCR은 100%에 근접한 정확도를 보였으며, 꿀벌 genomic DNA를 사용한 실험에서 false-amplification은 발견되지 아니하였다. PCR-chip 기반 초고속 다중 PCR은 실험실 내 초고속 진단 뿐 아니라 양봉 현장에서도 신속하고 효율적인 병원체 검출법이 될 것으로 기대한다.