• 생명과학회지
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• 제13권6호
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• pp.849-855
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• 2003

NO는 태반의 영양모세포의 증식에서 중요한 신호전달인자로서 작용을 한다. 본 연구에서는 choriocarcinoma 세포주인 BeWo 세포에서 NO에 의한 세포의 증식에서PLC의 관련성을 조사하였다. 세포 내 NO 생성을 자연적으로 유발하는 약물인 SNP를 단독으로 처리하였을 때 BeWo 세포에서 $［^3H］$thymidine의 축적 양이 현저히 증가하였는데 이러한 결과는 NO가 BeWo 세포의 증식을 촉진한다는 것을 보여주고 있다. NO에 의한 BeWo 세포의 증식은 PLC의 억제제인 U73122에 의하여 현저히 감소하였다. BeWo 세포에 SNP를 10분간 처리하였을 때 ERK1/2의 인산화가 증가되는 것을 Western blot으로 확인하였다. 이들 인산화는 U73122에 의하여 아무런 영향을 받지 않았다. $PLC\gamma_1$과 $PLC\gamma_2$에 대한 특이 항체를 이용한 면역침전을 시행한 후 phosphotyrosine에 대한 항체인 PY로 Western blotting을 시행하였을 때 PLC${\gamma}$$_1$은 SNP에 의하여 tyrosine 잔기의 인산화가 이루어졌으나 $PLC\gamma_2$는 인산화가 되지 않았다. SNP에 의한 $PLC\gamma_1$의 인산화는 genistein이나 PD98059를 전 처리하였을 때 억제되었다. 따라서, NO에 의한$PLC\gamma_1$의 tyrosine 인산화는 ERK의 활성을 통하여 일어난다는 것을 알 수 있다 이상의 결과들은 BeWo세포에서 NO는 세포증식을 촉진하며 ERK와 $PLC\gamma_1$의 활성화를 통하여 일어난다는 사실을 제시하고 있다.

• 대한세포병리학회지
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• 제8권2호
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• pp.115-119
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• 1997

Cytologic diagnosis of reactive or malignant effusion is sometimes difficult. Especially, differentiation of benign reactive mesothelial cells from malignant cells in body effusion is more difficult. Recently, immunohistochemistry has been used to diagnose difficult cases. Phospholipase $C(PLC)-{\gamma}1$ is one of the isoenzyme of the PLC which plays central role in signal transduction involving cellular growth, differentiation and transformation by phosphorylating many protein component. Increased expression of $PLC-{\gamma}1$ in human breast carcinoma, colorectal carcinoma and stomach cancers are reported. To evaluate the efficacy of positive $PLC-{\gamma}1$ immunostaining in the diagnosis of malignancy in effusions, paraffin-embedded cell blocks of pleural fluid and ascites from 10 patients(5 metastatic adenocarcinomas, and 5 reactive mesothelial cells) were immunostained with a monoclonal antibody to $PLC-{\gamma}1$. $PLC-{\gamma}1$ immuostained all the adenocarcinomas in cell block(5/5) with intense membrane pattern, however, none of the reactive mesothelial proliferations stained with the diagnostic membrane pattern. Thus, our study strongly supports the conclusion that $PLC-{\gamma}1$ immunopositivity is likely to become a useful adjunct for the diagnosis of malignancy in effusions.

• BMB Reports
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• 제33권2호
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• pp.97-102
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• 2000

Phosphoinositide-specific phospholipase C-${\gamma}1$ (PLC-${\gamma}1$) is a pivotal mediator in the signal transduction cascades induced by many growth factors. Using a yeast two-hybrid system, heat-shock protein 90 (Hsp90) was identified as a PLC-${\gamma}1$-binding protein. A co-immunoprecipitation experiment, using anti-PLC-${\gamma}1$ antibody, demonstrated an in vivo interaction between Hsp90 and PLC-${\gamma}1$ in the NIH-3T3 cells. The interaction in NIH-3T3 was unaffected by the PDGF treatment, inducing phosphorylation and activation of PLC-${\gamma}1$. Direct interaction between Hsp90 and PLC-${\gamma}1$ was confirmed by in vitro binding experiments using purified Hsp90 and PLC-${\gamma}1$. Furthermore, Hsp90 increased the $PIP_2$-hydrolyzing activity of PLC-${\gamma}1$ up to 2-fold at $0.1{\mu}M$ in vitro. Taken together, we show for the first time, the interaction of PLC-${\gamma}1$ with Hsp90, both in vivo and in vitro. We suggest that Hsp90 may play a role in PLC-${\gamma}1$-mediated signal transduction.

• 대한의생명과학회지
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• 제12권4호
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• pp.419-425
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• 2006

Phospholipase $C-{\gamma}1\;(PLC-{\gamma}1)$ is an important signaling molecule for cell proliferation and differentiation. $PLC-{\gamma}1$ contains two pleckstrin homology (PH) domains, which are responsible for protein-protein interaction and protein-lipid interaction. $PLC-{\gamma}1$ also has two Src homology (SH)2 domains and a SH3 domain, which are responsible for protein- protein interaction. To identity proteins that specifically binds to PH domain of $PLC-{\gamma}1$, we prepared and incubated the glutathione S-transferase(GST)-fused PH domains of $PLC-{\gamma}1$ with COS7 cell lysate. We found that 90 kDa protein specifically binds to PH domain of $PLC-{\gamma}1$. By matrix-assisted laser desorption ionization time of flight-mass spectrometry, the 90 kDa protein revealed to be heat shock protein (Hsp) $90{\beta}$. Hsp $90{\beta}$ is a molecular chaperone that stabilizes and facilitates the folding of proteins that are involved in cell signaling, including receptors for steroids hormones and a variety of protein kinases. To know whether Hsp $90{\beta}$ affects on $PLC-{\gamma}1$ activity, we performed $PIP_2$ hydrolyzing activity of $PLC-{\gamma}1$ in the presence of purified Hsp $90{\beta}$ in vitro. Our results show that the Hsp $90{\beta}$ dose-dependently inhibits the enzymatic activity of $PLC-{\gamma}1$ and further suggest that Hsp $90{\beta}$ regulates cell growth and differentiation via regulation of $PLC-{\gamma}1$ activity.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제9권2호
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• pp.288-301
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• 1992

소의 중추신경계의 신경전달인자에 의한 세포막에서의 정보전달 과정에 관여하는 PLC 활성화에 G-단백질의 관여 여부를 관찰하기 위하여 소의 뇌조직의 PLC ${\beta}$, ${\gamma}$ 및 ${\delta}$를 얻어 각 isozyme의 특성을 관찰하였다. 기질용액에 phosphatidyl choline(PC)을 첨가시 PLC 각 isozyme 마다 정도의 차이는 있으나 증가 양상을 보였으며 PLC ${\delta}$는 $100{\mu}M$ $Ca^{2+}$ 농도에서 높은 활성도 증가를 보였다. 세포막 소포체를 형성하기 위하여 $PIP_2$기질과 PC에 detergent로 cholate와 deoxycholate 농도에 따른 PLC 효과 관찰에서 cholate 농도 0.2%에서 1%까지 증가할 때 효소 활성도의 지속적인 상승이 관찰되었고, deoxycholate는 농도가 0.2%에서 높았다가 0.4%에서 낮아졌고 1%까지 증가함에 따라 PLC 효소 활성도는 약간 증가하였다. 기질액에 뇌추출액을 첨가하여 cholic acid 농도에 따른 PLC의 효과를 관찰한 결과 cholic acid 농도 0.2%에서 보다 1%에서 각 isozyme 모두에서 PLC활성도가 증가하였다. 소의 여러 장기에서 PLC isozyme의 분포정도를 방사면역측정방법으로 관찰하였을 때 뇌조직에 가장 많이 분포하고 있으며 특히 PLC ${\beta}$, ${\gamma}$가 많았고, PLC ${\delta}$는 부신에서 가장 많이 분포하였다. 다음으로 PLC ${\beta}$는 부신과 위, PLC${\gamma}$는 부신과 폐순이었다. PLC 효소가 활성화될 때 G-단백질의 관여 여부에 관하여 cholate 0.2%와 0.1%에서 G-단백질과 GTPrS 및 PLC의 결합정도의 관찰은 조직분쇄시료를 소의 뇌 및 부신조직을 이용하여 $^{35}S$-GTPrS 첨가시와 단세포군 항체를 이용한 경우 모두에서 1.49% 이하의 낮은 결합 정도를 관찰하였다. 그래서 정제된 PLC isozyme과 G-단백질 $Go{\alpha}$, $G{\beta}{\gamma}$, Gmix, $Gi{\alpha}$ 및 $Gt{\alpha}$ 각각에 대한 효과 관찰에 서 $Go{\alpha}$와 $G{\beta}{\gamma}$는 PLC ${\beta}$와 ${\delta}$의 활성도를 증가시켰고, PLC ${\gamma}$는 별 영향이 없었으며 Gmix에서는 세효소 모두 증가시켰다. $Gi{\alpha}$는 PLC ${\beta}$와 ${\gamma}$에서만 증가하였다. $Gt{\alpha}$는 PLC ${\beta}$ 및 ${\gamma}$에서 억제하였고 PLC ${\delta}$에서는 증가 양상을 보였다. 그러므로 PLC 활성화에 G-단백질의 관여가 인지되며 PLC isozyme과 G-단백질의 종류에 따라 대개의 경우 증가하는 경향이나 일부는 억제 내지는 별 영향이 없는 것으로 나타났다.

• 대한후두음성언어의학회지
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• 제12권2호
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• pp.126-132
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• 2001

Background and Objectives : Signal traduction through phospholipase C(PLC) participate in the regulation of cell growth and differentiation. Growth factors bind to their receptors and thereby induce tyrosine phophorylation of the phospholipase C-${\gamma}$1(PLC-${\gamma}$1). PLC-${\gamma}$1 is a substrate for several receptor tyrosine kinases and its catalytic activity is increased by tyrosine phosphorylation. Tyrosine kinase phosphorylation of PLC-${\gamma}$1 stimulates PLC activation and cell proliferation. However the signal transduction pathway and the significance of PLC in injured recurrent laryngeal nerve regeneration is unknown. Therefore after we obtained fuctionally recovered rats using PEMF in this study, we attempt to provide some evidence that PLC plays a role in nerve regeneration itself and regeneration related to PEMF through the analysis of the difference between fucntional recovery group and non-recovery group in the recurrent laryngeal nerve. Materials and Method : Using 32 healthy male Sprague-Dawley rats, transections and primary anastomosis were performed on their left recurrent laryngeal nerves. Rats were then randomly assigned to 2 groups. The experimental group(n=16) received PEMS by placing them in custom cages equipped with Helm-holz coils(3hr/day, 5days/wk, for 12wk). The control group(n=16) were handled the same way as the experimental group, except that they did not receive PEMS. Laryngo-videoendoscopy was performed before and after surgery and followed up weekly. Laryngeal EMG was obtained in both PCA and TA muscles. Immunohistochemisty staining and Western blotting analysis using monoclonal antibody was performed to detect PLC-${\gamma}$1 in recurrent laryngeal nerve and nodose ganglion. Results : 10 rats(71%) in experimental group and 4 rats(38%) in the control group showed recovery of vocal fold motion. Functionally-recoverd rats show PLC-${\gamma}$1 positive cells in neuron and ganglion cells after 12 weeks from nerve injury. Conclusion : This study shows that PLC1-${\gamma}$ involved in singnal trasduction pathway in functinal recovery of injured recurrent laryngeal nerve and PEMF enhance the functional recovery by effect on this molecule.

• BMB Reports
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• 제32권2호
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• pp.119-126
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• 1999

The SH3 domain of PLC-${\gamma}1$ has been known to induce DNA synthesis. However, little is known about the putative effector proteins that associate with the domain. In this report, we provide evidence that the SH3 domain of PLC-${\gamma}1$ associates with Shc, which has been implicated in the activation of p21Ras in response to many growth factors. The association between Shc and PLC-${\gamma}1$ is enhanced either by v-Src-induced transformation or EGF-stimulation in vivo and in vitro. Furthermore, from transient expression studies with COS-7 cells, we show that the SH3 domain of PLC-${\gamma}1$ is required for association with Shc in vivo, whereas tyrosyl phosphorylation of PLC-${\gamma}1$ is not. Taken together, we suggest that Shc might be involved in the PLC-${\gamma}1$-mediated signaling pathway.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제1권4호
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• pp.385-392
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• 1997

The phospholipase C (PLC)-mediated intracellular signal transduction pathway is considered to be involved in the regulation of blood pressure. However, little information is available concerning the distributional and functional significance of PLC in the genetic hypertensive rats. As the first step of knowing the role of PLC on hypertension, we investigated the distribution of 6 PLC isozymes $(PLC-{\beta}1,\;-{\beta}3,\;-{\beta}4,\;-{\gamma}1,\;-{\gamma}2\;and\;-{\delta}1)$ in the heart and brain, which are concerned with hypertension, in the normotensive Wistar-Kyoto rat (WKY) and spontaneously hypertensive rat (SHR) using the western blotting and immunocytochemistry. The immunoreactivities of PLC isozymes in brain were detected, but there were no distributional and quantitative differences between the WKY and SHR. In the heart, but the immunoreactivities to $PLC-{\beta}1$ and $-{\gamma}2$ in the SHR were higher than those in WKY. In immunocytochemistry to confirm these western blotting data, $PLC-{\beta}1$ and $-{\gamma}2$ were localized in cardiac myocytes and the intensities of immunoreactivity in SHR were stronger than that in WKY. These results suggest that $PLC-{\beta}1$ and $-{\gamma}2$ would have possibility to concern with the establishment of spontaneous hypertension.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제49권3호
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• pp.310-322
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• 2000

배경 : Phospholipase C는 세포내 신호 전달과정의 초기 단계에 있어서， 매우 중요한 역할을 하는 효소로 알려져 있으며, 세포막에 존재하는 인지질 가운데 중요한 부분을 차지하는 $PIP_2$를 분해하여 제2전령물질인 DAG와 IP3를 생성한다. 이들 제2전령물질은 각각 PKC를 활성화시키고, 세포내의 $Ca^{2+}$농도를 증가 시켜서 세포내 여러 단백질 효소들을 활성화시키는 동시에, PLC 효소는 자체적으로 갖고 있는 고유의 SH2, SH3 및 PH domains 등의 기능 영역을 통해, 다른 신호 전달 인자들과 상호 작용하고, 세포막의 재구성이나, 세포분열, 발안과정에 관여 하게 된다. 이에 저자 등은 이전의 연구에서, 인체 정상 폐조직에서 PLC-${\beta}1$, -${\beta}3$, -${\gamma}1$ 및 -${\delta}1$ 동위효소가 존재함을 보고하였으며, bovine lung 내에서 PLC-${\gamma}1$ 동위 효소를 활성화 시키는 AHNAK 단백을 분리, 정제 및 클로닝 하였고, 이 AHNAK 단백이 인체 폐암조직내에서 정상조직에 비해 증가 되어 있음을 보고하여, 폐암의 발암과정에 있어서 칼슘-inositol 신호전달체계의 이상이 연관 되어있음을 제시하였다. 하지만 아직 인체 폐암조직이나 다른 종류의 폐질환에 대해서는， PLC 동위효소의 발현양상에 대한 보고가 없었으므로, 이에 저자 등은 수술로 적출한 인체 폐암 조직 내에서 PLC 동위 효소의 발현을 연구하여, 폐암의 발암과정에서 이들 효과가 갖는 역할을 규명하고자 하였다. 대상 및 방법 : 아주 대학교 병원에 내원하여 원발성 폐암으로 수술적 절제술을 받은 환자중에서, 신선냉동상태의 암조직과 동일환자의 정상폐조직이 확보가, 가능했던 37예의 환자를 대상으로 하였다. 이들조직을 대상으로 PLC-${\beta}1$, -${\beta}3$, -${\gamma}1$ 및 -${\delta}1$ 동위효소에 대해 Western blot 분석을 시행하였고, 대표적인 표본에 대해서는 PLC-${\gamma}1$에 대한 면역조직화학검사를 시행하였다. 결과 : 연구의 대상이었던 15예의 선암조직 모두에서, PLC-${\gamma}1$ 동위효소의 과발현을 관찰할 수 있었으며, 편평상피세포암 19예 중 16예에서 PLC-${\gamma}1$의 발현이 정상조직에 비해 증가하였음이 확인되었다. PLC-${\delta}1$ 동위효소의 경우, 대부분의 폐암조직에 감소되어 있었다. 하지만 이와는 반대로, 일부 선암 및 편평상피 암 조식(각3예)에서는, 현저한 증가를 보이기도 했다. 또한, 비록 그 증례수가 적기는 하였지만, 소세포 폐암 4예에서는, 모두에서 정상 폐조직보다, PLC-${\delta}1$ 효소의 발현이 현저히 감소되어 있음을 관찰하였다. 결론 : 이상의 결과로 미루어 폐암 조직 내에서 PLC-${\gamma}1$ 동위효소의 발현이 증가되어 있었는데, 이는 저자등이, 이미 보고한바 있는, PLC-${\gamma}1$의 활성화 AHNAK의 과발현과 함께, 폐암의 발암과정에, 칼슘-inositol 신호전달 채계의 이상이 관여할것이라는 실험적인 증거가 될수 있다고 하겠다. 하지만, PLC-${\delta}1$ 동위효소의 감소에 대해서는, 좀더 구체적인 기전의 규명 및 PLC-${\delta}1$ 효소의 역할에 대한 보다 많은 연구가 필요할것으로 사료된다.

• BMB Reports
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• 제40권6호
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• pp.888-894
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• 2007

Src homology (SH) domains of phospholipase C-$\gamma1$ (PLC-$\gamma1$) impair NGF-mediated PC12 cells differentiation. However, whether the enzymatic activity is also implicated in this process remains elusive. Here, we report that the enzymatic activity of phospholipase C-$\gamma1$ (PLC-$\gamma1$) is at least partially involved to the blockage of neuronal differentiation via an abrogation of MAPK activation, as well as sustained Akt activation. By contrast, Overexpression of WT-PLC-$\gamma1$ exhibited sustained NGF-induced MAPK activation, and triggered transient Akt activation resulting in profound inhibition of neurite outgrowth. However, lipase-inactive mutant (LIM) PLC-$\gamma1$ cells fail to suppress neurite outgrowth, although it contains intact SH domains, specifically enhancing the expression of cyclin D1 and p21 proteins, which regulate the function of retinoblastoma Rb protein. These observations show that the lipase inactive mutant of PLC-$\gamma1$ does not alter NGF-induced neuronal differentiation via enzymatic inability and the modulation of cell cycle regulatory proteins independent on SH3 domain.