The purpose of this study was to establish a rapid diagnostic method detecting Aujeszky's disease virus (ADV) DNA in the cultured cell monolayers (PK-15) and tissue sections of ADV(NYJ-1-87)-infected rats and pigs by in situ hybridization(ISH). Detection of specific ADV-DNA in infected cells was conducted by radiolabeled ISH method using $^{32}P-labeled $ DNA probe (BamH1 7 fragment) which contains a 6.3 Kb ADV-DNA insert. Where ADV-DNA was detected by radiolabeled ISH, the deposition of black photographic grains occurred in the nuclei and the cytoplasms of ADV-infected cells. Positive hybridization signal was often observed in the spinal trigerminal nucleus of the pons, the nucleus of the trigerminal ganglion neuron and the epithelial cells of tonsillar crypts. The results suggested that ISH is considered as a highly sensitive and reliable tool for confirmative diagnosis of this viral disease.
The inclusion complexes (ICs) between polylactic acid (PLA) and ${\beta}$-cyclodextrin (CD) were prepared by co-precipitation method in this work. The orthogonal experiments were designed to investigate the influence of different factors on the formation of inclusion complexes. The results suggested that the optimum scheme of inclusion compounds could be obtained when the feeding ratio of CD to PLA (wt%) was 20:1, stirring speed was 6 kr/min and the stirring time was 30 min. The structures and properties of the inclusion complexes were characterized by $^1H$ NMR, FTIR, DSC, FT-Raman, XRD and TGA. The DSC results demonstrated that the crystallization behavior of the inclusion complexes nearly disappeared. It was found that ${\beta}$-CD-PLA inclusion complex had a better thermal stability compared with the neat PLA. The model of the inclusion complexes was proposed on the basis of XRD, $^1H$ NMR and DSC results.
우리 군이 그동안 전차, 자주포, 미사일 등 주요 무기체계를 개발하여 전력화 하면서 외형적으로 괄목할만한 성과를 이루어 왔음에도 불구하고, 개발된 무기가 실제 전장에서 어떤 효과를 발휘할 것인가에 대한 척도를 제시해 주는 무기효과자료를 산출하는 것에 대해서는 관심이 부족하였다. 이러한 이유로 아직까지 무기효과자료 산출을 위한 기반이 미흡하여, 무기효과자료는 대부분 미국으로부터 도입된 JMEM 자료를 활용하고 있고 미 확보된 자료에 대해서는 사용부서에서 각자 연구하여 데이터를 생산, 활용하고 있다. 따라서 본 연구에서는 기존에 수행되어 온 무기효과 산출방법론을 연구하여 간편하면서도 적은 예산으로 신뢰성있는 무기효과자료를 산출할 수 있는 방법을 도출하는 데 중점을 두었다. 미국의 JMEM 방법론으로부터 식별한 절차 및 알고리즘을 활용하고, 현재 한국군이 보유하고 있는 유사 무기체계의 무기효과자료를 기초로 통계 및 시뮬레이션기법을 복합적으로 적용하여 직사화기 중 대표화기인 전차를 중심으로 살상확률(Pk)을 계산하는 방법론을 제시하였다.
Rivaroxaban (RRN) is the first available active direct factor Xa inhibitor (anticoagulant) with oral administration. Due to its success in market, there have been efforts to develop various RRN formulations, and the development of good analytical methods for its in vivo evaluation is an essential prerequisite. Thus, here, a simple and efficient method to determine RRN in rat plasma using liquid-liquid extraction (LLE) and liquid chromatography and multiple reaction monitoring (LC-MRM) was presented. The use of ethyl acetate as the LLE solvent results appropriate extraction and purification of RRN and it also helps the significant reduction of rat plasma volume required for RRN quantitation. The developed method showed good analytical performance including specificity, linearity ($r^2{\geq}0.999$ within 0.5 - 500 ng/mL), sensitivity (the lower limit of quantitation at 0.5 ng/mL), accuracy (89.3 - 107.0%), precision (${\geq}12.7%$), and recovery (89.2 - 105.7%). Additionally, RRN in sample extracts showed good stability. Finally, the applicability of the validated method to the PK evaluation of RRN was confirmed after its oral administration to normal rats. The present method is the first analytical method employing LLE for the simple and efficient extraction and purification of RRN in rat plasma. Therefore, the present method can contribute to the development of new RRN formulations as well as to the monitoring of RRN in special clinical situations through its efficient determination in various samples with or without minor modification.
A simple and specific method for determination of methyltestosterone (MT) has been established by a gas chromatography/mass selective detector and applied in plasma of healthy male volunteers received a single oral dose of 50 mg MT $(Testo^{TM}\;tablets,\;25\;mg)$ for bioavailability test. This method involves using liquid-liquid extraction of the sample with diethyl ether and derivatization with MSTFA. MT showed good resolution in this condition. The detection limit of quantitation was 5 ng/ml. A good linearity (r>0.996) was obtained at the range of 5-250 ng/ml of MT. Intra-day precision and accuracy were 2.76-12.56% and 0.39-8.01 %, and inter-day precision and accuracy were 2.29-17.69% and 0.42-7.99%, respectively. The established method was applied on bioavailability test of MT in human volunteers. The value of $AUC_{0\;to\;last}$ to last was $264.5{\pm}123.9\;ng{\cdot}hr/ml$ and that of $AUC_{0\;to\;inf}$ was determined to be $275.2{\pm}126.5\;ng{\cdot}hr/ml$. The values of $C_{max}$ and $T_{max}$ were $95.9{\pm}67.1\;ng/ml$ and $1.13{\pm}0.9\;hr$, respectively. The mean elimination half-life $(t_{1/2})$ was $4.4{\pm}0.9\;hr$. This analytical method is suitable and useful for the pharmacokinetics and bioequivalence studies of MT.
Kim, So-Hee;Yoo, Hye Hyun;Cha, Eun-Ju;Jeong, Eun Sook;Kim, Ho Jun;Kim, Dong Hyun;Lee, Jaeick
Mass Spectrometry Letters
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제4권3호
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pp.47-50
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2013
An ultra-fast generic LC-MS/MS method was developed for high-throughput quantification of discovery pharmacokinetic (PK) samples and its reliability was verified. The method involves a simple protein precipitation for sample preparation and the analysis by ultra-fast generic LC-MS/MS with the ballistic gradient program and selected reaction monitoring (SRM) mode. Approximately 290 new chemical entities (NCEs) (over 10,000 samples) from 5 therapeutic programs were analyzed. The calibration curves showed good linearity in the concentration range of 1, 2 or 5 to 2000 ng/mL. No significant ion suppression was observed in the elution region of all the NCEs. When approximately 300 plasma samples were continuously analyzed, the peak area of internal standard was constant and reproducible. In the repeated analysis of samples, the plasma concentrations and the area under the curve (AUC) were consistent with the results from the first analysis. These results showed that the present ultra-fast generic LC-MS/MS method is reliable in terms of selectivity, sensitivity, and reproducibility and could be useful for high-throughput quantification and other bioanalysis in drug discovery.
본 연구에서는 FCV 현탁액에 물리, 화학적 위생처리 후 복합효소처리라는 전처리과정을 적용한 뒤 real-time RT-PCR법을 이용하여 살균효능을 분석하였다. RT-PCR 이전에 $37^{\circ}C$에서 30분 동안 PK와 RNase A를 처리함으로써 UV, 열, 염소, 에탄올, 과초산계열 제품에 의해 불활성화 된 바이러스들은 음성 결과를 나타내었고, real-time RTP-CR법을 통해 살균 효능을 정량분석한 결과, 복합효소처리를 했을 경우 무처리구보다 더 높은 살균 효능을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 이로써 Nuanualsuwan S. 등의 선행연구에서와 같이 PK와 RNase A로 전처리하는 단계를 통하여 물리, 화학적 위생처리에 의해 손상되지 않은 바이러스가 RT-PCR법에 의해 증폭되는 것을 방지함으로써 Real-time PCR법에 대한 검출 감도를 높일 수 있음을 확인하였다. 또한, FCV를 검출하기 위해 사용된 RT-PCR과 real-time RT-PCR 두 방법 중에서도 real-time RT-PCR법이 가장 신속하면서도 민감도 높은 결과로 도출되었다. 따라서, 유전자 분석 이전에 복합효소처리는 물리, 화학적 위생처리에 의해 불활성화 된 바이러스의 RNA가 transcription 또는 증폭되는 것을 방지하기 위한 수단으로 real-time RT-PCR법과 결합됨으로써 노로바이러스를 비롯한 식중독 바이러스를 검출하는데 효과적으로 적용될 것으로 판단된다. 또한 식품현장에서 전기영동 과정없이 신속하게 살아있는 바이러스만을 수치적으로 정량화함으로써 식품안전에도 기여할 것으로 사료된다.
Background: Our previously prepared ceftiofur (CEF) hydrochloride oily suspension shows potential wide applications for controlling swine Streptococcus suis infections, while the irrational dose has not been formulated. Objectives: The rational dose regimens of CEF oily suspension against S. suis were systematically studied using a pharmacokinetic-pharmacodynamic model method. Methods: The healthy and infected pigs were intramuscularly administered CEF hydrochloride oily suspension at a single dose of 5 mg/kg, and then the plasma and pulmonary epithelial lining fluid (PELF) were collected at different times. The minimum inhibitory concentration (MIC), minimal bactericidal concentration, mutant prevention concentration (MPC), post-antibiotic effect (PAE), and time-killing curves were determined. Subsequently, the area under the curve by the MIC (AUC0-24h/MIC) values of desfuroylceftiofur (DFC) in the PELF was obtained by integrating in vivo pharmacokinetic data of the infected pigs and ex vivo pharmacodynamic data using the sigmoid Emax (Hill) equation. The dose was calculated based on the AUC0-24h/MIC values for bacteriostatic action, bactericidal action, and bacterial elimination. Results: The peak concentration, the area under the concentration-time curve, and the time to peak for PELF's DFC were 24.76 ± 0.92 ㎍/mL, 811.99 ± 54.70 ㎍·h/mL, and 8.00 h in healthy pigs, and 33.04 ± 0.99 ㎍/mL, 735.85 ± 26.20 ㎍·h/mL, and 8.00 h in infected pigs, respectively. The MIC of PELF's DFC against S. suis strain was 0.25 ㎍/mL. There was strong concentration-dependent activity as determined by MPC, PAE, and the time-killing curves. The AUC0-24h/MIC values of PELF's DFC for bacteriostatic activity, bactericidal activity, and virtual eradication of bacteria were 6.54 h, 9.69 h, and 11.49 h, respectively. Thus, a dosage regimen of 1.94 mg/kg every 72 h could be sufficient to reach bactericidal activity. Conclusions: A rational dosage regimen was recommended, and it could assist in increasing the treatment effectiveness of CEF hydrochloride oily suspension against S. Suis infections.
A self-oscillating interpenetrating polymer network (IPN) poly(acrylic acid)/poly(ethylene glycol) (PAA/PEG) hydrogel was prepared by using radical polymerization with a two-step method. The IPN hydrogel was characterized by FTIR spectroscopy and morphological analysis. The results indicated that the chains of PEG and PAA twined to form porous structure which is beneficial to water molecules entering inside of the hydrogel. In addition, the pH-responsive behavior, salt sensitivity, swelling/de-swelling oscillatory behaviors and self-oscillation in a closed pH oscillator were also studied. The results showed that the prepared hydrogel exhibited pH-sensitivity, good swelling/de-swelling reversibility and excellent salt sensitivity. The self-oscillating behavior of swelling/de-swelling for the prepared hydrogel was caused by pH alteration coupled with the external media. This study may create a new possibility as biomaterial including new self-walking actuators and other related devices.
A new methacrylate copolymer that includes chalcone as a side group, poly(4-methacryloyloxyphenyl-4'-methoxystyryl ketone-co-styrene) was synthesized by free radical copolymerization. FTIR and $^1H$ NMR spectroscopic techniques were used to characterize the homopolymers and copolymers. The copolymerizations were carried out to high conversions. Copolymer compositions were established by $^1H$ NMR spectra analysis. The monomer reactivity ratios for copolymer system were determined by the linearized Kelen $T{\ddot{u}}d{\ddot{o}}s$, and Extended Kelen $T{\ddot{u}}d{\ddot{o}}s$ methods and a non-linear least squares method. The molecular weights and polydispersity index of copolymers were measured by using the gel permeation chromatography (GPC). The effect of copolymer compositions on their thermal behavior were studied by differential scanning calorimetry and thermogravimetric analysis methods. The optical properties of the resulting copolymer were also investigated.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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