Toluate 분해 플라스미드를 pseudomonase cepacia SUB37에서 분리하여 분자량은 한천 젤 전기영동으로 측정한 결과 79. (119kb)로 확인되었다. 이 TOL플라스미드는 Pseudomonas의 다른 균주와 다른 속의 균주에 전달되었다. m-toluate 분해에서 가장 중요한 역할을 하는 catechol-2,3-oxygenase 활성을 P. cepacia SUB37과 transconjugant의 조효소액으로부터 측정한 결과, P. putida mt 2에서와 같이, meta pathway를 거쳐 m-toluate를 분해하는 유전자들이 plasmid에 암호화됨을 알수 있었다. P. cepacia SUB37 유래의 새로운 TOL plasmid는 IncP-4 불화합성군에 속하였고, 이것은 아마도 P. putida의 IncP-9 그룹의 TOL 플라스미드의 유도체로 사료된다.
m-Toluate 최소배지에서 선택적 enrichment culture를 통하여 82개의 세균의 균주를 분리하였으며, ol들 중 두 균주는 Pseudomonas cepacia, 한 균주는 P. Putida, 한 균주는 Yersinia intermedia, 그리고 한 균주는 Flavobacterium odoratum으로 동정되었다. P. cepacia SUB37은 P. putida mt-2의 TOL 플라스미드와 비슷한 크기의 플라스미드를 가지고 있었으며, Flavobacterium odoratum과 Yersinia intermedia는 이보다 더 큰 플라스미드를 갖고 있었다. P. cepacia SUB37은 streptomycin에 감수성을 나타내었으나, rifampicin에는 내성을 나타내었다. 플라스미드를 갖는 P. cepacia SUB37은 탄화수소를 해당 알콜과 알데히드를 거쳐서 benzoate와 toluate 로 분해하였다. 플라스미드 제거실험으로, P. Cepacia SUB37의 플라스미드에는 탄화수소 분해과정 중 toluene과 xylene을 benzoate, toluate로 분해하는 효소와, 계속하여 meta pathway를 거치는 단계의 효소를 코딩하는 유전자들이 있음이 확인되었다. 또한 P. cepacia SUB37은 생장이 왕성하였을 때 m-toluate를 거의 분해하였다.
The enzyme, cis,cis-muconate lactonizing enzyme has been proposed to play a key role in the $\beta$-ketoadipate pathway of benzoate degradation. A 3.2-kb EcoRI fragment termed as pRSU2, isolated from a Pseudomonas cepacia genomic library was able to complement the catB defective mutant. Several relevant restriction enzyme sites were determined within the cloned fragment. In Pseudomonas putida SUC2 carrying pRSU2, the enzyme activity was relatively higher than those of the induced or partially induced state of wild type P. putida PRS2000. It was probably due to higher expression of P. cepacia catB in P. putida PRS2000. It was probably due to higher expression of P. cepacia catB in P. putida. One possible interpretation of these results is that the catB promoter in P. cepacia is recognized within P. putida, resulting in the almost same expression level.
Two cometabolic trichloroethylene (TC) degraders, Pseudomonas putida F1 and Burkholderia (Pseudomonas) cepacia G4, were found to catabolize phenol, benzene, toluene, and ethylbenzene as carbon and energy sources. Resting cells of P. putida F1 and B. cepacia G4 grown in the presence of toluene and phenol, respectively, were able to degrade not only benzene, toluene and ethylenzene but also TCE and p-xylene. However, these two strains grown in the absence of toluene or phenol did not degrade TCE and p-xylene. Therefore, it was tentatively concluded that cometabolic degradation of TC and p-xylene was mediated by toluene dioxygenase (P. putida F1) or toluene-2-monooxygenase (B. cepacia G4). Maximal degradation rates of BTEX and TCE by toluene- and phenol-induced resting cells of P. putida F1 and B. cepacia G4 were appeared to be 4-530 nmol/(min$.$mg cell protein) when a single compound was solely served as a target substrate. In case of double substrates, the benzene degradation rate by P. putida F1 in the presence of toluene was decreased up to one seventh of that for the single substrate. TCE degradation rate was also linearly decreased as toluene concentration increased. On the other hand, toluene degradation rate was enhanced by benzene and TCE. For B. cepacia G4, degradation rates of TCE and toluene increased 4 times in the presence of 50 ${\mu}$M phenol. From these results, it was concluded that a degradation rate of a compound in the presence of another cosubstrate(s) could not be predicted by simply generalizing antagonistic or synergistic interactions between substrates.
Burkholderia cepacia strain G4 (pHG-2) containing toluene 2-monooxygenase and toluene dioxygenase, was able to grow on toluene and accumulate cis-3-methyl-3,5-cyclohexadien-1,2-diol (cis-toluene dihydrodiol) in the liquid culture. The cis-toluene dihydrodiol produced was identical to the authentic compound, as judged through mass spectrometry and nuclear magnetic resonance analysis. Our results indicate that pHG-2 provides an economical means to produce chemically-important chiral synthons while growing on toluene.
Effect of an antagonistic bacterium AF-2001, Pseudomonas cepacia, on control of turfgrass diseases as brown patch, Pythium blight, dollar spot, and large patch were evaluated in vitro and in vivo. Results obtained in this study are summarized as follows. 1. Pseudomonas cepacia AF-2001 showed antagonism against to the pathogens causing brown patch, Pythium blighe, dollar spot and large patch. Especially, the biological agent showed strong antagonistic effect on the causal pathogens of brown patch, dollar spot, and anthracnose, but weak on Pythium blight 2. Populotion density of P. cepacia AR-2001 decreased ra;idly in turfgrass soils. Initial population of the agent was 2.4$\times$107 cfu/g soil, however, decreased to 1.4$\times$103, 6$\times$102 and 0 cfu/g soil on 10, 20, and 30 days after application, respectively. 3. Under the controlled controlled conditions of $27^{\circ}C$ and 95% RH, P. cepacia AR-2001 showed 100% control efficacy on brown patch either by pre-treatment or post-treatment of infection. However, Pythium blight was controlled about 94% by pre-treatment and only 29% by post-treatment 4. In field trials, P. cepacia AF-2001 did not suppress large patch and the control efficacy on other turfgrass diseases was lower than agro-chemicals such as tebuconazole and metalaxyl. Control efficacy of brown patch, Pythium and dollar spot by the biological agent was 57.4%, 40.4%, 61.5~87%, respectively. 5. Growth, color and texture of creeping bentgrass were not differ significantly between AF-2001 treatment and untreated control.
유용 미생물로 선발한 Pseudomonas cepacia, Bacillus cereus 및 균근균을 인삼(Panax ginseng)근권에 처리한 후 이들 미생물들의 근권내 정착 및 근부병의 발생억제에 미치는 영향을 폿트 배양으로 실험하였다. P. cepacia의 단독 처리에서 처리 10일후에 근권에서 조사된 세균수는 6.26 (log cfu/g.soil)이나 B. cereus 등과 혼합 처리한 경우 $5.25{\sim}6.19(log\;cfu/g.soil)$으로 분포수가 적었고 처리기간이 270일 후에는 3.01 (log cfu/g. soil)으로 크게 감소하였다. Fusarium spp.의 근권내 분포수는 처리 $10{\sim}60$일 후에는 $3.33{\sim}3.67(log\;cfu/g.soil)$이었으나 처리 270일 경과 후에는 $3.33{\sim}1.02(log\;cfu/g.soil)$으로 크게 감소되었다. 근부병발생율에 있어서 대조가 4.3의 이병지수를 나타내나 P. cepacia 처리는 1.2로 발생이 크게 억제되었다. P. cepacia와 B. cereus의 혼합처리는 $1.8{\sim}2.3$의 이병지수로 대조 4.3보다는 병발생율이 낮아졌다. 균근균으로 Glomus albidum과 Acaulospora longular 처리는 병발생율 $1.2{\sim}1.6$으로 대조 4.3보다 감소하였다. 세균으로 P.cepacia와 균근균으로 G. albidum 처리는 근부율을 각각 1.2로 낮추는 발병억제 효과가 있다.
To examine the potency of biosorbent, the adsorption capacity of Pseudomonas cepacia H42 isolated from fresh water plant root was compared with Saccharomyces cerevisiae SEY2102 on bases of biomass, concentration of heavy metal, presence of light metals, immobilized cell, and ion exchange resin. P. cepacia H42 biomass of 0.05-0.5 g/L increased adsorption and above 1.0 g/L of yeast biomass was the most effective in adsorption. By applying the same amount of biomass, lead showed the highest adsorption on two strains and the adsorption strength was lead>copper>cadmium on both strains. The high heavy metal concentration induced the high adsorption capacity. P. cepacia H42 adsorption was in the order of copper>lead>cadmium and lead>copper>cadmium by yeast in 10 mg/L. Both strain showed same adsorption strength in the order of lead>copper>cadmium in 100 mg/L and 1000 mg/L. The adsorption capacity of both yeast and P. cepacia H42 was decreased in the presence of light metals and the order of cadmium>copper>lead. $Mg^{2+}$ induced the least adsorption while $Na^+$ induced highest adsorption. The adsorption capacity of immobilized yeast and P. cepacia H42 was detected between 200-400 mL in flow volume and decreased in the presence of light metals. Ion exchange containing light metals caused 30-50% adsorption reduction on both strains.
Pseudomonas cepacia BY21 was found to produce glutaryl acylase that is capable of deacylating glutaryl-7-aminocephalosporanic acid (glutaryl-7-ACA) to 7-aminocephalosporanic acid (7-ACA), which is a starting material for semi-synthetic cephalosporin antibiotics. Amino acids of the reported glutaryl acylases from various Pseudomonas sp. strains show a high similarity (>93% identity). Thus, with the known nucleotide sequences of Pseudomonas glutaryl acylases in GenBank, PCR primers were designed to clone a glutaryl acylase gene from P. cepacia BY21. The unknown -subunit gene of glutaryl acylase from chromosomal DNA of P. cepacia BY21 was cloned successfully by PCR. The -subunit amino acids of P. cepacia BY21 acylase (GenBank accession number AY948547) were similar to those of Pseudomonas diminuta KAC-1 acylase except that Asn408 of P. diuminuta KAC-1 acylase was changed to Leu408.
분리 규주는 운동성을 갖는 그람 음성 간균으로서 catalase 양성 반응을 보였으며, citrate, mannitol, sucorse, frutose, trehaslos 등을 이용하였다. Biolog test 결과, 분리 균주는 burkholderia(Pseudomonas) cepacia 이 것으로 동정되었으며, 85.5%의 유사성을 나타내었다. 분리 균주의 최적온도와 pH는 각각 3$0^{\circ}C$, 7.0이었으며, pH 4.0-8.0의 넓은 범위에서 성장이 가능하였다. 그리고 분리 균주의 유기물의 영향을 알아 본 결과 thiosulfate 배지에 yeast extract를 유일한 탄소원으로 혼합하여 첨가하면 thiosulfate 와 yeast extract 중 하나가 성장 제한 인자 중 하나의 농도를 증가시키면 세포 성장에 따른 균체량이 증가하였다. 본 실험에서는 유기물로는 glucose 보다 yeast extract를 첨가했을 때가 증식 속도와 황산화 속도가 높게 나타났다. Thiosulfate 농도에 따른 분리균주의 황산화 속도와 최대 황산화 속도는 각각 0.56.h$^{-1}$과 0.18 g-S/L.h로 나타났다. 결과는 환산화 속도는 기질 농도가 증가함에 따라 완만하게 증가하여 0.12M에서 0.2 g-S.L.에 도달하였으나 0.16M에서는 급격하게 감소하였다. 분리균의 황하 수소 제거능을 조사하기 위하여 각 flow rate 에 따른 최대 제거 속도는 Vm과 K CIn/R과 CIn의 그래프를 이용하여 Hanes-Wolf 식을 통하여 구했다. 즉, 그래프 기울기와 Y절편으로부터 계산한 flow rate 12 L/h에서의 황화 수소에 대한 Vm과 Ks는 각각 6.25 g-S.㎤.h$^{-1}$과 22.88ppm이다 높은 flow rate에서의 제거 효율과 제거 용량은 역 경향이 나타났다. 이것은 mass transfer 효과 즉, 확산 제한에 기인한 것이지 미생물의 효소 활성의 제한에 의한 것은 아니다 (19), 따라서 biofilter 내로 고농도의 황화 수소가 유입 될 때 황화 수소 가스의 flow rate를 줄이든지 또는 적절한 제거 용량에 도달하기 위해 충진물의 부피를 증가 할 필요가 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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