The optimal condition for the production and extraction of monacolin K was reported. HPLC was used to determine monacolin K a kind of metabolite of Monascus from red-koji made of Monascus purpureus CBS 281.34. After culturing Monascus in solid and liquid media at $30^{\circ}C$ for 10 days, each of these were inoculated with soybean, wheat, barley, waxy rice, and rice and cultivated at $30^{\circ}C$ for 11 days. The production of monacolin K was the highest(0.35g/100g) when cultured with rice. The yield of monacolin K in red-koji increased with drying temperature and time according to the removal of water. Considering monacolin K content and the degree of death of Monascus, red-koji was dried at $80^{\circ}C$ for 60 min. Although monacolin K in red-koji was mostly extracted by 80% ethanol, there was no difference in monacolin K between shaking for 1 min and extraction for $0{\sim}24$ hr after sonication for 7 min. The extracted yield of monacolin K was the highest when the ratio of red-koji and 80% ethanol was 1:9. Moreover, the production of monacolin K appeared to be parallel with that of the pigment.
The present research was performed to determine the optimal firing condition and holding time for malayaite crystal, which is responsible for the stable pink-red coloration in glaze at high temperatures, using Cr$Cl_3$ as chromophore for the synthesis of $Cr_2O_3-SnO_2-CaO-SiO_2$ system pigments. The malayaite crystal was influenced by the raw materials used for synthesis, firing temperature, and holding time. Thus there are differences in the crystal phase and in the coloration according to the condition of synthesis. When Cr$Cl_3$ was used as chromophore, the pigment could be synthesized at lower temperatures, because Cr$Cl_3$ melts at $1500{^{\circ}C}$, which is much lower than the temperature at which $Cr_2O_3$ melts (higher than $2435{^{\circ}C}$). And the employed Cr ion showed a change in oxidation state. When a mineralizer was used to improve the employment of malayaite and the Cr ion, and the low temperature was maintained at which the malayaite crystal is produced, the production of malayaite crystal was promoted and the employment of chromophore was also promoted in the oxidation state of Cr (IV). The results of the experiment showed that the optimal firing condition was 18 h of holding time at $800{^{\circ}C}$, using Cr$Cl_3$ as chromophore, followed by 2 h at the raised temperature of $1150{^{\circ}C}$. The change in coloration of the Cr (IV) employed by malayaite showed a very rich color of red. Thus it was possible to effectively synthesize sphene-pink pigments with more red tint at a low temperature.
These experiments were carried out to establish the optimal condition of electrostimulatin inducing cell fusion and oocyte activation for nuclear transplantation in mouse embryos. Eggs selected for cell fusion or activation by electrostimulation were equilibrated for 5~10 min. in 0.3M sucrose solution and electrostimulated for 60$\mu$sec using 1 pulse of 60, 70, 80, 90 or 100 volts DC with electrodes 0.2 mm apart. Then they were cultured in 20${mu}ell$ dropsof Tyrode's solution. The results of these experiments are as follows : 1. When one pulse of 60, 70, 80, 90 or 100 volts DC for 60$\mu$sec were applied to 2-cell embryos for fusion of blastomeres, fusion rates were 50.0, 81.7, 91.7, 100 and 100%, respectively ; and developmental rates of fused embryos to blastocyst were 76.7 to 81.5%. Higher fusion rates were observed in 90V and 100V. 2. The average cell number in fused embryos developed to blastocyst was about half of the cell number in diploid controls; and the cell number decreased with increasing of voltages. 3. When pulse numbers were increased, fusion rates improved, but developmental rates were not signficiantly different from the group for which the number of pulse was not increased. And the cell number of blastocyst decreased even more. 4. Oocytes aged for 6hrs after ovulation were electrostimulated for oocyte activation by the same method used for cell fusion. Rates of oocyte activated by electrostimulation were 45.3 to 60.4%, and fragmentation rates were 7.5~15.1%. The lysis rates were 17.0~34.0%. The results of these experiments indicate that the optimal condition for achieving cell fusion and activation is 1 pulse, duration 60$\mu$sec in 90 Volt. The results also show that this condition is suitable for nuclear transplantation using mouse eggs.
ρ-Hydroxyacetophenone is an important and versatile compound that has been widely used in medicine, cosmetics, new materials, and other fields. At present, there are two ways to obtain ρ-hydroxyacetophenone. One is to extract it from plants, such as Artemisia capillaris Thunb and Cynanchum otophyllum Schneid, and the other is to synthesize it by using chemical methods. Of these two methods, the second is the main one, although it has problems, such as flammable and explosive reagents, difficult separation of by-products, and harsh reaction conditions. To solve these issues, we adopted genetic engineering in this study to construct engineered Escherichia coli containing Hped gene or EbA309 gene. Whole-cell biotransformation was conducted under the same conditions to select the engineered E. coli with the higher activity. Orthogonal tests were conducted to determine the optimal biotransformation condition of the engineered E. coli. The results showed that the optimal condition was as follows: substrate concentration of 40 mmol/l, IPTG concentration of 0.1 mmol/l, an induction temperature of 25℃, and a transformation temperature of 35℃. Under this condition, the effects of transformation time on the ρ-hydroxyacetophenone concentration and cell growth were further studied. We found that as the transformation time extended, the ρ-hydroxyacetophenone concentration showed a gradually increasing trend. However, when the ρ-hydroxyacetophenone concentration increased to 1583.19 ± 44.34 mg/l in 24 h, cell growth was inhibited and then entered a plateau. In this research, we realized the synthesis of ρ-hydroxyacetophenone by biotransformation, and our findings lay a preliminary foundation for further improving and developing this method.
Marine microorganism strain 96CJ10356 produced exopolysaccharides, designated as EPS-R. To optimize culture conditions for the production of EPS-R, carbon, nitrogen, mineral salt, temperature, and pH were examined. STN medium was suggested as follow; sucrose 20, tryptone 10, NaCl 10, $MgSO_4$ 5, $CaCl_2$ 1, $KH_2PO_4$ 0.0076, $K_2HPO_4$ 0.0083, $FeCl_2$ 0.005, $MnCl_2$ 0.001, $NaMoO_4$ 0.001, $ZnCl_2$ 0.001 (g/1) and pH 7.0 About 9.23 g/l of EPS-R was obtained from the STN medium after cultivation for 120 h at $25^{\circ}C$ in 5-liter jar fermentor with an aeration rate of 0.17 vvm. Apparent viscosity and flocculation activity of the culture broth were increased with the production of the EPS-R and the maximal values were reached to 415 cp and 1400 units/ml against 0.5 % activated carbon, respectively.
Culture conditions and nitrogen sources were optimized for production of erythritol, a natural sweetener, by Candida magnoliae M26. The optimal culture conditions were found to be culture temperature of $28^{\circ}C$, initial pH of 7, aeration of 1 vvm and agitation speed of 500 rpm in a 2.5 1 jar-fermentor. Glucose was chosen as the best carbon cource bsed on cell growth and erythritol productivity. Kight steep water(LSW) and corn steep liquor (CSL) which are by-products in starch processing from corn were tested as a nitrogen source substitute for yeast extract. The use of either LSW or CSL did not change the fermentation performance. The experimental results using LSW and CSL showed 1.5 times higher in cell growth and almost the same value in erythritol productivity com-pared with the control fermentation using yeast extract as a nitrogen source. These results suggested that either LSW of CSL could be used as a nitrogen source in a large-scale fermentation for erythritol production.
The influences of glucose concentration, initial medium acidity (pH), and temperature on the growth and ethanol production of Saccharomyces cerevisiae NK28, which was isolated from kiwi fruit, were examined in shake flask cultures. The optimal glucose concentration, initial medium pH, and temperature for ethanol production were 200 g/l, pH 6.0, and $35^{\circ}C$, respectively. Under this growth condition, S. cerevisiae NK28 produced $98.9{\pm}5.67$ g/l ethanol in 24 h with a volumetric ethanol production rate of $4.12{\pm}0.24g/l{\cdot}h$. S. cerevisiae NK28 was more tolerant to heat and ethanol than laboratory strain S. cerevisiae BY4742, and its tolerance to ethanol and fermentation inhibitors was comparable to that of an ethanologen, S. cerevisiae D5A.
The optimum nutritional and cultural conditions of polygalacturonase by Ganoderma lucidum in liquid culture were studied. The optimal temperature, pH, and the duration of culture for production of the enzyme was $30^{\circ}C$, 5.5 and 14 days, respectively. The maximal production of the enzyme was obtained in a synthetic medium containing 10 g of pectin, 10 g of soluble starch, 1 g of yeast extract, 2 g of peptone, 1 g of phenylalanine, 2 g of $KH_2PO_4$, 0.2 g of $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.05 g of $CaCI_2$ and 100 g of $thiamin{\cdot}HCI$ in 1000 ml of distilled water.
Exogenous glutamine synthetase (GS) was used efficiently as a selectable marker to identify successful transfectants for the production of erythropoietin (EPO) in Chines hamster ovary (CHO-K1) cells in the absence of glutamine. Inclusion of methionine sulphoximine (MSX), an inhibitor of glutamine synthetase, enabled further selection of clones with relatively high levels of transfected glutamine synthetase and EPO genes which were coupled together. In this study, a new cell line was established by using GS system and enhancement of EPO production by zinc ion was evaluated using the transfected CHO-K1 cell line under normal condition. It was found that EPO production from CHO-K1 cells was enhanced 40% when the optimal amount of zinc ion was added.
In this study, we tested possibility of replacing nitrite salts, which were always added during the meat product processing, with the metabolites produced by antimicrobial and red pigment producing Monascus strains. We have already shown that Monascus No. 116 strain has the highest antimicrobial activity among the strains isolated from Ang-Khak. Monascus isolate No. 229 was chosen due to its outstanding red pigment producing ability. The red pigment production by No. 229 was highest in the medium containing 8% sucrose, 2% yeast extract, 0.1% K2HPO4, 0.5% MgSO4. Optimum pH and temperature for the red pigment production were pH 6.2 and 3$0^{\circ}C$, was found in spot or Rf value 0.54 on TLC plate using ethyl acetate-acetone-water (4:4:1, v/v/v) as development solvent system. Isolate No. 116 and No. 229 were cultured in a optimal condition for the antimicrobial activity and red pigmentation. The culture concentrates were applied in situ to the production of instantly processed ham. Mixed application of 89 ppm Na-nitrite and 300 ppm of culture broth concentrate of Monascus isolate No. 116 and 500 ppm of red color produced by Monascus isolate No. 229 showed similar results with the single application of 94 ppm Na-nitrite. These results confirmed that the antimicrobial activity and red pigment of Monascus strains might be valuable to replace Na-nitrite salt in meat processing.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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