Pseudomonas maltophilia N246 carrying on OCT plasmid grew on n-alkanes of 6 to 14 carbon atoms, but not on n-alkanes of more carbon atoms. P. maltophilia strains with and without OCT plasmid could utilize primary alcohols. aldehydes and fatty acids derived from n-alkane. The N246 strain could also utilize monocarboxylic and dicarboxylic acids, and terminal branched dimethyloctane. Unlike the genes of alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase which were located on both the chromosome and the OCT plasmid, genes for the alkane hydroxylase components were located only on the OCT plasmid in P. maltophilia N246.
오랜 세월 동안 저온환경으로 유지된 남극생태계에서 원유분해능을 나타내는 저온성 세균을 24균주 분리하여 그 중 분해능이 우수한 균주를 선발하였고, 그 중 활성이 가장 높은 A1-1을 선발하여 동정한 결과 Acinetobacter calcoaceticus로 밝혀졌다. A.calcoaceticus A1-1에는 분자량 약 110Md인 plasmid 하나만이 확인됐으며 mitomycin에 의한 plasmid curing은 transfer를 계속할수록 또는 온도를 상승시킬수록 curing의 빈도가 높았다. plasmid가 제거된 균주의 탄화수소 분해능 실험결과 저온성 세균 A. calcoaceticus A1-1의 alkane 화합물 이용능력은 plasmid에 유전정보가 있음을 시사했다. 또한 본 균주의 plasmid 안정성은 세 번째 transfer 후에도 90%정도의 안정성을 보여주었고 항생제 중 ampicillin에 대한 내성을 나타내었고 streptomycin, chloramphenicol, kanamycin, tetracycline에 대해서는 감수성을 나타내었다. 이와같은 결과들은 A. calcoaceticus A 1-1가 매우 안정적이며 항새제 내성과 관련이 있는 유류이용에 관여하는 프라스미드를 갖고 있음을 시사한다.
원유 분해세균에 의한 원유 분해능을 조사한 결과, Xanthomonas camperstris M12, Xanthomonas sp. M28, Acintobacter lwoffi G1, Klebsiella pneumoniae L25, 그리고 Pseudomonas maltophilia N246 등의 순서로 나타났다. Xanthomonas maltophilia M12, Xanthomonas sp. M28, 그리고 Pseudomonas maltophilia N246 균주 모두 pctane 분해시의 온도는 $30^{\circ}C$에서 최적이었으며, 최적 pH는 X.camperstris M12와 Xanthomonas sp. M28이 7.0-7.5 이었고, P.maltophilia N246이 7.5-9.0이었다. N246 균주의 최적 NaCl농도는 3.0-3.5 이었다. P.maltophilia N246와 X.campestris M12는 모두 플라스미드를 갖고 있음을 확인하였고, N246 균주로 부터 플라스미드를 제거하였을 경우 octane 분해능이 소실되었으므로 이 플라스미드 위에 octane 분해 유전자가 있음이 확인되었다. 이 균주이 OTC 플라스미드의 크기는 118kb이었다. 또한, N246 균주는 ampicillin 항생제에 내성을 나타내었다.
Nopaline-type Agrobacterium tumefaciens strain C58 cannot utilize octopine (Oct) as the sole carbon and nitrogen sources. This strain harbors two plasmids; a virulent plasmid, pTiC58, and a megaplasmid, pAtC58. From strain NT1, which is a derivative of C58 harboring only pAtC58, we isolated spontaneous mutants that utilize Oct as the sole nitrogen source. These Oct-catabolizing mutants, however, could not utilize the opine as the sole carbon source. In contrast, strain UIA5, a plasmid-free derivative of C58, could not give rise to such mutants. The mutations isolated from NT1 were mapped to socR in pAtC58, which is a negative regulator of the soc operon responsible for the uptake and catabolism of an Amadori opine, deoxyfructosyl glutamine (Dfg). A derivative of UIA5 carrying a clone of the soc operon with a transposon inserted in socR also utilizes Oct as the sole nitrogen source. However, UIA5 harboring the operon with mutations in each of the structural genes in the soc operon, socA, B, C, and D, lost the ability to generate spontaneous Oct-utilizing mutants, suggesting that soc genes in pAtC58 are required for the utilization of Oct as a nitrogen source, and that derepressed expression of these genes allows cells to utilize Oct. In contrast, Oct-catabolizing mutants derived from C58, which grew using Oct as the sole nitrogen source, could also utilize the opine as the sole carbon source. These mutants did not carry any detectable mutations in socR or the region upstream to the gene in pAtC58, suggesting that mutations occurring elsewhere in the genome, most likely in pTiC58, allow the uptake and catabolism of the opine.
Xanthomonas campestris M12는 octane을 분해할 수 있는 OCT 플라스미드를 갖고 있으며, 이 플라스미드의 분해 능력으로 $C_8$에서 $C_{16}$까지의 n-alkane을 이용할 수 있었다. X. campestris M12 균주는 n-alkane을 이용하여 alcohol, aldehyde, fatty acid를 거쳐서 분해할 수 있으나 heanoic acid, adipic acid, pimelic acid 그리고 heptanal은 이용할 수 없었다. 또한 이 균주는 straight fatty acids의 monoterminal oxidation과 diterminal oxidation에 의하여 n-alkane을 분해할 수 있으며, branched-chain alkane도 이용할 수 있었다.
이 연구는 단일 세포로 분리된 유도만능줄기세포(induced pluripotent stem cells, iPSCs)에 anoikis 세포사멸을 억제할 수 있는 Rho-associated protein kinase (ROCK)의 억제제를 처리하여 iPSCs의 세포 생존성을 향상하고자 하였다. Episomal plasmid 방법으로 확립된 iPSCs를 단일세포로 분리한 후, ROCK 억제제 Y-27632 dihydrochloride (Y-27632)를 0 uM, 0.5 uM, 1 uM, 2.5 uM, 5 uM, 7.5 uM 및 10 uM 농도별로 5주일 동안 각각 처리하였을 때, 5 uM 이상의 농도에서 세포의 생존율이 유의적으로 향상되었고, 10 uM의 Y-27632을 0일, 1일, 2일, 3일, 4일 및 5일 동안 처리하였을 때, Y-27632의 노출 기간이 길어질수록 세포의 생존율이 유의적으로 향상되는 것을 관찰하였다. 그러나, Y-27632의 노출 후, iPSCs의 형태학적 분화가 관찰되어 10 uM의 Y-27632에서 5일 동안 iPSCs에 처리 한 후, 줄기세포학적인 특성을 비교 조사하였다. 우선, octamer-binding transcription factor 4 (OCT-4), homeobox protein NANOG (NONOG) 및 SRY-box 2 (SOX-2) 줄기세포 특이 유전자의 발현은 Y-27632를 처리한 실험군은 Y-27632를 처리하지 않은 대조군에서 서로 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 또한, Y-27632를 처리한 실험군은 Y-27632를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 telomerase 활성과 이것의 활성과 관련된 telomerase reverse transcriptase (TERT) 및 telomerase RNA component (TERC)의 유전자 발현에는 유의적인 차이가 없었다. 이상의 결과로 보아, iPSCs에 Y-27632를 처리하였을 때, iPSCs의 줄기세포의 특정을 유지하면서 anoikis에 의한 세포사멸을 감소시켜 세포 생존율이 증가한다는 것을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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