A fungal strain capable of producing extracellular cellulase was isolated from farmland. It was identified as Aspergillus niger, and named Aspergillus niger KKS. Production of cellulase and xylanase by the A. niger KKS was studied through a shake-flask culture. The effects of culture conditions such as inoculum size, temperature, pH, and medium composition on the cellulase and xylanase production were examined. The optimum temperature and pH for the enzyme production were $30^{\circ}C$ and pH 7.0, respectively. The optimized medium was composed of 2.0% (w/v) rice straw, 0.5% (w/v) proteose peptone, 0.5% (w/v) $KH_2 PO_4$, 0.05% (w/v) yeast extract, 0.01% (w/v) $CoSO_4 \cdot 7H_2O$, and 0.05% (w/v) $CuSO$_4$\cdot 5H_2O$. When the strain was incubated with the optimized medium, it gave the activities of endoglucanase, $\beta$-glucosidase, $\beta$-xylosidase, xylanase were 3.80, 4.20, 4.00, 80.0 (IU/mL), respectively. Filter paper and cotton activities were 0.68 and 0.045 (IU/mL), respectively. The results of this study show that A. niger KKS is a potential organism with a wide spectrum of enzyme activities, such as those of $\beta$-glucosidase, $\beta$-xylosidase, and xylanase.
In order to recover valuable metals from fine-grained electronic waste, bioleaching of Cu, Zn, Al, Co, Ni, Sn and Pb were carried out using Aspergillus niger as a leaching microorganism in a shaking flask. Aspergillus niger was able to grow in tile presence of electronic scrap. The formation of organic acids(citric and oxalic acid) from Aspergillus niger caused the mobilization of metals from waste electronic scrap. In a preliminary study, in order to obtain the data on the leaching of Cu, Zn, Al, Co and Ni, the metal leaching behaviours were accomplished using Organic acid(Citric acid and Oxalic acid) instead of Aspergillus niger. At the electronic scrap concentration of 50g/L, Aspergillus niger were able to leach more than 95% of the available Cu, Co. But Al, Zn, Pband Sn were able to leach about 15-35%. Ni and Fe were detected in the leachate less than 10%.
Aspergillus niger var. macrosporus, Aspergillus fumigatus, Penicillium notatum 및 Penicillium spinulosum의 곰팡이를 배양 온도 및 배양 기간을 달리하여 배양하고 이들 곰팡이가 생산한 지질량과 지질의 지방산 조성을 분석하였다. 이들 곰팡이에 의해 생성된 최대 지질량은 Aspergillus niger var. macrosporus가 17.8%. Aspergillus fumigatus가 31 %. Penicillium notatum이 12.6% 그리고 Pen. spinulosum이 17.5%였다. 이들 균주가 생산한 지질의 주요 지방산은 palmitic acid, stearic acid, oleic acid, linoleic acid였으며 Asp. niger var. macrosporus와 Asp. fumigatus는 전체 배양 기간 동안 oleic acid의 함량이 가장 높았으나 P. nota turn과 P. spinulosum은 linoleic acid의 함량이 가장 높았다. 그리고 지질의 불포화도는 Penicillium속이 Aspergillus속보다 높았다. 한편 지방산 조성은 배양온도에 따라 변화를 보였으나 대부분 일정한 경향을 나타내지 않았는데 Aspergillus fumigatus와 Penicillium notatum에서 저온 일수록 linoleic acid와 불포화도가 높아졌다.
Aspergillus niger KCTC 6144 포자를 alginate bead로 고정화하여 호박배지(포도당 9%, 호박가루 1%, pH 6)를 이용하여 구연산 발효를 수행하였다. 고정화된 A. niger 포자가 bead 내에서 발아하여 균사가 bead를 뚫고 자라났으며 3$0^{\circ}C$에서 4일간 배양 후 그 크기는 2.0~2.5mm에서 6~8mm로 커졌다. 3$0^{\circ}C$에서 5일간 진탕배양(150rpm)으로, 50ml 호박 배지가 든 250ml 삼각 flask를 사용하여, 구연산 생성의 최적 발효 조건을 검토한 결과는 다음과 같다. 탄소원으로 포도당을 12%로 올렸을 때 구연산의 생성이 최고에 달하였고, 질소 및 무기질원으로 1%의 호박가루가 구연산 생성에 가장 알맞는 농도였다. 초기 pH는 6.0, bead의 수가 100개로 하였을 때 구연산 생성이 가장 좋았으며, 포도당 12%, 호박가루 1%로 한 최적 배양 조건에서, 5일만에 구연산이 23.5g/ι로 최고로 생성되었다.
Styrene oxide 계열의 라세믹 에폭사이드 기질에 대한 입체선택적 가수분해능이 우수한 Aspergillus nigerr계열의 생촉매를 선발하였고, A.niger LK 유래의 EHase의 기질 특이성을 분석하였다. A. niger LK의 EHase는 benzene ring에 oxirane ring이 직접 연결되어 있는 styrene oxide, p-nitrostyrene oxide 기질에 대해서는 (R)-이성질체, benzene ring과 oxirane ring사이에 ether 등의 연결 chain이 있는 기질에 대해서는 (S)-이 성질체에 대한 입체선택적 가수분해능이 우수하였다. A niger LK의 EHase 유전자를 RT-PCR 방법으로 클로닝하였고, sequencing을 통해 다른 미생물 유래의 EHase와의 sequence identity 분석 등을 통해 특성을 분석하였다. Yeast 유래의 EHase와는 32% 수준의 sequence identity를 보였으며, Agrobacterisum, Corynebacterium 등의 박테리아 유래 EHase와는 identity가 매우 낮은 특성을 보였다. E. coli 숙주에서 발현된 재조합 EHase의 활성은 라세믹 에폭사이드 기질에 대한 입체선택적 가수분해 반응을 통해 확인할 수 있었다. 클러닝된 EHase의 보다 효율적인 발현 연구가 필요하며, 이러한 재조합 EHase는 고부가가치 광학활성 에폭사이드 제조를 위한 생물전환공정 시스템의 생촉매로 응용될 수 있을 것으로 기대된다.
1998년 전남 신안군의 양파 상온 저장고에서 발생한 검은색의 곰팡이는 검은곰팡이병을 일으키는 Aspergillusniger로 동정되었다. A. niger AnYD-1은 3$0^{\circ}C$에서 균사생장, 포자발아 그리고 양파에 대한 병원성이 가장 양호하였다. PDA 배지 상에서 실시한 in vitro의 실험에서 flusilazole과 hexaconazole은 A. niger AnYD-1의 균사 생장 억제 효과는 적었지만, 병원균에 살균제를 직접 처리하지 않고 증기 상태로 처리하였을 때 포자의 형성을 강하게 억제하는 특이적 인 훈증효과를 보였다. Flusilazole과 hexaconazole의 훈증의 효과는 사용하는 용매, 처리 농도와 배양 온도에 따라서 차이가 있었다. Dimethylsulfoxide와 dimethylformamide를 용매로 사용하였을 때 가장 높은 효과가 나타났으며, 고온에서 배양할수록 포자형성 억제 효과가 크게 나타났다.
본 연구는 곤충으로부터 새로운 항 진균 단백질을 발굴하기 하기 위한 목적으로 누에를 대상으로 Aspergillus niger의 감염을 유도하였을 때 발현되는 유전자의 특성을 분석한 것이다. Annealing control primer 법에 기초한 GeneFishing Kit를 사용하여 A. niger를 약 $6{\times}10^8$ colony per unit로 5령기 누에 유충의 체강에 감염시킨 후, 6시간 경과한 다음에 유도 발현되는 유전자(differentially expressed genes, DEGs)를 분석 한 결과, 10개의 유도 발현되는 유전자를 분리하였고 RT-PCR을 통해서 lysozyme, enbocin 그리고 한 개의 기능이 알려지지 않는 유전자등 3개의 유전자가 A. niger의 감염에 의해서 유의하게 과 발현된다는 것을 검증하였다. 일반적으로 그람 음성 및 양성 세균의 감염에 의해 유도된다고 알려진 enbocin 유전자가 A. niger의 감염에서도 과 발현이 유도되는 본 연구의 결과는 앞으로 enbocin 유전자의 항 진균 활성 연구에 중요한 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다.
Aspergillus niger가 생산하는 $\alpha$-galactosidase의 효소학적 성질을 조사하기 위하여 시험균주를 밀기울 배양한 후 생성된 $\alpha$-galactosidase를 염석, 이온교환 크로마토그래피 및 겔 여과 등의 방법으로 정제한 후 정제효소의 효소학적 성질을 검토하였다. Asp. niger를 밀기울 배지에서 $30^{\circ}C$, 4일 배양했을 때 효소활성이 가장 높았으며 $\alpha$-galactosidase는 황산암모늄 염석, DEAE-cellulose 및 DEAE-Sephadex A-50 이온교환 크로마토그래피, sephadex G-150 겔 여과 등에 의하여 23.7배까지 정제되었으며 비활성이 1,229U/mg.protein, 수율 14이었고 HPLC와 PAGE에 의해 순도가 확인되었다.
Aspegillus niger 세포에 의한 구연산 생산에 대한 발효 매체로서 우유공장폐수가 연구되었다. 발효매체에 $Mn^{2+},\;Fe^{2+}\;and\;Cu^{2+}$의 첨가가 구연산 생산을 일정하게 증가시켰다. 그러나 다른 금속이온인 $Mg^{2+}$의 첨가는 구연산 생산을 감소시켰다. 구연산의 농도는 우유공장폐수에서 환원당 농도의 농도가 50 g/l와 100 g/1로 Aspegillus niger ATCC 9142에 의한 batch bioreactor에서 각각 7.2 g/1과 16.5 g/l로 높게 표시되었다. 본 실험에서 적용한 수리적 모델식들이 세포성장의 예상, 구연산 생산, 기질소모 속도에 대해 잘 적용되는지를 알아보기 위해서 발효반응 모델식에 적용시켜 본 결과 실험치와 잘 부합되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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