Interspecific cross between Nicotiana trigonophylla and N. tabacum cv. BY4 is highly sterile because of abnormal ovule and embryo development. In vitro culture of excised N. trigonophylla ovules after polination by N. tabacum allows significant numbers of hybrid embryos to develop into mature plants. Total yield of seedlings and number of normal seedlings were produced following in vitro culture of individual fertilized ovules of N. trigonophylla X N. tabacum at four days post-pollination on B5 medium containing 6% sucrose. Hybrids were uniform in morphology and peroxidase isozyme composition and the majority were cytologically stable: flower characteristics were generally intermediate between those of the parents. All hybrids evaluated were self-sterile.
Mesophyll protoplasts derived from young leaves of Nicotiana rustica and N. tabacum cv Burley 21 were fused with the aid of polyethylene glycol(PEG). Cytological examination of protoplasts after PEG treatment revealed 12.8 % heterokaryocytes. After 7 weeks culture, the hybrid calli showing greenish white with a compact appearance were selected in contrast to parental type calli tinged with white or green color. The somatic hybrid plants were verified by morphological, biochemical and cyclological analysis. A heterosis effect for plant vigor and height was observed but the shape of leaves and flower characteristics were intermediate between N. tabacum and N. rutstica. The isozyme banding patterns for peroxidase of somatic hybrid lines were compared with the parent species. A number of isozyme bands derived from both parental species were found in the hybrids. Somatic hybrid plants have been successfully backcrossed to the parental N. tabacum particularly with somatic hybrid plants as female parents. These hybrid plants yielded small seeds, only few which were germinable.
Nicotiana repanda has resistance to many important tobacco diseases but no tobacco cultivars are currently available that carry risistance genes derived from this species. Numerous attempts to hybridize N, repanda with commercial tobacco cultivars have been largely unsuccessful because of cross incompatibility or the uncovering of lethal genes. In vitro pollination of placenta attached ovules was useful in by passing prezygotic barriers for interspecific hybrid combination between N.tabacum cv. NC82 and N. repanda. Six days after in vitro pollination of N. tabacum cv. NC82×N. repanda, enlarged ovules on plancenta were removed and transferred into ovule culture medium of kitsch and kitsch (1969). Within 15 days of ovule culture, germination occurred. Most of the hybrid seedlings obtained had poor root system and finally died, while few of them had good root system and grew well.
Four kinds of Nicotiana species and five varieties belonging to N. tabacum were used as materials for electrophoretic analysis of the tetrazolium oxidase isozyme to examine the taxonomic affinity among them based on the biochemical property. All the five verieties of N. tabacum showed same isozyme bands despite the fact that these varieties had notably varied characteristics including morphological traits. The band patterns were more or less different among the four species. Although N. rustica and N. tabacum were of the same genome group of AABB, their isozyme bands showed considerable difference. N. sylvestris, genome A donor of Nicotiana species, was found to be markedly different from N. tatacum in band pattern, including the absence of system 2 in N. sylvestris.
To study the functioning of HSP70 in Escherichia coli, we selected NtHSP70-2 (AY372070) from among three genomic clones isolated in Nicotiana tabacum. Recombinant NtHSP70-2, containing a hexahistidine tag at the amino-terminus, was constructed, expressed in E. coli, and purified by $Ni^{2+}$ affinity chromatography and Q Sepharose Fast Flow anion exchange chromatography. The expressed fusion protein, $H_6NtHSP70$-2 (hexahistidine-tagged Nicotiana tabacum heat shock protein 70-2), maintained the stability of E. coli proteins up to 90$^{\circ}C$. Measuring the light scattering of luciferase (luc) revealed that NtHSP70-2 prevents the aggregation of luc without ATP during high-temperature stress. In a functional bioassay (1 h at 50$^{\circ}C$) for recombinant $H_6NtHSP70$-2, E. coli cells overexpressing $H_6NtHSP70$-2 survived about seven times longer than those lacking $H_6NtHSP70$-2. After 2 h at 50$^{\circ}C$, only the E. coli overexpressing $H_6NtHSP70$-2 survived under such conditions. Our NtHSP70-2 bioassays, as well as in vitro studies, strongly suggest that HSP70 confers thermo-tolerance to E. coli.
The insecticidal protein gene in the pKL-20-1 clone derived from Bacillus thuringiensis serovar. kurstaki plasmid was subcloned in the plant shuttle vector, pGA643. The 7.3 kb fragment was cloned in the BglII and Hpal sites of pGA643 vector and expressed in E. coli S17-1, which produced insecticidal proteins killing Bombyx mori larvae. The clone was named pHL-20. The protoplast formation, calli induction and plantlet regeneration of Nicotiana tabacum was carried out. A tremendous number of mesophyll protoplasts of N. tabacum were formed, up to 7$\times$105 protoplast per ml, for 20 hours in darkness in the enzyme solution of 0.5% cellulase and 0.1% macerosin, pH 5.8. The viabilities of the protoplasts were maintained above 80% for 6 days in the media containing 2mg/1 of NAA and 1mg/1 of kinetin. Calli were induced from the protoplasts and leaves of the N. tabacum on MS medium containing 0.5mg/1 BAP. Under the culture conditions the protoplasts underwent repeated cell division into calli. Plantlets were regenerated from callus cultures derived from protoplast and leaves. Shoots were induced in a medium containing 1mg/1 of BAP.
연초(N. tabacum L.)의 세포질 웅성불임 F$_1$ 식물체와 N. africana의 종간교배에 의한 웅성불임 반수체식물의 육성 및 특성을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. (CMS NC82$\times$burley 21) F$_1$과 N. africana의 종간교배에 의한 세포질 웅성불임 반수체 식물의 출현빈도는 삭당 0.5주로 나타났다. 2. 종간교배으로 얻은 웅성불임 반수체식물 중 잎과 줄기의 색이 green(황색종)과 yellow(버어리종)의 분리비는 3 : 1로 나타났다. 3. 반수체 식물 중 잎과 줄기의 색이 yellow(버어리종 type)인 개체에 TMV저항성을 검정한 결과 저항성과 이병성의 비는 1 : 1로 나타났다. 4. (CMS MC82 Burley 21)F$_1$과 N. africana의 종간교배으로 세포질 웅성불임 isogenic Burley 21 반수체 식물의 육성이 가능하였고 이 반수체 식물의 염색체를 배가함으로써 여교배육종법에 비하여 조기에 세포질 웅성불임 Burley 21을 육성할 수 있을 것으로 생각된다.
From the single cell cultures of haploid tobacco (Nicotiana tabacum L. cv. NC 2326) glyphosate-resistant plants were regenerated. After treated with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) and then inoculated onto the LS medium supplemented with 1 mM glyphosate, the single cells survived formed colonies and calluses in 65 and 95 days after culture, respectively, and then whole plants were regenerated in 0.1 mM glyphosate-containing medium from the selected calluses. There was no difference in fresh weight and shikimate content between the selected and normal haploid calluses. When sprayed with 0.1 mM glyphosate, the shikimate contents in the regenerated and normal plants were 0.659 and 20.816 mol/g fr. wt., while that in other normal plants which were not sprayed was 0.921. In addition, the calluses induced from the regenerated plants grew without showing any retardation when treated with glyphosate. These results indicate that the secelcted calluses and regenerated plants are resistant to glyphosate.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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