Park, Sung-Ryeol;Paik, Ji-Hye;Ahn, Mi-Sun;Park, Je-Won;Yoon, Yeo-Joon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제20권9호
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pp.1295-1299
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2010
Recently, recombinant Streptomyces venezuelae has been established as a heterologous host for microbial production of flavanones and stilbenes, a class of plant-specific polyketides. In the present work, we expanded the applicability of the S. venezuelae system to the production of more diverse plant polyketides including flavones and flavonols. A plasmid with the synthetic codon-optimized flavone synthase I gene from Petroselium crispum was introduced to S. venezuelae DHS2001 bearing a deletion of the native pikromycin polyketide synthase gene, and the resulting strain generated flavones from exogenously fed flavanones. In addition, a recombinant S. venezuelae mutant expressing a codon-optimized flavanone $3{\beta}$-hydroxylase gene from Citrus siensis and a flavonol synthase gene from Citrus unshius also successfully produced flavonols.
Turnip mosaic virus)TuMV-Ca) was isolated from a Chinese cabbage showing severe mosaic and black necrotic spots symptoms in Korea. The virus was identified as a strain of TuMV by its host range test, particle morphology, serology, double stranded RNA analysis. For detection of the virus, reverse transcription and polymerase chain reaction(RT-PCR) was performed with a set of 18-mer TuMV-specific primers to amplify a 876 bp DNA fragment The virus was rapidly detected from total nucleic acids of virus infected tissues as well as native viral RNA of purified virion particles by RT-PCR. Detection limit of the viral RNA by RT-PCR was 10 fg.
One hundred and fifty seven Escherichia coli strains isolated from 18 cattle (9 dairy cattle received penicillin, streptomycin (SM) or sulfadimethoxine for treatment of diseases and 9 Korean native cattle not received antibiotics) were studied for the drug resistance and distribution of R factors. Of 88 E. coli strains isolated from cattle not received antibiotics, only 1 strain was resistant to SM, but about 46 per cent of 69 E. coli strains isolated from cattle received antibiotics were resistant to SM, tetracycline (TC), ampicillin (AP), kanamycin (KM), chloramphenicol (CM), and sulfisomidine (Su), alone or in combination thereof. Of resistant strains, about 72% were resistant to three or more antibiotics, but 28% were found to singly resistant. The most frequent resistant pattern was triple resistance to AP, KM and Su (37.6%), and quadruple one to SM, TC, CM and Su (12.5%). About 28% of resistant strains carried R factors which were transferable to E. coli ML 1410 $NA^r$ by conjugation.
한국산 야생더덕 수집종 자생지의 생육환경과 동위산소 패턴 및 향기성분 조성을 조사하여 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 야생더덕 군락지역은 표고 450∼800m에 걸쳐 자생하였고 표고 450m 이하와 800 m이상에서는 발견할 수 없었다. 2. 야생더덕 자생지의 조도량은 1,970∼8,400 Lux로 노지 재배지인 안동의 약 8.3%에 불과한 약광상태였다. 3. 자생지 토양의 이화학적 특성은 pH은 4.8∼6.4정도로 산성을 띠는 토양이 많았으며 유효인산함량은 9∼23ppm으로 매우 낮았고 유기물 함량은 4.0∼32.1%로 일반 밭 토양 2.8%보다 훨씬 높았다. 4. 자생지의 식생군락은 천남성, 곰취, 잔대, 쥐오줌풀 등의 초본류와 단풍나무, 생강나무, 조팝나무, 참나무 등의 목본류가 주로 생육하는 개엽수림하에서 자생하고 있었다. 5. 야생더덕 수집종의 안동 재배지에서 지상부 생육은 개화기가 8월 5일에서 8월 16일로 소백산더덕이 가장 빠른 개화특성을 보였고, 특히 자방수는 일월산 더덕이 평균 3.2개로 다른 지역수집종과 뚜렷한 차이를 나타내었고 종자수는 주왕산 더덕이 평균 121개로 가장 많은 경향을 보였다. 6. 야생더덕 수집종간의 단백질 밴드 및 동위효소 패턴은 뚜렷한 차이가 인정되지 않았으나 동위효소인 peroxidase의 경우 잎 조직은 덕유산 더덕, 뿌리 조직은 학가산 더덕, 덕유산 더덕, 일본산 더덕의 차이가 다소 인정되었고, esterase의 경우 잎 조직에서는 가야산 더덕, 오대산 더덕, 청량산 더덕이 차이를 보였고, 뿌리조직에서는 덕유산 더덕에서 차이가 있었다. 7. 수집종간의 식물정유에 대한 수율은 평균 0.007%인 것에 비하여 덕유산 더덕이 0.009%로 가장 많이 추출되었고, 소백산 더덕을 비롯한 10개 지역의 더덕은 0.004∼0.007% 정도를 보였다. 8. 향기성분 조성에 있어서는 수집종간에 뚜렷한 차이를 보이지 않았으나 지리산 더덕에서는 식품분야에서 식용유지나 가공식품의 산패를 방지하는 등 장기보존용의 물질로 사용되는 저산화 물질인 BHT 성분이 동정되었고 주된 성분은 지방족 알콜류가 11종으로 대부분을 차지하였으며 trans-2-hexanol, cis-3-hexanol, 1-hexanol등의 향기성분은 모든 수집종에서 높은피이크 면적(%)을 나타내어 금후 고방향성 더덕 품종육성을 위한 육종의 기초자료로 유망시되었다.
두과작물과 그 근류균은 특수한 상호관계에 있으며 복잡한 과정을 거쳐 분자질소의 고정작용이 이루어지고 있는 것이다. 기주식물의 종류, 품종에 대한 근류균종 및 균주의 접종친화성은 특이하여 근류형성성과 질소고정력이 다르므로 유효균주를 선발하여 접종의 효과를 기대하게 된다. 본 실험은 우리나라에 재배 또는 야생하는 두과작물 가운데 대두와 사료작물인 alfalfa, clover류, lespedeza, birdfoot trefil의 근류균을 수개지역의 여러품종(대두)에서 채집 분리하여 균의 형태, 배양 및 생리적인 성질등을 조사 비교하여 동정하고 대두 근류균을 대두에 접종하여 근류형성성을 조사 하였다. 분리한 균종과 균주는 형태와 배양특성 및 생리적인 성질로 분류되어 대두 근류균 56과 사료작물에서 11균주를 분리 선발하였다. 각 균주는 탄수화물의 이용성, 유기산생산성, hydrogenase 활성 및 indole 초산 생리력에 많은 정도의 차이가 있었으며 이성질을 근류균 활성과 관련하여 고찰하였다. 근류균의 생육에 끼치는 몇가지 질소화합물의 영향을 시험한 결과는 화합물의 종류와 농도에 따라 달리 나타났으며 asparagine과 glutamine이 가장 유효하였고 hydroxylamine, hydrazine, nitrite azide, thiourea등은 $1{\times}10^(-2)M/l$의 농도에서 균의 발육을 심히 저해하였다. 대두 품종 "장란백목"에 대한 25균주의 접종시험결과는 20균주가 상이한 정도로 근류를 형성하였고 5균주가 근류를 형성하지 않았으며 이 가운데 한 균주에 의하여는 뿌리의 발육이 억제 변형되어 있었다. 이로써 대두품종에 대한 근류균 균주의 근류 형성 친화성을 확인하였다. 이 연구는 1969년도 문교부 연구조성비의 지원으로 수행하였으므로 이에 당국에 감사하며 또한 연구의 진행에 많은 격려와 고견을 베풀어주신 이춘영 교수, 시료채집에 적극 협조하여주신 김동암, 한상기 교수와 작물시험장 박근용 과장에게 감사의 뜻을 표합니다.
Microbacterium elymi KUDC0405T was isolated from the rhizosphere of Elymus tsukushiensis from the Dokdo Islands. The KUDC0405T strain was Gram-stain-positive, non-spore forming, non-motile, and facultatively anaerobic bacteria. Strain KUDC0405T was a rod-shaped bacterium with size dimensions of 0.3-0.4 × 0.7-0.8 ㎛. Based on 16S rRNA gene sequences, KUDC0405T was most closely related to Microbacterium bovistercoris NEAU-LLET (97.8%) and Microbacterium pseudoresistens CC-5209T (97.6%). The dDDH (digital DNA-DNA hybridization) values between KUDC0405T and M. bovistercoris NEAU-LLET and M. pseudoresistens CC-5209T were below 17.3% and 17.5%, respectively. The ANI (average nucleotide identity) values among strains KUDC0405T, M. bovistercoris NEAU-LLET, and M. pseudoresistens CC-5209T were 86.6% and 80.7%, respectively. The AAI (average amino acid identity) values were 64.66% and 64.97%, respectively, between KUDC0405T and its closest related type strains. The genome contained 3,596 CDCs, three rRNAs, 46 tRNAs, and three non-coding RNAs (ncRNAs). The genomic DNA GC content was 70.4%. The polar lipids included diphosphatydilglycerol, glycolipid, phosphatydilglycerol, and unknown phospholipid, and the major fatty acids were anteiso-C17:0 and iso-C16:0. Strain KUDC0405T contained MK-12 as the major menaquinone. Based on genotypic, phylogenetic, and phenotypic properties, strain KUDC0405T should be considered a novel species within the genus Microbacterium, for which we propose the name M. elymi sp. nov., and the type strain as KUDC0405T (=KCTC 49411T, =CGMCC1.18472T).
A bacterial strain No. 40, which produced extracellular endoglucanase, was isolated from the rumen of Korean native goals and identified to be a genus of Actinomyces sp. The optimum conditions for endoglucanase production in PY-CMC medium were initial pH of 7.0 and 4 days of cultivation at $39^{\circ}C$. When localization of endoglucanase activity of Actinomyces sp. was determined, 68% of the enzyme activity was found in the extracellular fraction, 11% of the activity was detected in the periplasmic space and the remaining activity was in the intracellular and cell-bound fractions. The maximal endoglucanase activity was observed at pH 5.0 and it was most s table at pH 5.0. The optimum temperature of this enzyme activity was $55^{\circ}C$, but enzyme activity was gradually lost at temperature above $60^{\circ}C$. The crude enzyme was activated by addition of 10 mM cysteine and 10 mM DTT. But it was inhibited by addition of 10 mM $Cu^{{+}{+}}$ and $Fe^{{+}{+}}$. This crude enzyme could digest carboxymethylcellulose (CMC), and degrade xylan, avicel, pNPG, and pNPC to a less extent.
Three combinations of molecular chaperones from Escherichia coli (i.e., DnaK-DnaJ-GrpE-GroEL-GroES, GroEL-GroES, and DnaK-DnaJ-GrpE) were overproduced in E. coli BL21, and their in vitro stabilizing effects on a nitrile hydratase (NHase) were assessed. The optimal gene combination, E. coli groEL-groES (ecgroEL-ES), was introduced into Rhodococcus ruber TH3. A novel engineered strain, R. ruber TH3G was constructed with the native NHase gene on its chromosome and the heterologous ecgroEL-ES genes in a shuttle plasmid. In R. ruber TH3G, NHase activity was enhanced 37.3% compared with the control, TH3. The in vivo stabilizing effect of ecGroEL-ES on the NHase was assessed using both acrylamide immersion and heat shock experiments. The inactivation behavior of the in vivo NHase after immersion in a solution of dynamically increased concentrations of acrylamide was particularly evident. When the acrylamide concentration was increased to 500 g/l (50%), the remaining NHase activity in TH3G was 38%, but in TH3, activity was reduced to 10%. Reactivation of the in vivo NHases after varying degrees of inactivation was further assessed. The activity of the reactivated NHase was more than 2-fold greater in TH3G than in TH3. The hydration synthesis of acrylamide catalyzed by the in vivo NHase was performed with continuous acrylonitrile feeding. The final concentration of acrylamide was 640 g/l when catalyzed by TH3G, compared with 490 g/l acrylamide by TH3. This study is the first to show that the chaperones ecGroEL-ES work well in Rhodococcus and simultaneously possess protein-folding assistance functions and the ability to stabilize and reactivate the native NHases.
한반도에 서식하는 멧누에나방의 서식지역에 따른 유전적 변이와 집누에나방과의 종간 유연관계를 조사하였다. 멧누에나방의 isozyme 및 체액단백질을 대상으로 유전자 빈도를 조사한 결과, 조사지역 중 경북 칠곡과 경남 진주집단 사이의 유전적 유사도가 가장 높았으며, 경남 진주와 강원 고성집단 사이에서 가장 낮게 나타났다. 그러나 서식집단 상호간의 유사도는 매우 높았다. 한국산 멧누에나방과 집누에나방의 isozyme 유전자형은 대부분이 동일하게 발현되었으나, 집누에나방의 한국종에서만 발현된다고 알려진 Bes의 B형, Amy-hc의 F형, Ict-E의 n형 및 Ict-h의 M형과 S형 등의 유전자형이 한반도에 서식하는 멧누에나방에서 발현되었다. 따라서, 한반도 내에서 멧누에나방의 서식지역간 유전적 변이는 인정되지 않으며, 지금까지는 고려되지 않았던 집누에 한국종과 한국산 멧누에나방의 종간 유연관계에 대해 새로운 의문이 야기된다.
Superoxide dismutase (SOD)를 많이 생산하는 신기능성 오이(Cucumis sativus L.) 과실을 개발하기 위하여, 발아 7일째의 자엽절편에 완두콩(Pisum sativum) 유래 MnSOD 유전자를 Agrobacterium tumefeciens LBA4404의 매개로 형질 전환시켰다. 1mg/L zeatin, 0.1mg/L IAA, 300mg/L claforan, 100mg/L kanamycin이 포함된 선발배지에서 부정아를 유도한 후, 1주일 간격으로 계대배양하면서 kanamycin 저항성 형질전환체를 선발하였다. 선발배지 배양 6주 후 kanamycin 저항성을 가진 부정아만을 절단하여 0.2mg/L NAA가 함유된 발근배지에 옮겨 뿌리를 유도한 후, 화분에서 순화시켰다. 소식물체의 잎에서 DNA를 분리하여 PCR 로 분석한 결과, 3개의 식물체에서 선발마커유전자인 NPTII 유전자가 존재함을 확인하여 SOD 유전자가 오이에 도입됨을 확인할 수 있었다. 이중 한 개체의 과실에서 SOD 함량이 무처리개체에 비해 약 3.2배 높았으며 native gel 전기영동에서 도입한 SOD isoenzyme 밴드가 강하게 검출되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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