• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1997년도 춘계학술대회
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• pp.103-103
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• 1997

일시적인 국소 뇌허혈 rat model에서 중대뇌동맥의 폐쇄시간에 따른 뇌조직의 손상정도를 비교 조사하였다. 웅성 Wistar rats를 isoflurane 홉입마취하에서 우측 내경동맥내로 17 mm의 silicone-coated 4-0 nylon monofilament를 삽입하여, 중대뇌동맥의 기저부를 30분, 60분 또는 90분동안 폐쇄한 후 이 monofilament를 다시 밖으로 뽑아내므로써 23 시간동안 recirculation 시키는 일시적 국소 뇌허혈 rat model을 사용한 결과, 수술 후 거의 모든 rats에서 left hemiparesis 또는 좌측으로의 circling과 같은 신경학적 결손이 나타나므로써 높은 성공률을 가지고서 비교적 용이하게 뇌허혈을 유발시킬 수 있었으며, 2 mm 두께의 fresh brain coronal slices에 대하여 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 염색법을 시행하여 slice surface의 사진을 찍고 computerized 영상분석법을 이용하여 필요한 면적을 측정하므로써, coronal slice의 infarction size (%)는 총 면적에 대한 infarction 면적의 %로서, 부종율 (%)은 대조측 대뇌반구 면적의 2배에 대한 동측 대뇌반구와 대조측 대뇌반구 면적 차이의 %로서 산정되어졌다. 30분 허혈군에서는 본 염색법으로는 infarction이 거의 확인되지 않았으나 60분 허혈군 (n=13)에서는 우측 somatosensory frontoparietal cortex와 striatum 양자 모두 또는 일부 rats에서는 striatum에만 국한된 ulfarction이 확인되어졌으며 90분 허혈군 (n=12)에서는 거의 대부분의 rats에서 위 두 지역 모두에서 infarction이 확인되어졌다. Infarction size (%)는 60분과 90분 허혈군 각각에서, frontal pole로부터 5 mm되는 slice에서는 11.9$\pm$1.2 (평균치$\pm$표준오차), 13.7$\pm$1.9이었으며 7 mm되는 slice에서는 19.1$\pm$1.8, 21.9$\pm$2.1이었으며 9 mm되는 slice에서는 14.7$\pm$2.4, 19.7$\pm$2.2이었다. 또한 부종율 (%)은 60분과 90분 허혈군 각각에서, frontal pole로부터 5 mm되는 slice에서는 3.1$\pm$0.6, 3.8$\pm$0.7이었으며 7 mm되는 slice에서는 3.5$\pm$0.3, 5.7$\pm$1.0이었으며 9 $\pm$되는 slice에서는 3.4$\pm$0.5, 5.7$\pm$0.9이었다. 한편 90분 동안의 중대뇌동맥 폐쇄에 따른 뇌조직 손상을 cresyl violet 염색법, NADPH-diaphorase histochemistry, GFAP immunohistochemistry를 사용하여 일부 측정한 결과, 위의 손상지역에서는 뇌신경세포체들의 shrinkage 내지는 소실됨을 확인할 수 있었으며, NADPH-diaphorase-positive neuron들도 대부분 dendrite와 axon같은 cell process들의 fragmentation, shrinkage 내지는 소실되므로써 intensity의 감소현상이 나타났으며, reactive gliosis로 말미암아 GFAP immunoreactive intensity의 증가현상이 나타났다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제4권5호
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• pp.369-378
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• 2000

This study was undertaken to investigate an involvement of nitroxergic innervation in gastric smooth muscle of rat. Isometric tension study, the measurement of single cell length, NADPH diaphorase stain of smooth muscle layers and neuronal nitric oxide synthase (nNOS) western blotting were performed. Sodium nitroprusside (SNP), a nitric oxide donor, relaxed the muscle strips precontracted by acetylcholine (ACh) in a concentration-dependent manner. Pretreatment of L-arginine decreased the contraction induced by electric field stimulation (EFS). Pretreatment of $N^G-nitro-L-arginine$ methyl ester (L-NAME), a NOS inhibitor, increased the EFS-induced contractions. LY 83583, a guanylate cyclase (GC) inhibitor, reversed the inhibitory actions of L-arginine on the muscle contractions. The effects of L-Arginine, L-NAME and LY 83583 on ACh-induced contractions were not significant. L-arginine reduced the EFS-induced contraction in circular muscle, whereas L-NAME enhanced the EFS-induced contraction in longitudinal strips. By EFS, the phasic contractions appeared approximately $20{\sim}25$ seconds later. L-NAME significantly shortened the delay time to about $2{\sim}3$ seconds. In single cell study, ACh contracted gastric smooth muscle cells, SNP relaxed the cells, and the latter also inhibited the ACh-induced contraction. LY 83583 enhanced the ACh-induced contraction and antagonized SNP-induced relaxation. NADPH diaphorase activity was assessed by a histochemistry, nitroblue tetrazolium (NTB) staining. Positive staining was observed in both circular and longitudinal muscle layers. L-arginine increased the staining, while L-NAME decreased the staining. Western blotting for nNOS proved the presence of nNOS in rat gastric smooth muscle. EFS and additional $Ca^{2+}$ increased nNOS protein expression. These results suggest that in rat stomach, both circular and longitudinal muscle layers are innervated with nitroxergic nerves which relax the gastric smooth muscle via NO-cGMP pathway.

• 통합자연과학논문집
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• 제15권2호
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• pp.63-72
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• 2022

To elucidate the neurochemical characteristics of the midbrain periaqueductal gray (PAG), the distribution patterns of several neuroanatomical markers within the PAG were compared. Immunohistochemical staining for the intracellular calcium binding proteins including calbindin, calretinin, and parvalbumin and histochemical staining for cytochrome oxidase, acetylcholinesterase, and NADPH-diaphorase were performed in. Each chemical substance were localized in the specific subregions within PAG. Calbindin- immunoreactivity were selectively distributed in the dorsolateral PAG, the ventral half of lateral PAG, the ventralateral PAG, and supraoculomotor cap (Su3C) nucleus. Distribution of calretinin-immunoreactivity were generally similar with that of clabindin, but showed relatively low subregional selectivity. Parvalbumin-immunoreactivity was very poor within the PAG. High reactivity of cytochrome oxidase were found in the dorsomedial PAG and the lateral half of lateral PAG, in which calbindin- and calretinin-immunoreactive perikarya were scarcely observed. Acetylcholinesterase distribution was similar with that of cytochrome oxidase, and the difference was in the additional marking of of Su3C with acetylcholinesterase. Results of the present study provides data for the further subdivisions of the territory of the PAG compared to the presently accepted subregions within the PAG.

• Journal of Korean Neurosurgical Society
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• 제29권7호
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• pp.877-885
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• 2000

Objective : The NOS inhibitors exhibit antinociceptive activity in rat model of neuropathic pain. NOS activity increases in the dorsal root ganglia(DRG) in neurop-athic pain. However, NOS activity decreases in the dorsal horn of spinal cord in the nerve injury models of neuropathic pain. To investigate whether the mechanism of decrease of NOS expression in the dorsal horn is related to a secondary effect resulting from increased NO production and likewise in the spinal DRG in the spinal nerve ligation model of neuropathic pain. Methods : We conducted behavioral tests for neuropathic pain, and nNOS immunohistochemistry and NADPH-diaphorase histochemistry after tight ligation of the 5th lumbar(L5) and 6th lumbar(L6) spinal nerves and L5 dorsal rhizotomy. Results : Typical neuropathic pain behaviors occurred 7 days after post-ligation in the neuropathic surgery group, but neuropathic pain behaviors in the dorsal rhizotomy group were absent or weak 7 days after post-operation. There was a decrease in the number of nNOS immunoreactive dorsal horn neurons on the both side(especially ipsilateral side) 7 days after post-ligation. The number of nNOS immunoreactive neurons in both side of the dorsal horn was not decreased 7 days after L5 dorsal rhizotomy. Conclusion : These data indicate that the changes in the injured DRG is essential for development and maintenance of neuropathic pain, and mechanism of decrease of nNOS expression in the dorsal horn is a secondary effect against the changes in the DRG including increased NO production in the spinal nerve ligation model of neuropathic pain.

• 대한한의학회지
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• 제22권3호
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• pp.92-97
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• 2001

목적 :본 연구는 최근 임상에서 많이 사용하는 자하거 약침액이 과산화수소($H_2O_2$)로 야기된 송과선 세포의 Apoptosis에 있어서 세포 보호에 미치는 영향과 그 기전을 분석하였다. 방법 :송과선 세포주에서 자하거 약침액의 $H_2O_2$로 인한 Apoptosis에 대한 방어 기전을 관찰하기 위하여 면역세포화학법. 세포화학법 및 reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)을 시행하였다. 결과 : 자하거 약침액 투여군에서는 nuclear factor kappa B (NFkB), inducible nitric oxide synthase (iNOS), nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)-diaphorase의 발현이 $H_2O_2$ 투여군보다 감소하였다. RT-PCR에서는 caspase-3의 발현이 자하거 약침액 투여군에서 $H_2O_2$ 투여군보다 억제되었다. 결론： 이상의 결과를 통하여 자하거 약침액이 $H_2O_2$로 유발된 Apoptosis에서 세포보호 효과가 있으며 그 기전은 iNOS와 caspase-3의 억제에 기인할 가능성을 시사한다고 하겠다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권9호
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• pp.1504-1512
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• 2007

The fpr gene, which encodes a ferredoxin-$NADP^+$ reductase, is known to participate in the reversible redox reactions between $NADP^+$/NADPH and electron carriers, such as ferredoxin or flavodoxin. The role of Fpr and its regulatory protein, FinR, in Pseudomonas putida KT2440 on the oxidative and osmotic stress responses has already been characterized [Lee at al. (2006). Biochem. Biophys. Res. Commun. 339, 1246-1254]. In the genome of P. putida KT2440, another Fpr homolog (FprB) has a 35.3% amino acid identity with Fpr. The fprB gene was cloned and expressed in Escherichia coli. The diaphorase activity assay was conducted using purified FprB to identify the function of FprB. In contrast to the fpr gene, the induction of fprB was not affected by oxidative stress agents, such as paraquat, menadione, $H_2O_2$, and t-butyl hydroperoxide. However, a higher level of fprB induction was observed under osmotic stress. Targeted disruption of fprB by homologous recombination resulted in a growth defect under high osmotic conditions. Recovery of oxidatively damaged aconitase activity was faster for the fprB mutant than for the fpr mutant, yet still slower than that for the wild type. Therefore, these data suggest that the catalytic function of FprB may have evolved to augment the function of Fpr in P. putida KT2440.

• Korean Journal of Acupuncture
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• 제23권1호
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• pp.87-94
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• 2006

목적 :본 연구는 collagenase로 유도된 흰쥐의 골관절염 모델에서 진범약침자극이 흰쥐 dorsolateral periaqueductal gray (DL-PAG)에서 NOS 및 nNOS 발현에 미치는 영향을 관찰하였다. 방법 : 흰쥐의 관절강내로 collagenase 용액을 주사하여 골관절염 모델을 만들고 정상군, 대조군 및 진범약침군으로 실험군을 분류한 후, nNOS(neuronal NOS)와 NOS에 대하여 미치는 영향을 nNOS immunohistochemistry와 nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase(NADPH-d) 검사법을 통하여 조사하였다. 결과 : 골관절염이 유발된 흰쥐의 DL-PAG 영역에서 nNOS와 NOS의 발현억제가 관찰되었으며, 진범약침군이 collagenase로 유도된 골관절염에서 감소된 nNOS와 NOS의 발현이 증가되었다. 결론 : 본 연구를 통하여 진범약침자극은 골관절염이 유발된 흰쥐의 DL-PAG에서의 nNOS와 NOS의발현에 영향을 미친다는 결과를 얻을 수 있었다.

• Korean Journal of Acupuncture
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• 제22권4호
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• pp.109-116
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• 2005

목적 : 골관절염은 진통을 수반하는 퇴행성 관절질환이며, 장애를 일으키는 주요한 원인이 된다. 또한 노인들에 있어서 골관절염은 매우 흔한 질환이라 할 수 있다. Nitric oxide(NO)는 Nitric Oxide Synthase(NOS)에 의하여 칼슘의존성통로를 통하여 L-arginine 으로부터 합성되어지며, NO는 중추신경계에 있어서 중요한 세포사이의 전달자이다. 방법 :본 연구에서는 위령선 으로부터 추출한 액이 콜라겐으로 유도된 관절염에 걸린 쥐의 dorsolateral periaqueductal gray(DL-PAG) 영역에서 nNOS(neuronal NOS)와 NOS에 대하여 미치는 영향 을 nNOS immunohistochemistry와 nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase(NADPH-d) 검사법을 통하여 조사하였다. 결과 : 골관절염이 유발된 흰쥐의 DL-PAG 영역에서 nNOS와 NOS의 발현억제가 관찰되었으며, 위령선이 콜라겐으로 유도된 골관절염에서 감소된 nNOS와 NOS의 발현이 증가되었다. 결론 : 본 연구를 통하여 위령선은 골관절염이 유발된 흰쥐의 DL-PAG에서의 nNOS와 NOS의 발현에 영향을 미친다는 결과를 얻을 수 있었다.