N-ethylmaleimide는 낮은 농도에서 Myosin heavy chain의 활성화 부위에 존재하는 2개의 황화기에 선택적으로 결합하는 것으로 알려져 있다. 계 근조직에서 분리된 $Ca^2$+-의존성 단백질 분해효소, Calpain은 이와같이 알킬화된 Myosin heavy chain을 알킬화 되지 않은 것에 비하여 우선적으로 분해하는 것으로 나타났다. 또한, 황화기를 특이하게 산하시키는 KMnO$_4$가 처리된 Myosin heavy chain도 산화되지 않은 것에 비하여 훨씬 빠른 속도로 분해됨을 관찰하였다. 뿐만아니라, N-ethylmaleimide나 KMnO$_4$의 처리는 농도-의존적으로 myosin에 의한 ATP 분해를 불활성화 시키었다. 이러한 결과는 활성화 부위에 존재하는 황화기의 화학적 변형은 Myosin hsavy chain이 Calapin과 같은 세포내 단백질 분해효소에 의하여 인식되는 기구임을 시사한다.
The purpose of this study was to analyze myosin heavy chain (MHC) isoforms in bovine longissimus thoracis (LT) muscle by liquid chromatography (LC) and mass spectrometry (MS). LT muscles taken from Hanwoo (Korean native cattle) steer (n=3) used to separate myosin bands by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. The peptide queries were obtained from the myosin bands by LC-MS/MS analysis following in-gel digestion with trypsin. A total of 33 and 43 queries were identified as common and unique peptides, respectively, of MHC isoforms (individual ions scores >43 indicate identity or extensive homology, p<0.05). MHC-1 (IIx), -2 (IIa), -4 (IIb), and -7 (slow/I) were identified based on the Mowse score (5118, 3951, 2526, and 2541 for MHC-1, -2, -4, and -7, respectively). However, more analysis is needed to confirm the expression of MHC-4 in bovine LT muscle because any query identified as a unique peptide of MHC-4 was not found. The queries that were identified as unique peptides could be used as peptide markers to confirm MHC-1 (14 queries), -2 (8 queries), and -7 (21 queries) in bovine LT muscle; no query identified as a unique peptide of MHC-4 was found. LC-MS/MS analysis is a useful approach to study MHC isoforms at the protein level.
오징어 젓갈에 오징어 먹즙을 2% 및 4% 농도로 첨가하고 $10^{\circ}C$에서 8주일간, $20^{\circ}C$에서 32일간 숙성시키면서 아미노태 질소와 근육단백질 변화를 분석한 결과는 다음과 같다. 오징어 먹즙이 첨가되지 않은 오징어 젓갈의 아미노태 질소는 식염 농도가 낮고 숙성온도가 높을수록 숙성 후반까지 계속 유의성 높게 증가하여 숙성이 촉진되었으며 오징어 근육의 단백질 변화는 myosin heavy chain이 숙성 초반에 현저히 분해되지만 actin의 변화는 거의 없어서 protease에 강하였다. 오징어 먹즙을 첨가한 오징어 젓갈의 아미노태 질소 함량은 숙성후반까지 계속 증가하였으나 증가폭은 무 첨가군에 비하여 적었으며 오징어 근육 단백질 중 myosin heavy chain은 숙성 중반에 현저히 분해되었으며 식염농도가 높고, 온도가 낮은 먹즙 첨가군은 분해 속도가 느렸다.
Oxidized LDL (oxLDL) performs critical roles in atherosclerosis by inducing macrophage foam cell formation and promoting inflammation. There have been reports showing that oxLDL modulates macrophage cytoskeletal functions for oxLDL uptake and trapping, however, the precise mechanism has not been clearly elucidated. Our study examined the effect of oxLDL on non-muscle myosin heavy chain IIA (MHC-IIA) in macrophages. We demonstrated that oxLDL induces phosphorylation of MHC-IIA (Ser1917) in peritoneal macrophages from wild-type mice and THP-1, a human monocytic cell line, but not in macrophages deficient for CD36, a scavenger receptor for oxLDL. Protein kinase C (PKC) inhibitor-treated macrophages did not undergo the oxLDL-induced MHC-IIA phosphorylation. Our immunoprecipitation revealed that oxLDL increased physical association between PKC and MHC-IIA, supporting the role of PKC in this process. We conclude that oxLDL via CD36 induces PKC-mediated MHC-IIA (Ser1917) phosphorylation and this may affect oxLDL-induced functions of macrophages involved in atherosclerosis.
Purpose : This paper reviews evidence supporting adaptive plasticity in skeletal muscle fibers induced by various exercise training and neuromuscular activity. Result : Skeletal muscle fiber demonstrates a remarkable adaptability and can adjust its physiologic and contractile makeup in response to alterations in functional demands. This adaptive plasticity results from the ability of muscle fibers to adjust their molecular, functional, and contractile properties in response to altered physiological demands, such as changes in exercise patterns and mechanical loading. The process of activity-dependent plasticity in skeletal muscle involves a multitude of signalling mechanisms initiating replication of specific genetic sequences, enabling subsequent translation of the genetic message and ultimately generating a series of myosin heavy chain isoform. Conclusions : Knowledge of the mechanisms and interaction of activity-dependent adaptive pathways in skeletal muscle is important for our understanding of the synthesis of muscle myosin protein, maintenance of metabolic and functional capacity with physical activity, and therapeutic intervention for functional improvement.
As genetic markers, single nucleotide polymorphisms (SNP) are very appropriate for the development of genetic tests for economic traits in livestock. Several microsatellite markers have been identified as useful markers for the genetic improvement of Hanwoo. Among those markers, ILSTS035 was recently mapped at a similar position with four SNPs (AH1_11, AH1_9, 31465_446, and 12273_165) in a linkage map of EST-based SNP in BAT6. Among the four SNPs, two SNPs (31465_446 and 12273_165) were analyzed using BLAST at the NCBI web site. The sequences including the 12273_165 SNP were identified at the intron region within the LOC534614 gene on the gene sequence map (Bos taurus NCBI Map view, build 3.1). The LOC534614 gene represents a protein similar to myosin heavy chain, fat skeletal muscle, embryonic isoform 1 in the dog, and myosin_1 (Myosin heavy chain D) in Macaca mulatta. In cattle, the myosin heavy chain was associated with muscle development. The phenotypic data for growth and carcass traits in the 415 animals were analyzed by the mixed ANCOVA (analysis of covariance) linear model using PROC GLM module in SAS v9.1. By the genotyping of Hanwoo individuals (n = 415) to evaluate the association of SNP with growth and carcass traits, it was shown that the 12273_165 SNP region within LOC534614 may be a candidate marker for growth. The results of the statistical analyses suggested that the genotype of the 12273_165 SNP significantly affected birth weight, weight of the cattle at 24 months of age, average daily gain and carcass cold weight (p<0.05). Consequently, the 12273_165 SNP polymorphisms at the LOC534614 gene may be associated with growth in Hanwoo, and functional validation of polymorphisms in LOC534614 should be performed in the future.
Muscle fiber characteristics account for meat quality and muscle fibers are mainly classified into three or more types according to their contractile and metabolic properties. However, the majority of previous studies on bovine skeletal muscle are based on myosin ATPase activity. In the present study, the differences in the characteristics of muscle fibers classified by the expression of myosin heavy chain (MHC) among four bovine skeletal muscles such as longissimus thoracis (LT), psoas major (PM), semimembranosus (SM) and semi-tendinosus (ST) and their relationships to beef quality were investigated. MHCs 2x, 2a and slow were identified by LC-MS/MS and IIX, IIA and I fiber types were classified. PM, which had the smallest size and highest density of fibers regardless of type, showed the highest myoglobin content, CIE $L^*$, $a^*$, $b^*$ and sarcomere length (p<0.05), whereas ST with the highest composition of IIX, showed high shear force and low sarcomere length (p<0.05). The correlation coefficients between muscle fiber characteristics and meat quality showed that type IIX is closely related to poor beef quality and that a high density of small-sized fibers is related to redness and tenderness. Therefore, the differences in meat quality between muscles can be explained by the differences in muscle fiber characteristics, and especially, the muscles with good quality are composed of more small-sized fibers regardless of fiber type.
근원섬유단백질과 알칼리 용액으로 처리하여 회수한 단백질의 가열 중 ANS 소수성의 변화, IR스펙트럼의 변화, SH기의 변화, 전기영동상의 변화 및 엔탈피의 변화로 비교하여 회수 단백질의 가열 변성기구를 조사하였다. 갈고등어와 냉동 꼬마민어의 근원섬유단백질은 가열 온도의 상승과 더불어 소수성 잔기가 외부로 노출되고 소수성 상호작용은 6$0^{\circ}C$ 부근에서 최대로 일어나지만, 근형질 단백질을 포함하는 회수단백질은 근원섬유 단백질과 ANS 소수성에서 차이를 보였다. pH가 증가함에 따라 1636 $cm^{-1}$ /에 해당하는 peak가 증가하였다. 반응성 SH기와 총 SH기 수의 차이는 pH 7.0과 pH 10에서 비교적 큰 것으로 나타났다. SDS-PAGE 상에서 pH가 상승함에 따라 myosin heavy chain의 중합체가 확인되었다. 알칼리 공정으로 제조한 회수 단백질을 시차주사열량계로 분석한 결과, 회수 단백질은 33.1,44.3 및 65.5$^{\circ}C$에서 전이 온도가 나타나며, myosin의 변성 에 해당하는 온도인 51.7$^{\circ}C$의 peak는 보이지 않았다. 회수 단백질의 가열 젤은 극단적 인 pH 처리에 의한 $\alpha$-helix 구조의 $\beta$-sheet 구조 전환, 가열에 의한 S-S 결합의 형성과, myosin heavy chain 중합체 형성에 의한 것으로 보인다.
This study examined the association between functional sequence variants (FSVs) of myosin heavy chain 3 (MYH3) genotypes and collagen content in a Landrace and Jeju native pig (JNP) crossbred population. Four muscles (Musculus longissimus dorsi, Musculus semimembranosus, Musculus triceps brachii, and Musculus biceps femoris) were used for the analysis of meat collagen content, and the same animals were genotyped for the FSVs of the MYH3 gene by using PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism). Three FSVs of MYH3 genotypes were identified and had genotype frequencies of 0.358, 0.551, and 0.091 for QQ, Qq, and qq, respectively. QQ animals for the FSVs of the MYH3 genotypes showed higher collagen content in their M. longissimus dorsi (p < 0.001), M. semimembranosus (p < 0.001), M. triceps brachii (p < 0.001), and M. biceps femoris (p < 0.001) than qq homozygous animals. After the validation of this result in other independent populations, the FSVs of MYH3 genotypes can be a valuable genetic marker for improving collagen content in porcine muscles and can also be applied to increase the amount of collagen for biomedical purposes.
The current study was conducted to identify relationship between myosin heavy chain I to objective color dimensions. Myosin heavy chain I isoform showed coefficients of determinant($r^2$) of 0.54 and 0.40 for Hunter a* and b* values. For he current dataset, Hunter a* value at day 1 had higher relationships with that at both day 7 and 14, emphasizing the importance of initial meat color which is largely affected by animal management prior to slaughter.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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