• IMMUNE NETWORK
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• 제14권6호
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• pp.307-320
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• 2014

Mycobacterium scrofulaceum is an environmental and slow-growing atypical mycobacterium. Emerging evidence suggests that M. scrofulaceum infection is associated with cervical lymphadenitis in children and pulmonary or systemic infections in immunocompromised adults. However, the nature of host innate immune responses to M. scrofulaceum remains unclear. In this study, we examined the innate immune responses in murine bone marrow-derived macrophages (BMDMs) infected with different M. scrofulaceum strains including ATCC type strains and two clinically isolated strains (rough and smooth types). All three strains resulted in the production of proinflammatory cytokines in BMDMs mediated through toll-like receptor-2 and the adaptor MyD88. Activation of MAPKs (extracellular signal-regulated kinase 1/2, and p38, and c-Jun N-terminal kinase) and nuclear receptor (NF)-${\kappa}B$ together with intracellular reactive oxygen species generation were required for the expression of proinflammatory cytokines in BMDMs. In addition, the rough morphotypes of M. scrofulaceum clinical strains induced higher levels of proinflammatory cytokines, MAPK and NF-${\kappa}B$ activation, and ROS production than other strains. When mice were infected with different M. scrofulaceum strains, those infected with the rough strain showed the greatest hepatosplenomegaly, granulomatous lesions, and immune cell infiltration in the lungs. Notably, the bacterial load was higher in mice infected with rough colonies than in mice infected with ATCC or smooth strains. Collectively, these data indicate that rough M. scrofulaceum induces higher inflammatory responses and virulence than ATCC or smooth strains.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제39권6호
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• pp.517-525
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• 1992

연구배경 : 1985년 Saiki등에 의해, 특정한 DNA를 연속적으로 복제할 수 있는 방법인 polymerase chain reaction (PCR)이 개발된 이래, PCR은 검체내에 극미량으로 존재하고 있는 병원체의 진단에 큰 도움을 줄 것으로 기대되었다. 결핵균의 진단방법중, 도말염색 방법은 감수성이 낮아서 문제가 되고 있으며, 배양은 감수성은 높으나 기간이 오래 걸려서 임상적으로 도움을 주지 못하는 경우가 많다. 이에 저자들은 Mycobacterium tuberculosis의 특이 단백질인 65 kD mycobacterial antigen을 encoding하는 2520 base pair DNA중, 383 base pair DNA를 이용한 PCR과 IS6110 fragment의 일부인 123 base pair DNA를 이용한 PCR을 시행하여, 이의 감수성과 특이도를 알아보고 폐결핵 환자의 객담을 검체로한 결핵의 조기진단 방법을 개발하고자 하였다. 방법 : M. tuberculosis (H37Rv, H37Ra), M. avium, M. intracellulare, M. scrofulaceum 균주와 환자의 객담에서 DNA를 추출하여, 383 base pair DNA 양끝의 20 base pair DNA primer (TB-1, -2)와 IS6110 fragment 일부의 DNA 양끝의 20 base pair DNA primer (Sal I-1, -2) 로 PCR을 시행하였으며, 전기 영동후 자외선 발광으로 확인하였다. 결과 : 1) Ethidium bromide 염색후 발광경하에서, Mycobacterium tuberculosis (H37Rv, H37Ra)와 Mycobacterium bovis는 TB-1, -2 primer와 Sal I-1, -2 primer를 이용한 PCR에서 모두 양성을 보였고 Mycobacter intracellulare와 Mycobacterium scrofulaceum은 TB-1, -2 primer를 이용한 PCR에서만 양성을 보였다. 2) Southern Blot 분석에는 두쌍의 primer 모두에서 Mycobacterium tuberculosis (H37Rv, H37Ra)와 Mycobactgerium bovis만이 양성을 나타내었으며 Mycobacterium intracellulare 와 Mycobacterium scrofulaceum은 음성을 나타내었다. 3) Mycobacterium tuberculosis (H37Rv)를 순차적으로 희석하여 시행한 PCR에서 두쌍의 primer 모두에서 Mycobacterium 균 1개체에 해 당되는 1 fg DNA까지 양성을 나타내었다. 4) 임상적으로 진단받은 결핵환자의 시행한, Sal I-1, -2 primer를 이용한 PCR에서 도말 검경 양성군의 객담 29예중 28예인 96.6%에서 양성을 나타내었으며, 도말 정경 음성-배양 양성군에서는 5예중 4예(80.0%), 그리고 도말 검경 음성-배양 음성군에서는 26예중 6예(23.1%)가 양성을 나타내었고 음성 대조군 검체 16예에서 2예(12.5%)에서 양성을 나타내였다. 결론 : 이상의 결과로, PCR은 객담에서의 결핵균의 진단에 있어, 배양과 견줄 수 있는 특이도와 예민도를 보이고 있어, 특정한 경우 진단에 도움을 줄 수 있을 것으로 기대되며, 추후 방법의 개선을 위한 연구가 계속 필요할 것으로 사료된다.

• 미생물학회지
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• 제24권4호
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• pp.377-384
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• 1986

A study on the production of mycobacterial antogens has been made in order to improve immunological reactivity and specificity, which have long been explored for the better use of immunological diagnosis of mycobacterial infections. Instead of culture filtrate cell extract was used as a starting material for the production of antigens in this study. Cell extract was fractionated though several steps such as salting out, gel filtration and ion exchange column chromatography and reactivity and specificity of the fractions so produced were enaluated by the various serological methods. The result showed that the species-specific antigenic components distributed mostly in the fractions, Tc of M. tuberculosis, Kc of M. kansasii, Sa of M. scrofulaceum, Aa of M. avium and Fa, Fb, Fc (FF1) of M. fortuitum, which were fractionated by ion exchange column prior to concentrating by salting out and molecular sieving.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제1권1호
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• pp.49-58
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• 1984

폐결핵 환자의 객담으로 부터 비정형항산균의 배균여부를 규명하기 위하여 세균학적 시험 및 임상적 조사를 시행하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 객담 334예에서 항산균 103주 (30.8%)를 분리 배양하였다. 2. 분리배양된 항산균주에서 비정형항산균으로 감별된 균주는 10주(9.7%)이며 인형결핵균주는 93주(90.3%)이였다. 3. 감별된 비저형항산균주는 Runyon군별로는 암착색균군, 광비발색균군이 각각 3주 (30.0%)씩이며 신속발육균군이 4주(40.0%)였으며 광발색균군은 분리되지 않았다. 4. 생물학석 성상 및 생화학적 특성시험 양상에 의해 암착색균군 3주 중 2주는 Mycobacterium scrofulaceum, 1주는 Mycobacterium szulgai로, 광비발색균 3주 중 2주는 Mycobacterium avium complex, 1주는 Mycobacterium terrae로 동정되였으며, 신속발육균주 4주중 3주는 Mycobacterium fortuitum, 1주는 Mycobacterium chelonei로 등정되었다. 5. 항결핵제에 대한 시험관내 약제감수성검사에서 INH, SM에서는 10주가 전부 내성을 나타내었으며, EB, TH, 및 CS의 저농도인 10mcg, 50mcg, 및 40mcg에서 완전내성을 나타내었다. 그리고 EB, TH, 및 RFP의 고농도인 20mcg, 및 100mcg,에서 감수성을 나타내었다. 6. 비정형항산균이 배균된 환자의 X-선소견 및 임상적 소견 조사에서는 인형결핵균 감성으로 인한 폐결핵 환자의 증상에 비해 경하지 않는 것으로 사료되었으며 장기간 항결핵제의 투여치로 되어 왔으나 대부분 호전되지 않았다.

• 대한미생물학회지
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• 제15권1호
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• pp.9-17
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• 1980

In the ecology and epidemiologic studies on various serotypes of atypical mycobacteria(AM), Schaefer's bacterial agglutination test(BA) provided the basis of the serologic procedures. Recently, attempts have been made to modify and to simplify the Schaefer's BA such as a slide agglutination test(Engel & Beerwald, 1970), a "simplified" BA(Reznikov & Leggo, 1972), an agglutination inhibition test(Richards & Eacret, 1972) and "micromethod"(Thoen et al., 1975). The BA, however, was not widely applied as a routine laboratory test mainly because it requires much times and labors to perform and partley because it is not applicable to hydrophobic strains either often encountered in the isolation of AM in the clinical bacteriology or stock strains maintained in the laboratory. On the contrary, fluorescent antibody technique with mycobacteria may have advantages over the BA because it is far more simpler in serologic procedures and is applicable to all strains of mycobacteria regardless of smooth or rough types of cultures. At the present, it is well known that the type-specific antigens are lacking on the surface of rough type of AM compared to that on smooth type of strain, but the antigenicity on the surface of the hydrophobic strains of AM which resulted from a series of subculture and the strain in the laboratory for 3 to 6 months has not been clarified. In this study, an attempt to serotype the hydrophobic strains of M. scrofulaceum serotype 41, 42 and 43 by fluorescent anti-complement(FAC) technique was made. The FAC technique with mycobacteria was also described in detail. In the summary, the complement fixing antibody titres of reference sera to smooth types of homologous serotype was highest, but the antibody titres of reference sera to hydrophobic strains of serotypes, 41, 42 and 43 gave two-to 8-folds lower than those to smooth type of strains. Although the sensitivity of type-specific antigens on the hydrophobic strains to reference sera was much lower, using the two units of reference sera determined by titration with hydrophobic strains, three serotypes, i. e., 41, 42 and 43 were specifically differentiated one another by FAC technique. This result indicated that the hydrophobic strains which were maintained in the laboratory at least for 6 months still retain type-specific antigen detectable by FAC technique.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제40권5호
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• pp.483-494
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• 1993

석탄산으로 사멸한 균으로 감작시켜 얻은 토끼 항혈청으로 주요 병원성 mycobacteria의 세포 표면항원간의 항원적 상관관계를 효소결합면역분석법으로 관찰하였다. M, avium-intracellulare(MAI) 항혈청을 이용한 동종 및 이종반응 분석결과를 보면 동종내 항원적 상관관계는 매우 가깝고 M. scrofulaceum(MG)을 포함하면 MAIS군내 종간 항원적 관계도 가까웠다. MAI 혈청이 M. chelonei(MC), fortuitum(MF), nonchromogenicum(MNC), terrae(MTR) 및 triviale(MTV)와는 반응하지 않거나 미약하게 반응하지만 M. kansasii(MK)와 결핵균과는 강하게 반응했다. 그러나 후자의 두균종으로 흡수해도 MAI 혈청의 동종반응은 감소되지 않았다. M. avium(MA) (K40004) 항혈청은 M. intracellulare(MI) 균주를 제외한 다른 균들과는 미약하게 반응했고 항원적 상관관계가 가까운 MI와 MG로 흡수하면 동종반응의 50~89%가 감소했다. MI 혈청의 종내반응이 종간반응보다 물론 더 강하지만 공유항원량의 크기에 따라 달랐다. MI균주 중 N-260D, N-260R, N-260T 및 K41014간의 항원적 상관관계가 N-242D, N257T, N281D 및 N275T와의 관계보다 더 가깝게 나타났다. MNC 항혈청은 MC와 MTV를 제외하고는 강한 교차반응을 보여주었다. 종내 항원적 상관관계 다음으로는 MTR와 MG(K30003)과 가까웠다. NC-3 혈청은 MA, MC 및 MF와 상당한 반응력을 나타내지만 NC-11은 그렇지 않았다. MTR 항혈청은 MI와 강하게 반응하지만 MI로 흡수한다고 해서 그들의 동종반응이 감소하지 않는 것으로 보아 MTR 표면에 공유항원이 많지 않음을 보여주었다. MTR과 MNC, MC 및 MF 사이에도 상당량의 공유항원이 있음이 알려졌다. MTR 가운데 T-8 혈청과는 달리 T-13 항혈청은 MA, MG, MK 및 MTB와 강하게 교차반응하였다. 이상의 실험으로 밝혀진 mycobacteria의 항원적 상관관계가 각종 생물학적 및 생화학적 방법으로 갈라놓은 분류군과 잘 일치하고 있었다.