12일간 배양한 계배에서 떼어낸 근모세포에 자외선을 조사하면 근육 분화에 심한 변화를 유발시킬수 있다. 본 연구에서는 자외선이 세포분열 및 근섬유로의 전환, 근모세포와 근섬유의 형태에 미치는 영향을 조사하였다. 자외선을 받은 세포들은 크기가 작아지고 또 적은 수의 세포들이 근섬유 형성에 참여하기 때문에 근섬유의 직경이 좁아지고 길이 또한 작아진다. 자외선이 세포분열과 세포의 융합에 미치는 영향은 배양을 시작한 후 이른 시기에 조사할수록 그 효과가 크다. 또한 자외선의 양을 증가시키면 그 효과가 커져 지나친 양을 조사하면 세포에 치사작용을 나타낸다. 따라서 자외선에 의한 세포 밀도의 감소가 근섬유 형성의 저하를 초래하는 것으로 사료되어 이에 본 연구와 타 실험실에서 얻은 정보를 바탕으로 세포 융합 능력 감소의 원인에 대하여 토의하였다.
Apoptosis is the ability of cells to self-destruct by the activation of an intrinsic cellular suicide program when the cells are no longer needed or when they are seriously damaged. Morphologically, apoptosis is characterized by the appearance of membrane blebbing, cell shrinkage, chromatin condensation, DNA cleavage, and the fragmentation of the cell membrane-bound apoptotic bodies. Siegesbeckia glabrescens Makino (Siegesbeckiae Herba, SG) has been widely used as treatments for arthritis, and fever, as well as detoxification properties. The present studies were undertaken to evaluate if SG has an anti-apoptotic property. Cell viability was measured by XTT and tryphan blue stain. Morphological characteristic of human aortic smooth muscle cells(HASMC) were visualized with a phase-contrast microscope. SG significantly reduced HASMC, but not human umbilical vein endothelial cell(HUVEC), viability in a dose-dependent manner. Confluent untreated cells at 24hrs showed normal morphology, flat with a uniform polygonal shape. SG-treated cells (0.5㎎/㎖) at 24hrs showed apoptotic morphology. Cells became irregular with elongated lamellipodia, and exhibited condensed chromatin in nuclei with occasional endoucleation. There was an increase in the number of apoptotic cells rounding-up and being detached from the substrate. TUNEL staining of SG-treated cells showed dark-brown stains in nuclei and cytosol. Caspases are central components of the machinery responsible for apoptosis and are generally divided into two categories; the initiator caspases, which include caspases-2,-8,-9, and -10, and the effector caspases, which include caspases-3,-6, and -7. SG decreased anti-caspase-3 protein expression, which means activation of caspases-3 activity. It has been reported that there is a link between NO formation and apoptosis. NO production was accelerated by SG treatment in HASMC. L-NNA, NOS inhibitor, inhibited SG-induced apoptosis. These results, therefore, indicated that both caspases-3 and NO production are involved in apoptosis in smooth muscle cells. According to these results, SG may have a potential effect in the treatment of hypertensive atherosclerosis.
We elucidated the distribution of interstitial cells of Cajal (ICC) in human stomach, using cryosection and $c-Kit$ immunohistochemistry to identify $c-Kit$ positive ICC. Before $c-Kit$ staining, we routinely used hematoxylin and eosin (HE) staining to identify every structure of human stomach, from mucosa to longitudinal muscle. HE staining revealed that the fundus greater curvature (GC) had prominent oblique muscle layer, and $c-Kit$ immunostaining $c-Kit$ positive ICC cells were found to have typical morphology of dense fusiform cell body with multiple processes protruding from the central cell body. In particular, we could observe dense processes and ramifications of ICC in myenteric area and longitudinal muscle layer of corpus GC. Interestingly, $c-Kit$ positive ICC-like cells which had morphology very similar to ICC were found in gastric mucosa. We could not find any significant difference in the distribution of ICC between fundus and corpus, except for submucosa where the density of ICC was much higher in gastric fundus than corpus. Furthermore, there was no significant difference in the density of ICC between each area of fundus and corpus, except for muscularis mucosa. Finally, we also found similar distribution of ICC in normal and cancerous tissue obtained from a patient who underwent pancreotomy and gastrectomy. In conclusion, ICC was found ubiquitously in human stomach and the density of ICC was significantly lower in the muscularis mucosa of both fundus/corpus and higher in the submucosa of gastric fundus than corpus.
Park, Seah;Kim, Kyung-Suk;Kim, Haekwon;Do, Byung-Rok;Kwon, Hyuck-Chan;Kim, Hyun-Ok;Im, Jung-Ae
한국발생생물학회:학술대회논문집
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한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
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pp.78-78
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2003
Adult stem cells can make identical copies of themselves for long periods of time. They also give rise to many differentiated mature cell types that have characteristic morphology and specialized function. Human adult stem cells are the attractive raw materials for the cell/tissue therapy, however, it is not easy to get from the adult tissues. In the present study, we tried to isolate a cell population derived from human umbilical cord vein which has been discarded after birth. The cells were isolated after treatment of the umbilical vein with collagenase or trypsin. After 3 days of culture, two kinds of cell populations were found consisting of adherent cells with endothelial cell-like and fibroblast-like morphology, respectively. When these cells were subcultured 12 times over a period of 3 months, almost cells appeared uniformly to exhibit fibroblastoid morphology which was different from that of mesenchymal stem cells obtained from human bone marrow The results of RT-PCR analyses showed distinct expression of BMP-4, oct-4, and SCF genes but not of GATA, PAX-6 and Brachyury genes. On immunohistochemical staining, the cells were negative for the von Willebrand factor(vWF), alpha-smooth muscle actin and placental alkaline phosphatase. From these observations, it is suggested that stem-like cells might be present in human umbilical cord vein.
Akt는 다양한 세포에서 성장, 발달, 증식, 분화와 같은 생리적 활성에 중요한 역할을 하고 골격근 세포에서 Akt는 재생 및 비대와 위축을 조절한다고 알려져 있다. 골격근 세포의 분화에 있어서 Akt의 역할을 밝히고자 본 연구를 수행하였다. 골격근 세포를 분화 시키기 위해 고밀도 및 저농도의 serum 상태에서 배양하며, 분화된 C2C12 근아세포는 둥근 모양에서 다핵을 가진 긴 모양으로 바뀐다. 이러한 형태학적 변화는 분화 시킨 후 2일부터 일어났다. 또한, 골격근 분화 표지인자인 myogenin D와 myogenin G의 발현은 2일 후 관찰되었다. C2C12 세포주에 Akt1 또는 Akt2의 발현을 저하시키면 이와 더불어 골격근으로의 분화도 저해됨을 확인하였고, 이와는 반대로 Akt1 또는 Akt2를 과발현 시키면 골격근으로 분화가 촉진됨을 알 수 있었다. 이와 더불어 Akt의 활성은 분화유도 2일 후부터 관찰되었고 7일 이후로는 감소하였다. Kruppel-like factor 4의 발현은 6일부터 증가하는 것이 관찰이 되었다. Kruppel-like factor 4의 발현 또한 Akt1 또는 Akt2의 발현양이 감소된 C2C12 근아세포에서 줄어들어 있는 것을 확인하였다. 또한 Kruppel-like factor 4의 프로모터 부위에 대한 전사조절능력이 Akt1 또는 Akt2의 발현을 저하시켰을 때 같이 떨어짐을 확인하였다. 이러한 결과들로 보아 Akt가 골격근 분화를 조절하는데 있어 중요하며, Kruppel-like factor 4 발현이 이를 조절하는 데 있어 중요한 역할을 할 것이라 판단된다.
Characteristics of snake reproductive organs that are relatively less affected by external environmental conditions can be used as an important means of classification; additionally, such characteristics can provide useful information on a species' reproductive system. In this study, we compared the testis weights, hemipenis lengths and retractor muscle lengths of male Oocatochus rufodorsatus and Rhabdophis tigrinus in Colubridae and Gloydius saxatilis, G. brevicaudus and G. ussuriensis in Viperidae. The snake snout-vent lengths (SVLs) were positively related to the three reproductive organ sizes, but the body weight only exhibited a positive relationship with the testis weight. The three organs did not significantly differ on the left and right sides. The relative testis weights and retractor muscle lengths (divided by the body weight and SVL, respectively) of the Colubridae snakes were greater than for the Viperidae snakes, but the relative hemipenis lengths (divided by SVL) did not differ between the two groups. The relative testis weight of G. saxatilis and the relative retractor muscle lengths of the Viperidae snakes were smaller compared with the Colubridae snakes. The relative hemipenis length of O. rufodorsatus was greater than for R. tigrinus, G. saxatilis and G. brevicaudus. Additional comparisons were not significant. Our results may facilitate further studies on hemipenial morphology and mating competition in Korean snakes. This is the first study on Korean snake reproductive organs.
It is the aim of this study to determine the effects of facial denervation on physiological properties of facial muscles and facial bones in growing rabbits. Experimental animals of fifty two Oryctolagus cuniculus rabbits were employed. Unilateral dissection of facial nerve was carried out on twelve rabbits, bilateral dissection of facial nerve was made on another twelve rabbits and the other twenty rabbits were on unilateral dissection of facial nerve for the histochemical analyses. Six rabbits on the bilateral surgical sham operations and six rabbits of non-intervention served the control groups. EMG records of the orbicularis oris, buccinator and masseter muscles as well as lateral and dorsoventral cephalometric films were taken and analyzed at 0, 1, 2, 5 and 8 weeks respectively. The orbicularis oris, buccinator and masseter muscles of both sides were removed from the animals of the histochemistry group and muscle fibers were classified on the basis of histochemical staining for $\alpha$-GPD, NADH-D and myosin ATPase. EMG activities of orbicularis oris and buccinator muscles were vanished immediately after denervation. Recovery of activities were detected one week after denervation in buccinator and five weeks in orbicularis oris muscles. Histochemical properties of masseter muscles remained as fast glycolytic through the experimental period. Orbicularis oris muscle fibers showed the gradual diminution of size and ratio of the slow oxidative fibers accompanied with atrophy, phagocytosis and vacuolation as well as the augmentation of fast oxidative glycolytic fibers. The buccinator muscle manifested the augmentation of fast oxidative glycolytic fibers at five weeks of experiment. Visual changes in morphology of craniofacial area were not evident, however it variety of subtle changes were apparent from statistical analysis of cephalometric measurements. It is concluded facial nerve regulates the physiological properties of facial muscles and interrelation between the function of the facial muscles and changes of facial bones would be in some degrees.
This investigation was designed to determine the effectiveness of the posterior occlusal schemes on masticatory activity during mastication in complete denture. Twelve edentulous subjects were selected for this study. All subjects had no past history and no functional abnormality on masticatory system and TMjoint. And, they had residual ridge of favorable morphology, firm mucosa and Class I skeletal jaw relationship, Twelve experimental denture with interchangeable occlusions(0-degree teeth, 30-degree teeth, Levin teeth and S-A teeth) were constructed for this study. The masticatory performance was analyzed by means of standard sieve(10, 16, 20, 30sieve), and the electrical activity from selected muscles(Temporalis and Masseter muscle) was recorded simultaneously with electromyography (Bio-Pak system) as the subject masticated test foods (rice, peanut and gum) with four different occlusal schemes. Mandibular movement was, also, measured with Sirognathography(Bio-Pak system). These recordings were performed in immediately, after 1 week and after 2 weeks of insertion of complete denture. The results were as fellows; 1. The average masticatory performance of 0-degree artificial teeth was higher than any other artificial teeth. 2. Masticatory performance in denture wearer was affected preferentially by food and artificial occlusal schemes. 3. During chewing, there was a statistical difference of EMG activity between masseter and temporal muscle(p<0.01). Especially, EMG activity of working masticatory muscle was highly affected by food rather than by artificial occlusal schemes. 4. In denture wearer, the velocity of opening was not affected by food, whereas, the velocity of closing was faster in soft food chewing than in hard food chewing, and the amount of vertical displacement was grater in chewing of soft and large bolus than in chewing of hard and small bolus. However, the amount of lateral displacement showed conversely(p<0.05). 5. It was considered that masticatory performance in denture wearer is not affected by the condition of residual ridge. the history of denture wear, the preference, the adaptation to artificial teeth and the total mesiodistal length of artificial posterior teeth.
This investigation was designed to determine the effectiveness of the posterior occlusal schemes on masticatory activity during mastication in complete denture. Twelve edentulous subjects were selected for this study. All subjects had no past history and no functional abnormality on masticatory system and TMjoint. And, they had residual ridge of favorable morphology, firm mucosa and Class I skeletal jaw relationship, Twelve experimental denture with interchangeable occlusions(0-degree teeth, 30-degree teeth, Levin teeth and S-A teeth) were constructed for this study. The masticatory performance was analyzed by means of standard sieve(10, 16, 20, 30sieve), and the electrical activity from selected muscles(Temporalis and Masseter muscle) was recorded simultaneously with electromyography(Bio-Pak system) as the subject masticated test foods (rice, peanut and gum) with four different occlusal schemes. Mandibular movement was, also, measured with Sirognathography(Bio-Pak system). These recordings were performed in immediately, after 1 week and after 2 weeks of insertion of complete denture. The results were as follows; 1. The average masticatory performance of 0-degree artificial teeth was higher than any other artificial teeth. 2. Masticatory performance in denture wearer was affected preferentially by food and artificial occlusal schemes. 3. During chewing, there was a statistical difference of EMG activity between masseter and temporal muscle(p<0.01). Especially, EMG activity of working masticatory muscle was highly affected by food rather than by artificial occlusal schemes. 4. In denture wearer, the velocity of opening was not affected by food, whereas, the velocity of closing was faster in soft food chewing than in hard food chewing, and the amount of vertical displacement was grater in chewing of soft and large bolus than in chewing of hard and small bolus. However, the amount of lateral displacement showed conversely (p<0.05). 5. It was considered that masticatory performance in denture wearer is not affected by the condition of residual ridge, the history of denture wear, the preference, the adaptation to artificial teeth and the total mesiodistal length of artificial posterior teeth.
The object of this study is to investigate the effects of intermittent cyclic stretching on the smooth muscle cells (SMCs) seeded onto aligned multi-layered fibrous scaffold. To make multi-layered fibrous scaffold, polyurethane (PU) and poly(ethylene oxide) (PEO) were electrospun alternatively, then were immersed into distilled water to extract PEO. Various types of scaffolds were fabricated depending on fiber directions, i.e., aligned or randomly oriented. The direction of stretching was either parallel or vertical to the fiber direction for the aligned scaffolds. The stretching was also applied to the randomly aligned scaffolds. The duration of stretching was 2 min with 15 min resting period. During the stretching, the maximum and minimum strain was adjusted to be 10 and 7%, respectively with the frequency of 1 Hz. The bioactivities of cells on the scaffolds were assessed by quantifying DNA, collagen, and glycosaminoglycan (GAG) levels. And the cell morphology was observed by staining F-actin. SMCs under parallel stretching to the fiber direction responded more positively than those in other conditions. From the results, we could explain the morphological effect of a substrate on cellular activities. In addition the synergistic effects of substrate and mechanical stimuli effects were confirmed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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