• 생명과학회지
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• 제19권6호
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• pp.728-734
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• 2009

본 연구에서는, PBMC로부터 고순도 및 고수율의 단세포를 분리하기 위해 Histopaque 용액의 density 및 osmolarity를 PBS와 NaCI 용액으로 1.072 g/ml 및 335 mOsm로 조절하여 간단하고 경제적인 방법인 부유밀도구배 원심분리법을 개발하였다. 위와 같이 조절된 Histopaue 용액을 사용하여 부유밀도구배 원심분리를 시행한 결과 단세포는 Top층에서 가장 많이 회수되었다. 회수된 단세포의 순도는 71.44${\sim}$82.38%의 범위를 나타내었고 평균 74.75${\pm}$3.84% 이었다. 또한, 수율은 21.02${\sim}$53.63%의 범위를 나타내어 평균 32.62${\pm}$11.16% 이었다. 이러한 방법의 부유밀도구배 원심분리에 의해 분리된 단세포를 수지상세포로 분화 유도시켜 그 형태, 표현형, 기능적인 면을 분석해 보았을 때 전형적인 수지상세포의 기능을 나타내었다. 결론적으로, PBMC로부터 단세포를 분리하기 위해 본 연구에서 사용된 부유밀도구배 원심분리 방법은 plastic adherence, elutriation 및 immunomagnetic selection보다 용이하고 경제적인 방법이다. 나아가 이러한 장점을 바탕으로 임상단계에서 수지상세포를 안전하고, 효율적으로 배양할 수 있는 closed system에도 적용이 가능할 것으로 기대된다.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권1호
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• pp.19-27
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• 1997

본 연구에서는 영장류에서 감염성 면역결핍 증상을 일으키는 type D simian retrovirus (SRV)를 검출하기 위해 SRV env 유전자의 특정 지역을 선정하여 증폭, 검색하는 중합효소 연쇄반응 (PCR)법을 개발하였다. 증폭반응의 대상부위인 SRV env 유전자의 3' 후반부는 서로 다른 3 종류의 SRV subtype 1, 2, 그리고 subtype 3에 걸쳐 높은 보존율을 보이고 있다. 반응 결과, 1차 PCR 만으로 3 종류의 SRV subtypes를 동시에 검출, 증폭하였으며 SRV와 더불어 영장류에서 감염성 면역결핍을 유도하는 주요 바이러스 simian immunodeficiency virus 또는 simian T-Iymphotropic virus type 1에 감염된 영장류의 peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)을 비교, 완전한 증폭 특이성이 확인되었고 교차반응으로 인한 위양성반응은 발견되지 않았다. 한편, 위 증폭반응의 검출 민감도 측정을 위해 준정량적 적정 PCR을 수행하였으며 SRV 게놈과 증폭 대상 부위의 분자량을 기준으로 한 본 PCR법의 검출 한계는 단 한번의 증폭과 간단한 ethidium bromide 염색만으로 적어도 $5-7{\times}10^4$ 개의 PBMCs 중 한 개의 감염세포를 검출할 수 있는 것으로 확인되었다. 본 연구에서 확인된 신속성과 반응 특이성, 그리고 높은 민감도의 본 PCR 법은 현재 유일한 AIDS 연구모델인 영장류의 SIV 감염 연구 전후에 반드시 필요한 효과적인 SRV 감염검색에서 ELISA법의 위양성에 의한 약점을 보완하고 보다 높은 검출 민감도를 확보함으로써 연구모델 실험의 오류를 최소화하는 데 중요한 역할을 하게 될 것이다.

• 대한임상검사과학회지
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• 제38권1호
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• pp.9-15
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• 2006

Peripheral bood stem cell collection (PBSCC), including peripheral blood stem cell transplantation (PBSCT), has been utilized worldwide as a very beneficial treatment method instead of allogenic Bone Marrow Transplantation (BMT) because it has many advantages such as rapid bone marrow engraftment and hematopoietic recovery, easy and safe accessibility and lower risk of rejection compared with allogenic BMT. In order to identify most the observable parameter in PBSCC, we analyzed various hematological parameters before and after PBSCC, and evaluated the correlation between the time of bone marrow engraftment and the number of CD34+ cells. Thirteen patients, who underwent 54 PBSCCs from January, 2003 to August, 2004 at Chungnam National University Hospital due to various systemic neoplasms, were analyzed in aspects of various hematological parameters including CD34+ cells using by Flow Cytometry (FCM). PBSCC harvests are described below: Mononuclear cells (MNC) $2.3{\pm}1.4{\times}10^8/kg$ and CD34+ cells $0.63{\pm}0.35{\times}10^6/kg$ on average, respectively. There was a statistical significance in Hb and Hct before and after PBSCC, but not in WBC and platelet counts. The period to reach the hematological bone marrow engraftment was 13.4(10~21) days and 19.5(11~38) days according to the criteria of absolute neutrophile counts (ANC) ${\geq}500/uL$ and platelet counts ${\geq}50,000/{\mu}L$ in peripheral blood, respectively. There was a significant correlation between the numbers of CD34+ cell and ANC (p<0.05), and a borderline significance between MNC and ANC (p=0.051). We found that a group of patients, who were infused with CD34+ cells more than $3.5{\times}10^6/kg$, reached more rapidly the period of bone marrow engraftment in platelet counts (p=0.040). This present study suggested that Hb and Hct were the most useful parameters and should be closely monitored before and after PBSCC, that a PBSCT with the dosage of more than $3.5{\times}10^6/kg$ of CD34+ cells was needed to perform successful bone marrow engraftment, and additionally that platelet counts could be more useful in indicating bone marrow engraftment than ANC.

• 대한세포병리학회지
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• 제18권1호
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• pp.46-54
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• 2007

Cerebrospinal fluid (CSF) cytology is an effective tool for evaluating diseases involving the central nervous system, but this technique is usually limited by its low cellularity and poor cellular preservation. Here we compared the manual liquid-base $Liqui-PREP^{TM}$ (LP) to the cytospin (CS) with using a mononuclear cell suspension and we applied both methods to the CSFs of pediatric leukemia patients. The cytopresevability, in terms of cell yield and cell size, and the clinical efficacy were evaluated. When 2000 and 4000 mononuclear cells were applied, LP was superior to CS for the cell yield, 16.8% vs 1.7% (P=0.001) and 26.2% vs 3.5% (P=0.002), respectively. The mean size of the smeared cells was 10.60 ${\mu}m$ in the CS, 5.01 ${\mu}m$ in the LP and 6.50 ${\mu}m$ in the direct smear (DS), and the size ratio was 1.7 (CS to DS), 0.8(LP to DS) and 2.1 (CS to LP), respectively. As compared to the cells in the DS, the cells in the CS were significantly enlarged, but those in the LP were slightly shrunken. Upon application to 109 CSF samples, 4 were diagnosed as positive for leukemia (positive), 4 had atypical cells and 101 were negative by CS; 6 were positive, one had atypical cells and 102 were negative by LP. For six cases, in which 4 were positive for leukemia and 2 of 4 had atypical cells by CS, they were positive by LP and they were also confirmed as positive according to the follow-up study. Three cases diagnosed as atypical cells (two by CS and one by LP), were confirmed as negative. In conclusion, these results suggest that LP is superior to CS for the cytopresevability and for rendering a definite diagnosis of cerebrospinal fluid.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제25권2호
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• pp.115-122
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• 1998

The maintenance of a viable pregnancy has long been viewed as an immunological paradox. The deveolping embryo and trophoblast are immunologically foreign to the maternal immune system due to their maternally inherited genes products and tissue-specific differentiation antigens (Hill & Anderson, 1988). Therefore, speculation has arisen that spontaneous abortion may be caused by impaired maternal immune tolerance to the semiallogenic conceptus (Hill, 1990). Loss of recall antigen has been reported in immunosuppressed transplant recipients and is associated with graft survival (Muluk et al., 1991; Schulik et al., 1994). Progesterone $(10^{-5}M)$ has immunosuppressive capabilities (Szekeres-Bartho et al., 1985). Previous study showed that fertile women, but not women with unexplained recurrent abortion (URA), lose their immune response to recall antigens when pregnant (Bermas & Hill, 1997). Therefore, we hypothesized that immunosuppressive doses of progesterone may affect proliferative response of lymphocytes to trophoblast antigen and alloantigen. Proliferative responses using $^3H$-thymidine ($^3H$-TdR) incorporation of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) to the irradiated allogeneic periperal blood mononuclear cells as alloantigen, trophoblast extract and Flu as recall antigen, and PHA as mitogen were serially checked in 9 women who had experienced unexplained recurrent miscarriage. Progesterone vaginal suppositories (100mg b.i.d; Utrogestan, Organon) beginning 3 days after ovulation were given to 9 women with unexplained RSA who had prior evidence of Th1 immunity to trophoblast. We checked proliferation responses to conception cycle before and after progesterone supplementation once a week through the first 7 weeks of pregnancy. All patients of alloantigen and PHA had a positive proliferation response that occmed in the baseline phase. But 4 out of 9 patients (44.4%) of trophoblast antigen and Flu antigen had a positive proliferative response. The suppression of proliferation response to each antigen were started after proliferative phase and during pregnancy cycles. Our data demonstrated that since in vivo progesterone treated PBMCs suppressed more T-lymphocyte activation and $^3H$-TdR incorporation compare to PBMCs, which are not influenced by progesterone. This data suggested that it might be influenced by immunosuppressive effect of progesterone. In conclusion, progesterone may play an important immunological role in regulating local immune response in the fetal-placental unit. Furthermore, in the 9 women given progesterone during a conception cycle, Only two (22%) repeat pregnancy losses occured in these 9 women despite loss of antigen responsiveness (one chemical pregnancy loss and one loss at 8 weeks of growth which was karyotyped as a Trisomy 4). These finding suggested that pregnancy loss due to fetal aneuploidy is not associated with immunological phenomena.

• 한국임상수의학회지
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• 제27권5호
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• pp.622-625
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• 2010

고양이의 귀에서 발생하는 염증성 용종은 중이 또는 귀이두관에서 유래하여 인두 또는 외이도관으로 파급되는 비종양성, 염증성 성장을 말한다. 두 마리의 2세령 암컷 고양이(Russian blue)가 이도 삼출물, 외이의 가피 형성, 머리 또는 귀를 흔드는 증상을 약 2-3주간 나타내었다. 이도에서 외과적으로 적출한 두 개의 종괴를 검사하였다. 병리조직학적으로 이 종괴들은 증식된 섬모상피 또는 비각화중층편평상피로 피복되어 있으며, 부분적인 미란 또는 궤양이 형성되어 있었다. 종괴는 증식된 결합조직과 광범위한 단핵세포 침윤으로 구성되어 있었다. 면역조직화학 염색을 실시한 결과 약 90%의 단핵세포들은 CD3 양성인 T 림프구로 증명되었다. 종괴에 대한 중합효소연쇄반응을 실시하였으나 바이러스 병원체는 모두 음성으로 확인되었다. 따라서 임상 소견 및 병리학적 소견을 토대로 두 종괴는 고양이의 중이에서 유래한 염증성 용종으로 확진되었다.

• 대한화학회지
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• 제36권3호
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• pp.428-441
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• 1992

이핵성 다섯자리 Schiff base 착물계인 $Co(II)_2$ (BSPP)($H_2O)_2$, $Co(II)_2$ (BSPD)($H_2O)_2$, $Mn(II)_2$ (BSPP)($H_2O)_2$ 및 $Mn(II)_2$ (BSPD)($H_2O)_2$와 일핵성 다섯자리 Schiff base 착물계인 Co(II)(BSP)($H_2O)$ 및 Mn(II)(BSP)($H_2O)$들을 합성하였다. 이들 착물들의 조성을 원소분석, IR, UV-visible spectrum, T.G.A. 및 DSC 측정으로 알아보았다. 지지전해질용액 0.1M의 TEAP-Py (-DMSO 및 DMF)을 포함한 10mM 착물용액에서 유리질 탄소전극을 사용한 순환전압전류법과 DPP법으로 전기화학적 성질을 측정한 결과 이핵성 cobalt(II) 및 manganese(II) 착물들은 $M(III)_2$ / $Mn(II)_2$ 와 $Mn(II)_2$ / $M(I)_2$ (M; Co 및 Mn)의 두 과정에서 일전자의 환원과정이 각각 두 단계 환원과정에서 네 단계로 일어나지만 일핵성 착물들은 M(III) / M(II) 와 M(II) / M(I) 의 두 과정에서 각각 한 단계 산화${\cdot}$환원과정으로 일어남을 알았다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제24권3호
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• pp.399-405
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• 1997

Progesterone is necessary for successful pregnancy and had immunosuppressive properties. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from many women with unexplained recurrent spontaneous abortion responded to trophoblast extract in vitro by prolifertion and releasing soluble, heat-labile factors that are toxic to mouse embryos (embryotoxic factors). Accumulating evidence suggests that T Helper (Th)-1 type immunity to trophoblast is correlated with embryotoxic factor production and is associated with pregnancy loss, while Th2-type immunity is associated with successful gestation. The objective of this study was to determine whether progesterone can inhibit Th1-type cytokine secretion (IFN-${\gamma}$, TNF-${\alpha}$) by trophoblast-activated peripheral blood mononuclear cells from 23 nonpregnant women (age 25-35) with unexplained recurrent abortion (median 5, range 3 to 15)who otherwise produce embryotoxic factors in response to trophoblast. We also determined whether progesterone affected Th2-type cytokines (IL-4, IL-10) in this system in vitro and if IL-10 (1,500 pg/mL) could inhibit Th1-type immunity to trophoblast. IFN-${\gamma}$ was detected in 17 of 23 (74%) trophoblast stimulated PBMC culture supernatants ($77.94{\pm}23.79$ pg/mL) containing embryotoxic activity. TNF-${\alpha}$ was detected in 19 (83%) of these same supernatants ($703.15{\pm}131.36$ pg/mL). In contrast, none of the supernatants contained detectable levels of IL-4 or IL-10. Progesterone ($10^{-5}$, $10^{-7}$, $10^{-9}$M) inhibited Th1-type immunity in a dose dependent manner, but had no effect on Th2-type cytokine secretion. The inhibitory effects of progesterone were abrogated with RU486, but did not affect Th2-type cytokine secretion in trophoblast-activated cell cultures. IL-10, like progesterone also inhibited Th1-type cytokine secretion but had no effect on Th2-type cytokines. These data suggest that therapies designed to suppress Th1-type cytokine secretion in women with recurrent abortion who have evidence of Th1-type immunity to trophoblast may be efficacious in preventing pregnancy loss and should be tested in appropriately designed clinical trials.

• 자원환경지질
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• 제42권5호
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• pp.495-500
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• 2009

액티나이드(actinide)의 지질물질로의 수착은 핵에너지와 핵무기 개발로 인하여 인위적으로 자연환경에 노출된 핵종 원소의 이동성과 생물이용가능성을 낮추어 줄 수 있을 것으로 기대된다. 3가의 액티나이드 이온은 3가의 란타나이드(lanthanide) 이온과 유사한 화학적 성질을 띠므로, 3가 액티나이드의 산화광물 표면수착량은, 중성 또는 약한 산성의 pH 상태에서 3가의 란타나이드처럼, 인산염 이온(${PO_4}^{3-}$) 이 수착된 상태에서 크게 증가될 것으로 사료된다. 본 연구에서는 3가액티나이드 이온의 화학적 동족체인 3가 유로피움 이온($Eu^{3+}$)이 인산염이 수착된 상태의 뵈마이트 (${\gamma}$-AlOOH; boehmite) 표면에 수착되는 삼성분 수착계를 X선 흡수분석(EXAFS)을 통하여 관찰하였다. Eu X-선 흡수분석은 Eu-$PO_4$-뵈마이트 삼성분 수착계에서 뵈마이트 표면에 $EuPO_4$ 표면침전물이 형성되는 것을 지시하여 준다. 인산염이 뵈마이트 표면에서 $EuPO_4$ 표면침전물을 형성할 뿐 아니라 두자리 단핵 표면착물을 형성한 것을 P X-선 흡수분석을 통하여 확인하였다.

• 한국임상수의학회지
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• 제20권4호
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• pp.437-442
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• 2003

CLA를 급여시킨 돼지에 있어 말초 혈액 세포의 변화와 탐식세포의 탐식반응을 조사하였다. 100일령, 평균체 중 80kg인 거세 수퇘지에게 10t-l2c CLA와 CLA mixture를 각각 사료 중에 5% 첨가하여 총 4주간에 걸쳐 자유급여 시켰다. 급여 전 (0주), 급여 2주후, 4주후 그리고 급여 중지 후인 5주차에 각각 혈액세포 수치(PCV 백혈구수 및 백혈구 감별계산치)의 변화와 탐식세포의 탐식활성을 측정하였다. CLA의 급여 따른 PCV의 수치에 있어서는 아무런 변화가 없었다. 그러나 10t-l2c CLA 또는 CLA mixture가 함유된 사료를 급여한 돼지에 있어서 CLA를 급여하지 않은 돼지에 비해 백혈구수 특히 호중구 수가 현저히 증가하였다. 말초혈액 단핵구세포(mononuclear cells; MNC)와 다형핵백혈구(polymorphonuclear cells; PMN)의 탐식능를 유세포분석기로 분석한 결과, 10t-l2c CLA 또는 CLA mixture 급여와 상관없이 MNC와 단구세포들(monocyte-rich cells)의 탐식능에는 변화가 없었다. 그러나 PMN의 탐식 활성은 CLA 무급여 대조돼지들에 비해 CLA 급여군은 2주에서 5주차에 걸쳐 증가된 탐식능를 나타내었다. 이상의 결과로부터 돼지에 CLA 급여는 호중구수 증가와 호중구 탐식능 증가를 유도할 수 있음을 제시하였으며 향후 생체방어 증강을 위해 CLA를 임상적으로 투여할 수 있을 것으로 보인다.