The optimal conditions for production of Monascus sp. KM100l cell mass on submerged culture and production of monacolin K on rice solid culture were investigated. An overproducing mutant of Monascus pigments, KM 1001 mutant, from Monascus purpureus KCCM60016 was selected by NTG treatment. The optimal medium for the production of KM100l mutant cell mass is instructed to be composed of 3% glucose, 2% yeast extract, 0.1 % KH$_2$PO$_4$, 0.05% The optimal conditions for production of Monascus sp. KM100l cell mass on submerged culture and production of monacolin K on rice solid culture were investigated. An overproducing mutant of Monascus pigments, KM 1001 mutant, from Monascus purpureus KCCM60016 was selected by NTG treatment. The optimal medium for the production of KM100l mutant cell mass is instructed to be composed of 3% glucose, 2% yeast extract, 0.1 % KH$_2$The optimal conditions for production of Monascus sp. KM100l cell mass on submerged culture and production of monacolin K on rice solid culture were investigated. An overproducing mutant of Monascus pigments, KM 1001 mutant, from Monascus purpureus KCCM60016 was selected by NTG treatment. The optimal medium for the production of KM100l mutant cell mass is instructed to be composed of 3% glucose, 2% yeast extract, 0.1 % $(KH_2PO_4$, 0.05% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.2% L-asparagine, pH 4.5, and the optimal inoculum size and shaking speed were $1.5{\times}10^6$ spores/50 m1 medium and 150 rpm, respectively. On optimal conditions, 4.1 g/l of the cell mass was obtained at 28$^{\circ}C$ for 3 days. The mycelium were inoculated on 500 g of steamed rice using vinyl bag ($30.6{\times}44$ cm) and incubated at $30^{\circ}C$, 85% humidity for 21 days. Lactone form monacolin K was rapidly increased for 2 days and reached highest concentration of monacolin K (2,930 mg/kg) for 15 days, and monacolin K was decreased after 15 days.
Monacolin-K가 0.6% 들어있는 Monascus 배양물을 시판 산란계 시료에 각각 0.00%, 2.67%, 5.33% 및 8.00%씩 추가로 첨가하여, 1일 1사당 사료섭취량이 125g일 경우 1일1수당 Monacolin-K 섭취량이 각각 0, 20, 40 및 60mg이 되도록 하는 4개 처리를 두었고, 총 180수의 산란계를 공시하여 10주간 사양시험을 실시한 결과 산란율과 평균 난중은 처리간에 유의적인 차이가 없었으나, 사료섭취량과 산란량 kg당 사료 요구율은 Monascus 배양물의 첨가수준이 증가할수록 감소하였다. 전 기간 평균 혈청 콜레스테롤 함량은 Monascus 배양물의 첨가수준이 증가할수록 감소하는 경향이었으나, 유의적인 차이는 없었다. 난황의 콜레스테롤 함량은 Monascus 배양물 첨가급여 4~5주 후부터 유의적으로 감소하였고(P<0.05), 사양시험 종료시 대퇴부근육의 콜레스테롤 함량도 유의적으로 감소하였다(P<0.05).
The production of red pigment from glucose by fed-batch culture of Monascus anka was investigated. In batch culture using fermentor, 200 rpm of agitation speed, 1vvm of aeration volume, and 10% (v/v) of inoculum size were optimal, respectively. The red pigment production was increased by removal of wall-attached mycelium. In an intermittent feeding fed-batch culture, dry cell weight increased to 30 g/l, adn the red pigment content reached 350 of absorbance at 495nm. In a continuous feeding fed-batch culture, dry cell weight increased to 22g/l, and the red pigment content reached 190 of absorbance at 495nm.
Monascus purpureus KCCM 60016을 이용하여 다량의 색소생산 변이주를 개발하고 생산조건에 대하여 조사하였다. 자외선 조사로 M. purpureus KCCM 60016으로부터 돌연변이를 유도한 결과, 색소생성이 우수한 P-57 변이주를 분리하였다. 분리된 P-57 변이주는 고체 배양에서 현미를 기질로 했을 때 색소생성이 가장 우수한 것으로 나타났으며, 색소생성의 최적 배양조건은 배양온도 $30^{\circ}C,\;90\%$의 배양습도에서 30일간 배양이 가장 우수했다. 이상의 조건에서 배양한 적색색소, 오렌지색소와 황색색소의 양은 각각 160.0 unit, 193.6 unit와 141.6 units-나타났다.
Monascus rubber KCTC 6122를 이용하여 액체 배양을 통한 실험균의 적색 색소의 생산을 위한 배양 조건의 최적화에 관한 결과는 다음과 같다. 실험 균주가 생산하는 적색색소의 최적 배양 조건은 탄소원으로 rice powder 4% 첨가, 질소원으로 NaN0$_3$ 0.2%, 인산염으로 $Na_2$HPO$_4$의 농도가 0.3%, MgSO$_4$의 농도가 0.15%일 때 가장 높은 적색 색소 생성을 나타내었다. 배양 온도는 3$0^{\circ}C$, 초기 pH가 6.5, 진탕속도를 150 rpm, 배양 시간 8일 일 때 적색 색소의 생성능이 흡광도 70.29로 가장 우수하였다.
Monascus is a source of food colorant with high productivity of the pigment azaphilone. Monascus azaphilone (MAz) is biosynthesized through a single non-reducing polyketide pathway, the major components of which are ankaflavin (1), monascin (2), rubropunctatin (3) and monascorubrin (4); valuable biological activities have been reported for these compounds. Thus, various culture conditions were explored to reduce the cost of culture ingredients, enhance productivity and modulate compound composition. In the present study, we examined an extractive fermentation (EF) method with Diaion HP-20 resin (HP20) in direct comparison to a previously explored method involving Triton X-100 (TX100) to explore the modulated production of the major MAzs. We employed wild-type Monascus purpureus as well as two derivative recombinant strains (${\Delta}mppG$ and ${\Delta}mppE$) that are known to have differential MAz profiles as that of the wild-type strain. The HP20 resin was capable of modulating the MAz profile in favor of orange MAzs 3 and 4, oxidized congeners in this class, as was TX100-a phenomenon not previously observed for TX100 EF with Monascus anka. These finding substantiate that HP20 can be employed for the selective production of oxidized MAz and for diversifying the culture conditions used for Az production.
In this study, we tested possibility of replacing nitrite salts, which were always added during the meat product processing, with the metabolites produced by antimicrobial and red pigment producing Monascus strains. We have already shown that Monascus No. 116 strain has the highest antimicrobial activity among the strains isolated from Ang-Khak. Monascus isolate No. 229 was chosen due to its outstanding red pigment producing ability. The red pigment production by No. 229 was highest in the medium containing 8% sucrose, 2% yeast extract, 0.1% K2HPO4, 0.5% MgSO4. Optimum pH and temperature for the red pigment production were pH 6.2 and 3$0^{\circ}C$, was found in spot or Rf value 0.54 on TLC plate using ethyl acetate-acetone-water (4:4:1, v/v/v) as development solvent system. Isolate No. 116 and No. 229 were cultured in a optimal condition for the antimicrobial activity and red pigmentation. The culture concentrates were applied in situ to the production of instantly processed ham. Mixed application of 89 ppm Na-nitrite and 300 ppm of culture broth concentrate of Monascus isolate No. 116 and 500 ppm of red color produced by Monascus isolate No. 229 showed similar results with the single application of 94 ppm Na-nitrite. These results confirmed that the antimicrobial activity and red pigment of Monascus strains might be valuable to replace Na-nitrite salt in meat processing.
The growth characteristics and production of color pigments by Monascus strains were investigated during liquid culture, and production of monacolin K in red mold rice was carried out by solid state fermentation. Four different Monascus ruber strains were cultured in potato dextrose yeast extract broth (PDYB) media at $25^{\circ}C$ for 15 days. The high producing strain for red pigment was not corresponded to the strain for yellow pigment. Production of red pigment was high in the strain causing the fast pH change in culture broth. Production of monacolin K in red mold rice by solid state fermentation was influenced by a combination of wet cell weight and spore density in inoculum by liquid culture. Most strains showed the high production of monacolin K in red mold rice, when submerged fermentation was carried out for 5 days as inoculum for solid state fermentation. These results suggest that submerged fermentation period of inoculum have an effect on the production of monacolin K in red mold rice by solid state fermentation, and monacolin K in red mold rice could be increased by controlling the condition of submerged fermentation for inoculum.
Genus Monascus(M. pilosus and M purpureus)의 배지(Lin, SP, YM YE, GMIN, SMO, MY, GY, Nishikawa, sucrose, stock culture, Mizutani, modified Lit Toya 및 쌀배지)에 따른 균의 증식도와 색소생성량을 조사하였다. M. pilosus 및 M purpureus의 증식도가 높은 배지는 Mizutani 배지와 Lin 배지 였으며 3$0^{\circ}C$에서 10일간 배양하였을 때 생균체 무게는 각각 24.5~26.9 g/100 mL 및 15.9~17.2 g/100 mL이였고 M. pilosus의 성장률이 높았다. 색소생성량이 높은 배지는 두 균주 다같이 Lin 및 Mizutani 배지였으며 각각 흡광도는 1.2~1.6 및 0.8~l.0이었다. 균주 중에서는 M. pilosus에서 높았다.
Monascus 배양물의 급여 수준 및 출하 전 급여 기간이 육계 및 육용 오리의 능력과 혈액 및 고기의 콜레스테롤 함량에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 실험 1에서는 monacolin-k의 함량이 $0.5\%$인 Monascus 배양물을 시판 육계 사료에 0(C), 0.5(T1), 1.0(T2) 및 $1.5\%$(T3)씩 첨가하여 $2\~6$주령 간에 4주간 급여하는 4처리를 두었으며, 실험 2에서는 대조구(C)와 monacolin-k의 함량이 $0.5\%$인 Monascu 배양물을 시판 육계 사료에 $1.0\%$ 첨가하여 $4\~6$주령(2주간, T1), $2\~6$주령(4주간, T2) 및 $0\~6$주령(6주간, T3)에 급여하는 4 처리를 두었다. 모든 처리에는 3반복을 두었고 반복당 1일령의 육계 16수와 육용오리 10수를 각각$2m{\times}l.5m$의 평사 사육실에 완전임의 배치하여 6주간 실험한 결과는 다음과 같다. 실험 1에서 Monascus 배양물의 급여 수준이 증가할수록 육계의 증체량과 사료 섭취량은 유의적으로 감소하였으며 (P<0.05), 오리는 반대로 증가하는 경향을 보였으나 유의적인 차이는 없었고, 육계와 오리의 사료 요구율은 모두 증가하는 경향을 보였으나 역시 유의적인 차이는 없었다. 6주간의 폐사율은 처리간에 유의성이 인정되었으나(P<0.05)일정한 경향은 보이지 않았다. 육계와 오리의 혈청 콜레스테롤 함량은Monascus배양물의 급여 수준이 증가할수록 유의하게 감소하였으며(P<0.05), 가슴살과 다리살의 콜레스테롤 함량도 감소하는 경향을 보였으나 유의적인 차이는 없었다. 실험 2에서 출하 전 Monascu배양물의 급여 기간이 길어질수록 육계의 증체량(P<0.05)과 사료 섭취 량은 감소하는 경향을 보였으며, 오리는 반대로 증가하는 경향을 보였으나 통계적인 차이는 없었다. 사료요구율은 육계와 오리에서 모두 증가하는 경향을 보였으나 역시 처리간에 유의적인 차이는 없었으며, 폐사율은 오리에서만 유의성이 있었으나(P<0.05) 일관성이 없었다. 육계와 오리의 혈청 중 콜레스테롤 함량은 출하 전 Monascus 배양물의 급여기간이 증가할수록 유의하게 감소하는 경향을 보였으며(P<0.05), 가슴살과 다리살의 콜레스테롤 함량도 감소하는 경향을 보였으나 유의적인 차이는 없었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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