착물을 촉매제로 하여 용매인 CH2Cl2와 산화제 NaClO를 사용하여 올레핀 산화반응의 메카니즘 연구를 하였다. 이들 반응에서 포르피린의 치환기는 TPP(5,10,15,20-Tetraphenylporphyrin)와 (p-X)TPP(X=CH3O, CH3, F, Cl)를, 올레핀은 styrene과 (p-X)styrene (X=CH3O, CH3, Cl, Br)을 사용하였다. 일반 효소반응에서 잘 알려진 Michaelis-Menten식에 따라 Km과 Vmax 값을 구하였다. Michaelis-Menten 식의 속도 파라미터를 포르피린 치환기에 따라 측정하고, 이들 파라미터와 치환기상수 간의 상관성을 조사함으로써 올레핀 산화반응의 중간체 M-oxo-olefin의 형성 과정과 분해 과정이 촉매활성이나 속도 결정 단계의 변화에 미치는 영향을 분석 하고자 하였다.
Penicillin sensor was manufactured by immobillizing penicillinase with glutaraldehyde on the $H^+$-selective membrane based on PVC-COOH-TDDA. This membrane was not inter fered by $K^+$ ion in Pc-G potassium salt. When enzyme was immobilized with glutaraldehyde, the PVC-COOH matrix was more effective than PVC matrix. Calibration curve calculated from Nernst equation was not linear. But potential was relative to concentration of Pc-G. And maximal potentiometric velocity was also relative to concentration of Pc-G. Therefore, it may be applied to Michaelis-Menten equation. The penicillin sensor was useful for determination of Pc-G at concentration of 0.1~10mM level.
Beer의 법칙을 이용하여 lysozyme-M. lysodeikticus cell의 용해반응속도 및 lysozyme의 활성을 측정할 수 있는 간단하고 새로운 실험방법을 제시하였다. M.lysodeikticus cell의 농도에 따라 용액의 UV 투과도를 측정하였으며 이것은 Beer의 법칙에 따르는 것으로 나타났다. 또한 용액 내의 lysozyme 농도 및 용해반응에 의해 생성되는 생성물은 UV 투과도에 전혀 영향을 미치지 않는 것으로 실험적으로 증명되었다. 따라서 lysozyme의 용해반응이 진행되는 동안 용액내에 존재하는 M. lysodeikticus cell의 농도는 UV-분광광도계를 이용하여 in-situ로 측정될 수 있었다. 이렇게 얻어진 M. lysodeikticus cell의 농도변화를 Michaelis-Menten식을 이용하여 lysozyme-M. lysodeikticus cell의 용해 반응속도 상수들을 결정하였다. 최대반응속도상수 $k_3$은 약 $0.1734sec^{-1}$로 나타났으며 Michaelis-Menten 상수는 약 $9.83{\times}10^{-6}M$으로 나타났다. Lysozyme의 용해반응속도가 활성에 의존하므로 이와 같은 측정을 통해 lysozyme의 활성도도 측정할 수 있었다.
탈질화 균주인 Paracoccus denitrificans를 이용한 탈질화 공정에 있어서 탈질 효율의 증대를 위해 선행 연구를 바탕으로 화학적 permeabilization 처리 후 균주를 고정화시키는 방법을 이용하였다. 반응기는 이상적인 CSTR을 도입하여 free cell reactor와 immobilized cell reactor 그리고 permeabilized and immobilized cell reactor의 세 가지 형태의 실험을 실시하였으며, 탈질효율의 비교를 위해 M-M 식을 적용시켰다. 각 반응기의 체류시간에 따른 탈질 효과는 permeabilized and immobilized cell reactor가 가장 우수하였으며 또한 반응 평형에도 다른 두 반응기에 비해 빨리 도달하는 것으로 나타났다.
이상계를 이용해서 올리브유를 가수분해하는 데 있어서, 리파제의 반응동력학을 검토했다. 반응계는 Candide rugosa와 Rhizopus arrhizus 리파제를 수용액상에 녹이고 기질인 올리브유를 유기용매인 이소-옥탄에 녹여서 서로의 계면에서 효소반응이 일어나는 이상계 반응이다. 각각의 리파제에 대해서 이소-옥탄에 올리브유를 여러 농도로 녹여서 유지 분해속도를 측정함으로써 리파제의 반응 동역학을 보았다. 이상계 내에서 반응 속도 방정식은 일반 효소의 속도 방정식의 Michaelis-Menten식을 따르지 않았다. 이 결과는 이상계에서 유기용매내의 올리브유의 농도가 계면면적의 변화에 영향을 주기 때문에 비롯되는 것으로 생각된다. 그래서 올리브유의 농도가 계면면적에 영향을 주지 않는다고 가정한 식에 변형을 가해서 새로운 식을 유도했다. 이 식은 특히 올리브유가 낮은 농도에서 심하게 Michaelis-Menten 식에서 벗어나는 현상을 설명할 수 있다.
Removal of nitrogen compound from waste water is essential and often accomplished by biological process. Deni-trification bacterium. Paracoccus denitrificans(KCTC 2350) is employed to estimate the ability and the characteristics of denitrification. In the immobilized biological reactor system, the measurement of absolute amount of active strain in the reactor is comparatively difficult or impossible. In this study, strain immobilized denitrification reactor was designed with the unwoven texture wrapped peeped hole plastic tube to calculated the absolute amount of active strain by comparing the activity of the immobilized reactor adn the free cell reactor. The reactor system was continuous stirred tank reactor and the rate of substrate consumption was assumed to be Michaelis-Menten equation. As a result, we found that the amount of immobilized active strain was the half of the total active strain in the reactor and the time required to reach in the equilibrium state in the immobilized reactor system was shorter than that of the free cell reactor system.
A hydrogenperoxide sensor containing peroxidase extracted from horseradish was constructed and pH effect on its sensing ability was investigated. Current profiles of the biosensor with pH and the electrophoretic analysis showed that horseradish peroxidase consists of two isozymes. Assuming that it is a hypothetical twoisozyme mixture, the current profiles were deconvoluted into two Gaussians. Application of the new Michaelis-Menten equation connoting pH concept to this system enabled to find all the related dissociation constants of the isozyme-substrates and the isozyme-proton complexes and to determine pHs for the maximal isozyme activities.
A model was developed to describe the microbial decontamination of diesel contaminated soil in a soil column. The biodegradation rate of diesel in nature depends on temperature and the pH of soil, availability of nutrients, oxygen and water. The soil moisture content is one of the essential factors because it characterizes the availability not only of water to microorganisms but also of oxygen and nutrient dissolved in soil. In this work, the rate of biodegradation was modeled by coupling Michaelis-Menten kinetics for the aqueous-phase solute with adsoption-desoption equation for diesel sorption and desorption from soil.
A modified form of the integrated Michaelis-Menten equation would provide a useful means of evaluating enzyme kinetic parameters in nonlinear progress reaction with time. A slight modification of the Lineweaver-Burk form (and other variants) using for the velocity, the change in substrate concentration divided by time ($\={v}$), and for the velocity, the change in substrate for the time interval ($\={S}$), allows this linear reciprocal form to be used with negligible error even when as much as half of the substrate is utilized during the time interval.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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