As a research for developing biofertilizers, Klebsiella oxytoca, an associative nitrogen fixer in the rhizosphere of rice plant in the soil of paddy field, was subjected to molecular breeding. The results obtained were as followings. 1). By transforming pbIC71A, Nif A overproducing plasmid, into Klebsiella oxytoca NGl3, Klebsiell6f oxytoca SH3l, and Klebsiella oxytoca SH161, nitrogenase activities in the absence of nitrogen source in the medium were increased 6.4, 17.2, and 13.5 times, respectively, in comparison with the parent strains. 2). Nitrogenase activity of Klebgiella oxytoca NGl3, Klebsiella oxytoca SH3l, and Klebsiella oxytoca SH161 was completely repressed In the presence of 15mM NH4+. But, nitrogenase activities of Klebsiella oxytoca NGl3/PMC71A, Klebsiella oxytoca SH3l /PMC71A, and Klebsiella oxytoca SH 161/pMC714 harboring PMC71A, were 13.7%, 7.7%, and 6.2% of the nitrogenase activities in the absence of nitrogen source in the medium, respectively.
The ripe fruit of Hass avocado contains one of the highest elvels of cytochrome P-450 protein found in the plant kingdom. To determine whether wounded roots of avocado contain P-450 protein, the roots of avocado were wounded by slicing, and then allowed to incubate in sealed plastic bags, in 0.4M mannitol, and in the solution to make protoplast preparation containing cellulysin and macerase during the specified times. The microsomal proteins were extracted from the samples, separated by SDS-PAGE, and then subjected to Western blot analysis using polyclonal antibodies which are generated against the CYP71A1 protein. wounded roots in sealed bags produced CYP71A1 within 6 hours after cutting, and those in 0.4M mannitol did not produce CYP71A1 even after 72 hours, but those in the protoplast preparation by cellulysin and macerase induced and produced CYP71A was induced in only 24 hours. These results indicate that CYP 71A1 plays a role for wound healing for root tissue o avocado, and would-inducible P-450 protein was not detected in the mannitol solution by preventing a synthesis of ethylene in a liquid state, but the softening of tissues by cellulysin and macerase to make protoplast preparation was involved in an activation of CYP 71A1 even in the liquid state.
본 연구는 편백정유의 천연 항산화제로의 유용성을 평가하기 위하여 수행했다. 편백정유 원액과 편백정유 분획물의 항산화활성을 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)법과 ammonium thiocyanate법을 사용하여 조사하였다. DPPH법을 이용한 경우 편백정유의 $IC_{50}$은 $40{\mu}{\ell}/m{\ell}$였으며, 편백정유 분획물 중에서 G분획의 DPPH 항산화능이 $0.5{\mu}{\ell}/m{\ell}$ 농도에서 66.94%로 가장 높았다. Ammonium thiocyanate법에서 배양 1일 후 편백정유 원액과 편백정유 분획물 C, D, E의 항산화효과는 각각 72.0%, 71.2%, 71.9%, 71.0%였다. 항산화 활성분획인 G분획은 $\alpha$-terpineol, elemol, widdrol, $\alpha$-cadinol 등으로 구성되어 있었다.
Bacillus licheniforntis에서 분비된 단백질 추출물에서 ammonium sulfate fractionation과 Sephadex G-75젤 여과 크로마토그라피를 사용하여 부분 정제된 2개의 서로 다른 활성을 갖는 단백질 분해 효소를 얻었다. 단백질 분해 효소 type l은 카제인에 대해 비교적 높은 활성을 보이며 organotluoride와 EOTA에 의한 억제에 매우 민감했다 이 효소의 최적 pH는 7.5였으며 $75^{\circ}C$에서 빠르게 변성되었다. 단백질 분해효소 type II는 type I에 비해 낮은 카제인 분해 활성을 보이며 ImM PMSF와 10mM EOTA용액과 함께 $37^{\circ}C$에서 30분 간 반응시키면 역사 활성이 억제되었다 한편 이 효소 는 pH 8.0에서 최대 활성을 나타내고 $71^{\circ}C$ 에서 상대적으로 늦게 불환성화 되었다.
본 연구는 RAPD표지를 이용하여 국내외에서 수집된 고추 유전자원들간의 유전적관계를 평가하고자 수행되었다. Random primer를 이용한 고추의 PCR반응은 $MgCl_2$ 3mM, Taq. DNA polymerase 1.5U, 주형 DNA 10ng, dNTPs $200{\mu}M$, random primer 200nM 그리고 $42^{\circ}C$의 annealing 온도조건으로 최적화하였다. 80개의 random primer로부터 높은 밴드선명도와 재현성을 보이는 16개가 선발되었으며 70%의 GC함량을 갖는 primer들이 GC함량이 60%인 것보다 DNA증폭에 있어 효과적이었다. 31개의 고추품종및 계통들에 대해 71개의 polymorphic밴드와 22개의 monomorphic밴드를 포함하는 총 93개의 DNA밴드가 선발된 16개의 random primer들로부터 형성되었다. Primer당 약 4.4개의 polymorphic밴드가 형성되었다. 이들 71개의 polymorphic밴드를 이용하여 유사도지수가 구해졌으며 이를 근거로 31고추 계통 또는 품종들을 뚜렷이 구분하는 dendrogram이 작성되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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