Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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2003.10a
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pp.61-61
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2003
Aquaporins (AQPs)는 다양한 상피세포와 내피세포에 존재하며 다량의 물 수송을 촉진하는 막성단백질로 현재 11개의 AQP가 (AQP0-10) 발견되었으나, 아직 생리적, 기능적 분석은 불충분한 상태이다. 생쥐의 자궁내막은 발정주기 동안 호르몬의 자극에 따라 부풀어오르거나 수축하는 변화를 보이며 에스트로젠과 몇몇 혈관에 작용하는 매개체에 의해 자궁 혈관의 투수성이 증가한다는 보고는 있으나, 자궁액의 수송 메커니즘에 대해서는 뚜렷하게 밝혀진 바가 없다. 발정기의 생쥐 자궁은 자궁내막세포의 증식과 함께 수화되는 특징을 보이며 자궁내강으로 물이 수송되어 luminal fluid의 점성이 낮아지는 현상이 나타나는데, 이 때 AQP가 water channel로서 중요한 역할을 할 것으로 보고 본 실험에서는 면역조직화학법(immunohistochemistry)과 역전사중합효소연쇄반응(Reverse-transcriptase polymerase chain reaction)을 통해 발정기 자궁의 수화와 AQP 발현의 상관성에 대해 알아보고자 하였다. 면역조직화학법의 결과 발정주기의 다른 시기에 비해 발정기(estrus phase)에 자궁상피세포에 AQP4, 5, 8 protein이 다량 존재하는 것으로 밝혀졌고, 근육층(myometrium)에서의 발현은 발정주기 동안 차이가 없었다. Whole uterus로 RT-PCR을 수행한 결과 AQP4, 5, 8 mRNA는 luteal phase에 비해 follicular phase에 더 많이 발현하는 것으로 확인되었다. 또한 LCM(Laser Capture Microdissection) system을 이용하여 luminal epithelium과 stromal cell을 분리하여 RT-PCR을 수행한 결과 AQP4, 5, 8 mRNA는 stromal cell 보다는 luminal epithelium에 더 많이 발현하며, 이 역시 follicular phase에 발현량이 증가함을 확인하였다. 이러한 결과로 미루어 생쥐 자궁에서 AQP4, 5, 8은 발정주기 내막에 발현이 증가하며 이는 자궁내강 안으로 수분을 수송하는데 주요한 기작으로 사료되며 estrogen에 의한 조절 가능성을 암시한다.
Kim, Hwan-Deuk;Jeon, Hye-Jin;Jang, Min;Bae, Seul-Gi;Yun, Sung-Ho;Han, Jee-Eun;Kim, Seung-Joon;Lee, Won-Jae
Journal of Animal Reproduction and Biotechnology
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v.37
no.2
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pp.96-105
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2022
The ovary undergoes substantial physiological changes along with estrus phase to mediate negative/positive feedback to the upstream reproductive tissues and to play a role in producing a fertilizable oocyte in the developing follicles. However, the disorder of estrus cycle in female can lead to diseases, such as cystic ovary which is directly associated with decline of overall reproductive performance. In gene expression studies of ovaries, quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qPCR) assay has been widely applied. During this assay, although normalization of target genes against reference genes (RGs) has been indispensably conducted, the expression of RGs is also variable in each experimental condition which can result in false conclusion. Because the understanding for stable RG in porcine ovaries was still limited, we attempted to assess the stability of RGs from the pool of ten commonly used RGs (18S, B2M, PPIA, RPL4, SDHA, ACTB, GAPDH, HPRT1, YWHAZ, and TBP) in the porcine ovaries under different estrus phase (follicular and luteal phase) and cystic condition, using stable RG-finding programs (geNorm, Normfinder, and BestKeeper). The significant (p < 0.01) differences in Ct values of RGs in the porcine ovaries under different conditions were identified. In assessing the stability of RGs, three programs comprehensively agreed that TBP and YWHAZ were suitable RGs to study porcine ovaries under different conditions but ACTB and GAPDH were inappropriate RGs in this experimental condition. We hope that these results contribute to plan the experiment design in the field of reproductive physiology in pigs as reference data.
Kim, Chung-Hoon;Moon, Jei-Won;Kang, Hyuk-Jae;Ahn, Jun-Woo;Kim, Sung-Hoon;Chae, Hee-Dong;Kang, Byung-Moon
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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v.39
no.1
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pp.22-27
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2012
Objective: To evaluate the effectiveness of GnRH antagonist multiple dose protocol applied during early and late follicular phase (MDP-EL) in comparison with standard GnRH agonist luteal long protocol (LP) in each non-obese and obese polycystic ovary syndrome (PCOS) women undergoing IVF. Methods: Two hundred eleven infertile women with PCOS were recruited and randomized to undergo either GnRH antagonist MDP-EL (antagonist group) or standard GnRH agonist luteal LP (agonist group). IVF cycle outcomes were compared between the two groups. Results: Total dose and days of recombinant human follicle stimulating hormone (rhFSH) administered were significantly fewer in the antagonist group than in the agonist group. Incidence of severe ovarian hyperstimulation syndrome was significantly lower in the antagonist group. However, IVF and pregnancy outcomes were similar in the two groups. When all subjects were divided into non-obese and obese subgroups, in non-obese PCOS subgroup, IVF and pregnancy outcomes were comparable in the antagonist and agonist groups but total dose and days of rhFSH were also significantly fewer in the antagonist group. Similar findings were also observed in obese PCOS subgroup. Conclusion: GnRH antagonist MDP-EL is at least as effective as GnRH agonist LP and may be a more patient-friendly alternative in controlled ovarian stimulation for PCOS patients undergoing IVF, independent of body mass index.
월경주기 중 황체기가 짧은 여성 즉 황체기 단축현상을 가진 한국여성(SLP) 의 특성을 조사하고 진단하는 방법을 개발하기 위하여 본 실험을 행하였다. 재료는 정상 월경주기를 가진 12명의 여성에서 26주기와 8명의 황체기 단축현상을 가진 여성에서 17주기를 선택하였다. 기상후 첫 오줌에서 steroid glucuronides의 농도를 측정하여 비교한 결과는 다음과 같았다. SLP 의 estrone -3 -glucuronide ($E_1G)의 농도는 초기 여포기와 황체기 동안 정상인에 비하여 현저히 낮았다. 또한 SLP 의 전 월경기 중 pregnanediol-$3{\alpha}$-glucuronide($P_2G$)의 농도 역시 유의성있게 낮았다. 그러나 $E_1G/P_2G$의 비율은 여포기가 황체기에 비하여 현저히 높았고, SLP 여성의 비율이 정상인 보다 각 월경주기 중 유의성있게 높았다. 위의 결과로 보아 $E_1G$, $P_2G$및 $E_1G/P_2G$의 농도차로 황체기 단축현상을 가진 여성을 진단 하고 또 치료시 난소의 기능조절에 이욜될 수 있을 것으로 사려된다.
The expression of glucosamine-6-phosphate deaminase (GNPDA) was examined in mouse ovary from neonate to aduit. In western blot, band of Mr. 31 kDa antigen sharply increased 2 weeks after birth onward. In irmmunostaining of the adult ovary, GNPDA expression was constitutive in the theca and interstitial cells. However, expression in the granulosa cells was different according to folliculogenesis. Cytoplasm of the oocyte of some primary follicle showed positive signal but not in the antral follicle. Granulosa cells of antral follicles showed no visible sign of GNPDA expression. In the corpora lutea, the signal intensity in granulosaluteal cells increased according to luteal development and became the highest in the luteolytic phase. In summary, the differential expression of GNPDA was found in follicle cells according to folliculogenesis. It suggests that GNPDA might be involved in tissue remodeling in mouse ovary.
Observations were recorded regarding various fertility parameters on 26 Jersey donor cows following superovulation under tropical conditions. These cows, in their mid-luteal phase were treated with 2,500-3,000 i.u. PMSG or 28-40 mg FSH followed by $500{\mu}g$$PGF_{2{\alpha}}$ injection 48-60 hours later, to induce oestrus. The cows were bred artificially twelve hours following standing oestrus. Embryo collection was carried out 7 days after oestrus. $PGF_{2{\alpha}}$ was injected to each donor cow after embryo recovery to regress the corpora lutea. Fertility data($PGF_{2{\alpha}}$-Oestrus interval, services per conception, days between embryo collection and successful service and any pathololgical condition) were recorded. $PGF_{2{\alpha}}$-Oestrus interval and correlation (r) between number of corpora lutea and $PGF_{2{\alpha}}$-Oestrus interval were $30.9{\pm}6.3$ and 0.17, respectively. Of 26 treated donors, 19 conceived within a period of $91.7{\pm}18.8$ days after embryo recovery. Average services per conception were $2.3{\pm}0.3$. Only two cows developed metritis which conceived after treatment with antibiotics. These observations indicated no profound adverse effect of superovulation on subsequent reproduction of donor cows, except some effect on services per conception, under tropical conditions.
This experiment was carried out to develop a sensitive, rapid, solid-phase microtitre plate assay of progesterone using the monoclonal antibody to this hormone. Monoclonal antibody to progesterone was much higher titre and binding affinity about 10 times than conventional polyclonal antibody to progesterone. Dot-blot analysis of monoclonal antibody revealed a single precipitation band when reacted with anti-mouse IgM and anti-mouse K. A competitive reaction was used with a reaction time of 2 hours. The standard dose-response curve was linear through 1,000pg/well. This ELISA system approach is applicable to evaluation for the rapid assessment of luteal function and reproductive status in both clinical and research in a wide variety of species.
Gross and histological findings were obtained on cysts formed in the reproductive organs, particularly in the mesosalpinx, mesovarium, and fimbria, of 144 gilts and 37 sows. Of the 181 gilts and sows, 63 (34.8%) were found to have cysts which totaled 89. The number of cysts totaled 38 for the gilts and 51 for the sows, with relative frequencies of 18.1% and 48.6%, respectively. The total number of cysts and the incidence were greater in the sows than in the gilts. With regard to the location of cysts, the highest incidence was found in the mesosalpinx (59.6%). The incidence of cysts in the mesovarium and fimbria was relatively low, with 16.9% and 23.6%, respectively. Most cysts were spherical or oval in shape, and below 5.9mm in diameter. A pedunculated cyst was also seen. The bilateral, incidence of the cysts was lower than unilateral, although the incidence was approxmately the same between the gilts and the sows. With regard to the sexual cycle, the high incidence of cysts was found in the follicular phase than in the luteal phase. The cysts putting pressure upon the oviduct were classified into 3 types according to the shape of epithelium and lamina propria. In type I the epithelium had ciliated cells and the lamina propria formed folds. I type 2 ciliated cells existed, but no folds were formed. In type 3, neither ciliated cells nor folds were seen, the histological change, including partial atrophy and lack of folds in the tubal mucosa were seen.
The artificial insemination (AI) is one of the best assisted reproductive technologies for increasing reproductive capacity and facilitating the genetic improvement in farm animals. AI has been used in Uganda for over 60 years, but a small population of the total herd has been used. This study was conducted to investigate the efficacy of AI with estrus synchronization technique and to propose ways of improving the productivity of dairy farms through AI services in Uganda. In total, 78 cows from 11 dairy farms were selected for timed-AI. Synchronization was performed according to the ovsynch programs followed by AI using frozen semen from Korean Holstein (0.5 ml straws). Pregnancy rate was varying among farms (0-50%) and the overall pregnancy rate was 28.2%. Cows in luteal phase at the time of treatment was 40.0% whereas that in follicular phase was 20.8%. After treatment, cows that showed normal estrus signal were 45.5% (25/55). Abnormal estrus was categorized into pre-estrus (9.1%), cystic ovaries (21.8%), anestrus (18.2%) and delayed ovulation (5.5%), respectively. These results imply that an assured protocol for timed-AI should be developed to improve the productivity of dairy farms through AI services in Uganda.
Steroidogenesis requires coordination of the anabolic and catabolic pathways of lipid metabolism, but the profile of proteins associated with progesterone synthesis in cyclic and pregnant corpus luteum (CL) is not well-known in cattle. In Experiment 1, plasma progesterone level was monitored in cyclic cows (n = 5) and pregnant cows (n = 6; until d-90). A significant decline in the plasma progesterone level occurred at d-19 of cyclic cows. Progesterone level in abbatoir-derived luteal tissues was also determined at d 1 to 5, 6 to 13 and 14 to 20 of cyclic cows, and d-60 and -90 of pregnant cows (n = 5 each). Progesterone level in d-60 CL was not different from those in d 6 to 13 CL and d-90 CL, although the difference between d 6 to 13 and d-90 was significant. In Experiment 2, protein expression pattern in CL at d-90 (n = 4) was compared with that in CL of cyclic cows at d 6 to 13 (n = 5). Significant changes in the level of protein expression were detected in 32 protein spots by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-DE), and 23 of them were identified by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). Six proteins were found only in pregnant CL, while the other 17 proteins were found only in cyclic CL. Among the above 6 proteins, vimentin which is involved in the regulation of post-implantation development was included. Thus, the protein expression pattern in CL was disorientated from cyclic luteal phase to mid pregnancy, and alterations in specific CL protein expression may contribute to the maintenance of pregnancy in Korean native cows.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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