• Natural Product Sciences
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• 제5권2호
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• pp.88-92
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• 1999

Inhibition of gap junction-mediated intercellular communication (GJIC) has been considered as an important factor in the tumor promotion phase of carcinogenesis. Recovery effects of natural products on gap junctional intercellular communication are measured by scrape-loading and dye transfer method using Lucifer yellow after administration of phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) on WBF344 cells. Among tested natural products, the hexane fraction and subfractions (F-01 and F-04) of Setaria italica were relatively effective for recovery of GJIC. The hexane fraction of Setaria italica $(EC_{25},\;12.14\;{\mu}g/ml)$ and subfractions $(F-01:EC_{50},\;10.74\;{\mu}g/ml;EC_{25},\;1.58\;{\mu}g/ml,\;F-04:EC_{50},\;11.03\;{\mu}g/ml;\;EC_{25},\;3.12\;{\mu}g/ml)$ revealed dose-dependent recovery effects on GJIC. Our data show GJIC activity measurement by Lucifer yellow spread on cells can be an effective tool for the screening of natural products with possible cancer chemopreventive effects.

• 한국생물물리학회:학술대회논문집
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• 한국생물물리학회 1996년도 정기총회 및 학술발표회
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• pp.6-6
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• 1996

Gap junction channels were reconstituted into unilamellar liposomes using immunoaffinity purified connexin 32 gap junction protein from rat liver. Vesicles containing open channels and close channels were separated by means of iso-osmolar sucros density gradient sedimentation. The open channels formed in lipid vesicles were permeable to a fluorescent dye molecule, lucifer yellow of which the hydrodynamic size is similar to pore size of gap junctions in vivo. (omitted)

• 한국동물학회지
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• 제30권1호
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• pp.29-43
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• 1987

Incilaria fruhstorferi daiseninana의 뇌는 쌍을 이루고 있는 뇌(cerebral), 측(pleural), 노(parietal), 족(pedal)신경절과 단일 복부(abdominal)신경절로 구성되어 있으며, 이들은 융합된 신경고리를 이루고 있었다. 복부신경절로부터 나오는 내장신경은 생식, 장, 심장, 신장신경등으로 분지되어 이들 각 기관에 신경을 공급하고 있었다. 다음 3가지 방법, 즉, 내장신경을 Ni$^2$+로 역방향으로 충진하여 세포체를 염색하는 방법, 형광화합물 Lucifer yellow를 세포내로 주입하는 방법, 세포내활동전위와 내장신경의 세포외 활동전위를 동시에 측정하는 방법으로 적어도 12가지의 동정된 뉴우런이 내장신경과 관련되고 있음을 알았다. 알아낸 각 세포의 전기생리학적인 특성을 검지하고, 이것과 각 세포의 돌기 분지상태와의 관련 및 일부 세포간의 상호관계를 검사하였다. 이들중 8가지 세포가 내장신경에 축색돌기를 내보내는 효과신경세포라는 증거를 얻었다.

• 한국안광학회지
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• 제18권4호
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• pp.533-540
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• 2013

목적: 본 연구에서는 발생 중[태어난 지 5일(P5), 10일(P10)] 마우스 망막의 ON-OFF 방향특이성 신경절세포 수상돌기 상에서 NMDA R1 수용체의 시냅스 패턴을 연구하고자 하였다. 방법: ON-OFF 방향특이성 신경절세포는 Lucifer yellow를 주사하여 형태학적 특징으로 동정하였다. 이극세포로부터의 글루타메이트의 흥분성 유입을 확인하기 위해 membrane traffic motor 단백질 마커인 kinesin을 이용하였다. 결과: 본 연구에서 P5, P10의 ON-OFF 방향특이성 신경절세포를 동정할 수 있었으며, NMDA R1의 면역반응반점은 내망상층에서 강하게 나타났다. ON-OFF 방향특이성 신경절세포의 수상돌기상의 수용체의 분포패턴에서 방향특이성을 예측할 수 있는 어떠한 비대칭성도 발견하지 못하였다. 결론: 이극세포로부터의 글루타메이트성 자극유입은 P5, P10 단계에서 모두 균형적으로 유입되며, 방향특이성은 NMDA R1 수용체의 특이적인 패턴에 있지 않음을 밝혔다.

• Animal cells and systems
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• 제2권1호
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• pp.99-106
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• 1998

In this study, we have examined the role of cAMP in gap junctional communication (GJC) in preimplantation mouse embryos. GJC was monitored by Lucifer Yellow (LY) injected into one blastomere of compacted embryos. The speed of GJC was defined as the time taken for the last blastomere of the embryo to become visibly fluorescent. The median time for 8-cell embrvos (140 sec) was similar to that for 16-cell (135 sec). To determine whether cAMP and cAMP-dependent protein kinase (PKA) are involved in the regulation of GJC, the effects of PKA inhibitor (H8) and cAMP analogues (Rp-cAMP and 8-Br-cAMP) on dye transfer between blastomeres of compacted embryos were examined. Some of the embryos treated with either H8 or Rp-cAMP failed to transfer LY to all blastomeres within 10 min. In contrast, 8-Br-cAMP speeded up fluorescent dye transfer. The median time to fill all blastomeres with LY was 140 sec in untreated controls and 90 sec in siblings treated with 8-Br-cAMP. Inhibition of PKA by H8 or Rp-cAMP induced delay or arrest in embryo development after compaction, but the increase of intracellular cAMP showed no effect. These findings suggest that GJC in preimplantation mouse embryos is regulated by cAMP-PKA pathway and transient interference by PKA inhibitors induces the developmental delay beyond compaction.

• Journal of Photoscience
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• 제9권2호
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• pp.190-193
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• 2002

The functional disruption of Langerhans cells (LC) by UVB radiation is involved in antigen-specific immunosuppression of contact hypersensitivity. We tested whether UVB radiation inhibits the endocytotic activity of LC, which leads to impaired subsequent migration and maturation. Human monocyte-derived LC that took up lucifer yellow (L Y) or FITC-dextran (Fd) exclusively migrated in response to 6Ckine and matured. Exposing LC to 10-40 mJ/cm$^2$ of UVB radiation reduced their endocytotic activity in fluid phase pinocytosis (measured by uptake of LY) and in receptor-mediated endocytosis (measured by uptake of Fd). Membrane ruffling and CD32 expression were also suppressed by UVB radiation. UVB-irradiated, endocytosing LC had less movement towards 6Ckine, expressed less CD54 and CD86, and had less effective stimulatory activity in allo-MLR than nonirradiated, endocytosing LC. Endocytosis up-regulated TNF-$\alpha$ production by LC, but prior UVB radiation inhibited this enhancement. The finding that impaired endocytosis of LC by UVB radiation inhibits subsequent migration and maturation was also confirmed in murine epidermal cells obtained from unirradiated and 2OmJ/cm$^2$ of UVB-irradiated skin.

• Journal of Ginseng Research
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• 제30권2호
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• pp.64-69
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• 2006

Gap junctional channels, allowing rapid intercellular communication and synchronization of coupled cell activities, play crucial roles in many signaling processes, including a variety of cell activities. Consequently, a modulation of the gap junctional intercellular communication (GJIC) should be a potential pharmacological target. In the present, the GJIC of a epithelial-derived rat mammary cells (BICR-M1Rk) was assessed in the presence of ginseng saponin, by using an established method of scrape-loading dye transfer assay. The transfer of Lucifer yellow (diameter: 1.2 nm) among the neighboring BICR-M1Rk cells, in which connexin43 (Cx43) is a major gap junction channel-forming protein, was significantly retarded at a concentration of $10{\mu}g/ml$ ginseng saponin. By using both methods of RT-PCR and Western blotting, it was demonstrated that ginseng saponin modulated neither the mRNA synthesis of Cx43 nor the translational process of Cx43. This ginseng saponin-induced modification of GJIC was a similar phenomenon observed under the $\beta$-glycyrrhetinic acid treatment, a well-known gap junction channel blocker. Taken together, it is reasonable to conclude that the ginseng saponin inhibits GJIC only by modulating the gating property of gap junction channels.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제26권4호
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• pp.229-238
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• 2022

Severe bacterial infections are frequently accompanied by depressed neutrophil functions. Thus, agents that increase the microbicidal activity of neutrophils could add to a direct antimicrobial therapy. Lysophosphatidylcholine augments neutrophil bactericidal activity via the glycine (Gly)/glycine receptor (GlyR) α2/TRPM2/p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway. However, the direct effect of glycine on neutrophil bactericidal activity was not reported. In this study, the effect of glycine on neutrophil bactericidal activity was examined. Glycine augmented bactericidal activity of human neutrophils (EC₅₀ = 238 μM) in a strychnine (a GlyR antagonist)-sensitive manner. Glycine augmented bacterial clearance in mice, which was also blocked by strychnine (0.4 mg/kg, s.c.). Glycine enhanced NADPH oxidase-mediated reactive oxygen species (ROS) production and TRPM2-mediated [Ca²⁺]_i increase in neutrophils that had taken up E. coli. Glycine augmented Lucifer yellow uptake (fluid-phase pinocytosis) and azurophil granule-phagosome fusion in neutrophils that had taken up E. coli in an SB203580 (a p38 MAPK inhibitor)-sensitive manner. These findings indicate that glycine augments neutrophil microbicidal activity by enhancing azurophil granule-phagosome fusion via the GlyRα2/ROS/calcium/p38 MAPK pathway. We suggest that glycine could be a useful agent for increasing neutrophil bacterial clearance.

• KSBB Journal
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• 제21권5호
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• pp.360-365
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• 2006

대규모 산업공정을 위한 효소 고정화 담체로서 나노세공 실리카의 상용화 가능성을 조사하였다. 정량반응 시스템을 이용하여 1차 입자의 생성조건을 변화시킴으로써 여러 세공크기를 갖는 나노세공 실리카를 만들었으며, 비표면적, 세공 용적, 공극 크기 등의 물성 제어를 하였다. 실리카와 효소 사이의 원활한 공유결합을 유도하기 위해, 실리카의 표면을 알데하이드기로 개질하였으며, Lucifer yellow라는 형광 dye를 이용하여 표면 개질을 확인하였다. 실리카 위에 목적 효소인 트립신을 각 조건에 따라 고정화 시킨 결과 충분한 고정화를 위해서는 50 nm 정도의 공극 크기가 필요함을 알았고, 표면 차이에 따른 고정화 차이를 통해 고정화에 있어 표면개질의 중요성을 볼 수 있었다. 또 재사용 시 고정화된 트립신의 활성 변화를 관찰, 활성이 90%까지 유지되는 동안 10회 이상의 반복 사용이 가능함을 확인하였다. 이를 통하여 고정화 효소 시스템의 산업적 이용을 위한 가능성을 확인하였다. 실리카의 상용화 가능성을 평가하기 위하여 현재 상용화 되고 있는 지지체와 유사한 조건에서 실험 후 결과를 비교해 본 결과 나노세공 실리카의 효소 고정화용 지지체로서의 상용화 가능성을 발견할 수 있었다.

• Journal of Ginseng Research
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• 제24권4호
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• pp.188-195
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• 2000

정상 흰쥐 유선상피세포 및 DMBA로 유도안 흰쥐 유선암세포를 in vitro 상태에서 배양시키며 이들의 성장과 증식에 대한 홍삼 사포닌(조사포닌, 총사포닌, Rbl, Rb2, Rc, Rd, Re, Rhl, Rtl2)의 영향을 관찰하였다. 홍삼 사포닌들의 세포 배양중 발생하는 4종의 세포집락의 형태(cobble stone, spindle, honey comb, senescence)에 영향을 미쳤다. 배양한 세포집락에 lucifer yellow용액을 이용하여 SLDT결과 홍삼 사포닌을 첨가하고 배양한 세포군에서 배양 2주째 세포 간극을 통한 세포간 정보전달체계가 양성을 나타내었다. 이것으로 홍삼사포닌이 분화가 덜된 상피 간세포의 분화를 촉진시켜 분화의 지표 중 하나인 세포체포신호전달을 유도한 것으로 사료된다. 그리고 정상 유선 및 유선암 미세절편들을 Matrigel에 배양한 결과 분화의 종 지표인 수종의 다세포구조물이 생성됨을 확인하였는데 정상 조직과 유선암세포로부터 생성된 구조물 ductal, webbed, stellate, squamous colony들of 생성되었는데 유선암세포로부터는 alveloar unit, foamy alveolar nit, squmaous, lobule-ductal, stellate, webbed colony들이 생성되어 다소 상이함을 확인하였다. 그러나 홍삼사포닌을 첨가하여 배양하였을 때 수종의 다세포 구조물 발생 빈도가 변하는 것으로 미루어 보아 홍삼 사포닌이 이들 다세포 구조물의 발생에도 영향을 미치는 것으로 생각된다. 편평상피암의 전암병소라 일컬어지는 편평상피화생의 경우홍삼 사포닌의 존재 하에 이들의 생성이 억제되고 분화가된 ductal colony들의 수가 증가된 것으로 보아 암예방 효과의 기전을 이해하는데 중요한 단서를 제공할 것으로 사료된다.