• 한국환경보건학회지
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• 제21권1호
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• pp.68-73
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• 1995

화합물질의 개발사용 및 환경오염 물질의 증가로 인하여 남성수태능력에 영향을 미치는 물질이 증가하고 있는 형편이다. 따라서 신속하고 경제적으로 남성 수태능력 영향물질을 평가하기 위하여 랫드의 고환세포를 이용한 남성 수태능력시험법을 개발하고자 본 시험을 실시하였다. 랫드의 고환 세포로부터 주요한 기능을 가진 Sertoli cell과 Leyding cell을 효소처리, 필터 그리고 percoll gradient과정을 거쳐 각각 분리하였다. 분리된 두 종류의 세포는 32$\circ$C에서 초기 배양한 후 37$\circ$C에서 계속 배양하였다. 본 배양조건에서 두 종류 세포는 양호한 발육을 보였으며 약 2주간의 배양이 가능하였다. Sertoli cell은 3주령의 랫드에서 분리가 잘되었고 Leydig cell은 85.7%의 생존율을 보였다. 이상의 결과와 같이 랫드의 고환세포중 Sertoli cell과 Leyding cell을 분리 배양하였으며, 앞으로 독성물질의 영향을 평가하기 위한 생화학적 및 구조적인 index 설정을 위한 연구가 필요하다고 사료된다.

• Environmental Analysis Health and Toxicology
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• 제18권2호
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• pp.95-100
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• 2003

본 연구는 환경호르몬(endocrine disruptors)으로 분류되었으며, 제초제로 널리 사용되었던 Dichlorodiphenyltrichloroethane(DDT)가 설치류의 생식세포 중 Leydig 세포의 testosterone(T)생성억제 및 그 관련 작용메카니즘을 규명코자 수행되었다. 먼저 흰쥐의 웅성 생식세포주인 R2C세포에 T의 양 및 aromatase 활성도를 radio immunoassay (RIA)방법을 이용하여 측정하였다. 그 결과 R2C 세포에 황체형성호르몬(LH)를 처리하여 testosterone생성을 증가시킨 후, DDT를 처리한 군들은 대조군에 비하여 농도 의존적으로 T의 양은 감소하였으며, aromatase 활성도는 증가하였다. 또한 DDT자체만 처리한 군에서도 대조군에 비하여 testosterone의 생성이 감소하였다. 이러한 aromatase활성 증가가 estradiol receptor(ER)와의 상호 관련성을 확인하기 위해 ER antagonist인 ICI 182.780를 처리한 후 T의 양 및 aromatase 활성도를 측정한 결과 DDT에 의해 증가된 aromatase활성도가 ICI 182.780에 의해 다시 감소됨을 확인하였다. 또한 DDT에 의해 감소된 T의 양도 ICI 182.780에 의해 다시 회복되었다. In vivo실험으로 흰쥐에 DDT를 직접 투여한 후 정소 내 성 호르몬들을 측정해 본 결과 T의 양은 유의성 있게 감소하였으며, estradiol(E$_2$)의 양은 증가하였으며, aromatase 활성도도 감소하였다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 DDT는 aromatase를 감소시키고, 이렇게 감소된 aromatase에 의해 testosterone 생성량을 억제하고, 이러한 DDT의 aromatase의 감소는 ER을 경유하는 것으로 추정할 수 있다.

• 한국가축번식학회지
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• 제9권1호
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• pp.56-61
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• 1985

This study was conducted in order to obtain the number and size of Leydig cell in the testis in accordance with the growth of Korean native goat. Twenty-one Korean native male goats were examied, and was divided into seven groups by 4 weeks interval from 8 to 32 weeks of age. The results were as follows: 1. The number of Leydig cells in the interstitial tissue were increased in accordance with age. The number of cells were increased twice from 1.3 cells at 8 weeks to 2.6 cells at 12 weeks of age, from 2.6 cells at 12 weeks to 5.5 cells at 24 weeks, respectively. And the cells were slightly increased from 5.5 cells at 16 weeks to 6.7 cells at 32 weeks. 2. The smallest cells were found in goats at 8 weeks of age, being 8.2${\mu}$m, and it showed noncontinual growth among groups of 12, 16 and 20 weeks of age, recording 9.18, 8.82 and 9.05${\mu}$m respectively. Leyding cells in 24, 28 and 32 weeks of age showed matured size being 10.42, 10.81 and 10.67${\mu}$m respectively. 3. Rows or clusters of Leydig cells were scattered in the loose connective tissue around lymphatic simusoids and blood vessels. Nuclei of Leydig cells were found to have 2 types, one type was stained pale and the other were stained dark. As a result of this study, Leydig cells found in the interstitial tissue were considered to grow until 20 weeks of age after birth, and reached to almost full maturated form by 24 weeks of ages.

• 대한수의학회지
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• 제45권3호
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• pp.325-334
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• 2005

Changes in the rabbit Leydig cell from birth to adulthood were studied in New Zealand white rabbits of 1, 7, 21, 35, 49, 70, 105, 147, 196, and 252 days (n = 8 rabbits per group) of age. The objectives of this study were to understand the fate of the fetal Leydig cells, to determine the changes in serum testosterone levels, and leutenizing hormone-stimulated testosterone production per testis in vitro, and to quantify adult Leydig cells by number and average volume with age. Testes of rabbits were fixed by whole body perfusion using a fixative containing 2.5% glutaraldehyde in cacodylate buffer, processed and embedded in Epon-araldite. Using $1{\mu}m$ sections stained with methylene blue-azure II, qualitative and quantitative (stereological) morphological studies were performed. Testosterone levels in the incubation medium of luteinizing hormone-stimulated (100 ng/ml) testosterone secretion per testis in vitro, and in serum were determined by radioimmunoassay. The average volume of a testis of 1-day-old rabbits was determined as $0.0073cm^3$ and the parameter increased linearly from birth to 252 days ($3.93cm^3$). The volume density of the seminiferous tubules increased with age from 33.76% at day 1 to 88.2% at day 252. The volume density of the interstitium represents 66.24% of the testicular parenchyma at day 1. This proportion progressively diminished during development to reach a value of 11.8% at day 252. The volume density of Leydig cells increased almost linearly from birth (0.001%) to 252 days (2.62%). Leydig cell mass per testis increases from 0.0012 mg to 0.25 mg between days 1 and 35, from 2.66 mg to 44.3 mg between days 49 and 105 and from 65.42 mg and 102.9 mg between days 147 and 252. The absolute numbers of adult Leydig cells per testis increased linearly from birth to 252 days. The average volume of adult Leydig cell on days 1, 7, 21 and 35 was not significantly different; a gradual and continued increase was observed thereafter, reaching a 3-fold increase at 196 and 252 days. Serum testosterone concentrations were not significantly different at day 1 compared days 7, 21, 35. Significant increases were observed at days 49 and 70. Values at days 70 and 105 and days 147, 196, and 252 were not significantly different. LH-stimulated testosterone production per testis in vitro was significantly different at day 1 compared days 7, 21, 35. Significant increases were observed at days 49 and 70. Hormonal values at days 105, 147, 196, and 252 were not significantly different. These data suggested Leydig cell developmental phase can be classified: a neonatal phase (1-7 days), a prepubertal phase (14-49 days) and an adult phase (70-252 days). Immature and mature adult Leydig cells, initially detected at days 7 and 49, respectively, and mature adult Leydig cells were abundant Leydig cell type according to the number and absolute volume per testis form day 49 onwards.

• Environmental Analysis Health and Toxicology
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• 제18권2호
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• pp.89-94
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• 2003

본 연구는 환경 호르몬으로. 분류된 67종 중의 하나인, 선저 도료나 어망, 어구 및 방오페인트 재료로 사용되어지고 유기주석화합물(tributyltin)을 사용하여 설치류의 웅성생식세포에서 세포자연사를 일으키는 작용기작을 조사하였다 먼저 흰쥐의 레이딕 세포주인 R2C에 유기주석화합물을 농도별(1∼500 nM)로 처리한 후 DNA fragment현상을 전기영동법을 통하여 조사하였다. 그 결과 유기주석화합물을 처리한 군들에서 대조군에 비하여 세포자연사현상이 농도 의존적으로 증가하였다. 유기주석화합물이 세포 내 칼슘이온(Ca$^2$$^{+}$)및 유해 산소종(reactive oxygen species)에 미치는 영향을 조사해본 결과 유기주석화합물 처리시 세포 내 칼슘이온 및 유해 산소종이 시간에 의존적으로 크게 증가하였다. 또한 칼슘 킬레이터인 BAPTA를 전 처리한 경우 유기주석화합물에 의해 유도된 칼슘이온 및 유해 산소종이 대조군에 비해 유의성 있게 감소하였다. 이러한 세포자연사 과정이 미토콘드리아의 cytochromec방출에 의한 과정인지를 화인하기 위해 세포질 내 cytochrome c양을 western blot법을 사용하여 확인해 본 결과 유기주석화합물처리 시간 및 농도에 따라 증가하며, 이 또한 BAPTA를 전처리 한 경우 대조군에 비하여 유의성 있게 감소하였다. 또한 유기주석화합물이 세포자연사 유발 시 caspase-3 효소 활성과의 관계를 확인하기 위해 ELISA법을 사용하여 확인해 본 결과 유기주석화합물 처리 농도에 의존적으로 증가하였으며, caspase-3효소 억제자로 잘 알려진 Z-DEVD FMK을 전 처리한 경우 유기주석화합물을 처리한 군에 비해 세포자연사율이 크게 감소하였다. 이러한 결과들을 종합해 볼 때 유기주석화합물은 세포 내 칼슘이온의 증가를 일으키고, 그로 인하여 세포질 내 유해산소종 및 cytochrome c의 양이 증가함으로써 세포자연사 다음 단계인 caspase효소 활성의 증가를 통하여 흰쥐의 레이딕 세포주인 R2C의 세포자연사를 일으킬 것이라 추론할 수 있다.