• 한국동물위생학회지
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• 제39권3호
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• pp.141-149
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• 2016

Changes in the Leydig cell from pre-puberty to adulthood were studied in Korean native cattle. Eight groups of male cattle aged 14, 17, 20, 25, 30, 35, 40 and 104 weeks (n=7 cattle per group) after birth were used. The purpose of this study was to obtain quantitative information on the Leydig cell of the Korean native cattle during postnatal development. Testes of cattle were fixed by perfusion using a fixative containing 2.5% glutaraldehyde in cacodylate buffer, processed and embedded in Epon-araldite. Using $1{\mu}m$ section stained with methylene blue-azure II, qualitative and quantitative (stereological) morphological studies were performed. The average diameter of seminiferous tubules gradually increased with age from 14 ($75.56{\mu}m$) to 104 weeks ($298.9{\mu}m$). The volume density of the seminiferous tubules increased with age from 54.2% at week 14 to 76.9% at week 104. The volume density of the interstitium represents 45.52% at week 14. This proportion progressively diminishes during development to reach a value of 23.14% at week 104. The volume density of Leydig cells decreased almost linearly from 14 (20.71%) to 104 weeks (5.28%). The absolute volume of Leydig cells per testis increased significantly from 14 to 104 weeks. The number of Leydig per testis have almost linearly increased from 14 to 104 weeks. The average volume of a Leydig cell reached maximum size by 104 weeks ($2553{\mu}m^3$). These data suggested development of Leydig cell can be classified as the fetal and immature adult Leydig cells (14~35 weeks), and the adult Leydig cells (40~104 weeks).

• 대한수의학회지
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• 제15권2호
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• pp.241-250
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• 1975

The light and electron microscopic observations were carried out in order to know the morphological changes of the testicular Leydig cells in the mouse injected with testosterone propionate for a long period. The results obtained were as follows: With the light microscopic study, atrophy of the Leydig cells and larger sudanophilic lipid granules in the experimental group than normal were observed. 2. By the electron microscopic finding, the small spherical or oval mitochondria, large lipid droplets, a decrease in number of smooth endoplasmic reticutum and distended saccular or vacuolar smooth endoplasmic reticulum were observed in the experimental group. Membranous whorls with droplet increased in number and size in the experimental group.

• 대한수의학회지
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• 제43권4호
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• pp.541-549
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• 2003

The present study investigated the effects of aging on Leydig cells of Sprague Dawley rats. Rats of 3, 6, 12 and 18 months of age were used. Testes of rat were fixed by whole body perfusion using a fixative containing 2.5% glutaraldehyde in cacodylate buffer, processed and embedded in epon-araldite. Using $1{\mu}m$ sections stained with methylene blue, qualitative and quantitative morphological studies were performed. Testis incubations were used to determine luteinizing hormone (LH; 100 ng/ml) stimulated testosterone secretory capacity per testis in vitro. Testosterone levels in the incubation medium, and testosterone and luteinizing hormone levels in serum of these four groups of rats were determined by radioimmunoassay. Morphological studies revealed that Leydig cells were more abundant in the testis interstitium at 6, 12 and 18 months when compared with 3 months. The volumes of Leydig cells per testis was significantly higher, at 6, 12 and 18 months of age than those at 3 months. The number of Leydig cells per testis was doubled at 6, 12 and 18 months of age compared with 3 months. The average volume of a Leydig cell was not significantly different between 3 and 6 months of age, however, at 12 and 18 months a significantly lower value was observed. LH-stimulated testosterone production per testis in vitro was reduced by 45% at 6 months of age compared with 3 months; a further significant reduction was observed at 12 and 18 months. Serum testosterone and LH levels were not significantly different between 3 and 6 months of age but at 12 and 18 months a significantly lower value was observed in both groups for these hormones. These results showed that signs of aging are apparent in Leydig cells of Sprague Dawley rats at 12 months of age.

• 한국가축번식학회지
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• 제25권2호
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• pp.125-130
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• 2001

본 연구의 목적은 옻나무 유래 F가 성숙 수컷 흰쥐의 생식 기능에 직접 미치는 영향을 알아보고자, 횐쥐 Leydig 세포를 분리, 회수하여 체외배양에서 F 단독 혹은 LH와의 공배양하여 배양액의 testosterone 농도를 조사하였다. 1. Leydig 세포를 36시간까지 체외 배양하여 testosterone의 농도를 조사한 결과, 6시간 배양구에 비해 24시간 배양구가 가장 높은 농도(P＜0.05)를 나타내었으며 36시간 배양에는 감소되었다. 2. F를 단독 첨가하여 12시간 배양한 실험에서 F 80ng 첨가구에서 유의적으로(P＜0.05) 높은 testosterone 분비를 보였다. 3. LH 10ng 및 100ng 첨가구의 시간별 testosterone 분비의 변화로는, LH 10ng 첨가구에서는 6∼12시간 이후, LH 100ng 첨가구에서는 3∼6시간 사이에서 증가를 보였으며, 6시간에는 두 처리구 모두 유의차를 보였다. 4. LH 10ng 첨가 실험에서는 LH 10ng+F 40ng에서 12시간 배양 시, 유의적으로 높은 testosterone 분비를 확인하였다. 5. LH 100ng과 F의 공배양실험에서 3시간 배양한 결과, F20ng 및 F40ng처리구가 대조구에 비해 유의적으로(P＜0.05) 높은 testosterone의 분비를 보였다. 6. Leydig 세포에 LH+IGF-I 첨가효과를 비교 검토한 결과, IGF-I 50ng과 100ng 첨가구에서는 대조구에 비해 높게 나타났으나, LH 100ng 단독처리와 유의차는 없었다. 이상의 결과로, 옻나무 유래 Flavonoid는 횐쥐 정소 Leydig 세포의 testosterone 분비를 촉진하는 작용을 하는 것으로 사료되며, 특히 LH+F구에서 testosterone 분비를 더욱 향상시킴으로써 옻나무 유래 F는 포유동물의 생식기능에 중요하게 작용하는 것으로 사료된다.> 이상의 난소당 난자회수율 (22.6개/63.8%)은 비발정기의 것보다 유의적으로 높았다 (P ＜ 0.05). 발정기의 난소에서 110 $\mu\textrm{m}$ 이상의 난자의 MI까지의 핵발달율 (24.3%)은 110 Um이하의 것 또는 비발정기의 110 $\mu\textrm{m}$ 이상 및 이하의 난자의 것보다 유의적으로 높았다 (2.5, 6.8 및 0.0%; P ＜0.05). 발정기의 110 $\mu\textrm{m}$ 이상 난자의 AT 또는 MII까지의 핵 발달율은 다른 처리군보다 높게 발달하였다. TCM199에서 MI까지의 핵발달율 (21.8%)은 $\alpha$-MEM (10.0%)보다 유의적으로 높았다 (P＜ 0.05). 그러나 AT까지의 핵 발달율은 TCM199 (7.3%)과 (-MEM (1.1%) 간에는 유의적 차이가 있었으나 (P＜0.05), MII까지는 TCM199 (0.9%)과 (-MEM (1.1%)에는 유의차가 없었다. 본 연구결과는 110 $\mu\textrm{m}$ 이상의 난자는 발정기의 난소로부터 더 많은 난자를 회수할 수 있었고, 110 $\mu\textrm{m}$ 이상의 난자들이 MI, AT까지의 핵발달 능력이 높았다. 또한 체외성숙배양액 시 TCM199이 $\alpha$-MEM보다 Mi과AI까지 높은 발달율을 보였다.U/$m\ell$ FSH+10 $m\ell$U/$m\ell$ LH 의 첨가가 생쥐 preantral follicles의 체외배양을 위한 적정조건임을 제시하고 있다., 30, 40 $\mu\textrm{g}$/kg을 각각 2일간 투여했을 때 신장, 비장 및 간의 중량은 정상대조군과

• 한국환경보건학회지
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• 제21권1호
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• pp.68-73
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• 1995

화합물질의 개발사용 및 환경오염 물질의 증가로 인하여 남성수태능력에 영향을 미치는 물질이 증가하고 있는 형편이다. 따라서 신속하고 경제적으로 남성 수태능력 영향물질을 평가하기 위하여 랫드의 고환세포를 이용한 남성 수태능력시험법을 개발하고자 본 시험을 실시하였다. 랫드의 고환 세포로부터 주요한 기능을 가진 Sertoli cell과 Leyding cell을 효소처리, 필터 그리고 percoll gradient과정을 거쳐 각각 분리하였다. 분리된 두 종류의 세포는 32$\circ$C에서 초기 배양한 후 37$\circ$C에서 계속 배양하였다. 본 배양조건에서 두 종류 세포는 양호한 발육을 보였으며 약 2주간의 배양이 가능하였다. Sertoli cell은 3주령의 랫드에서 분리가 잘되었고 Leydig cell은 85.7%의 생존율을 보였다. 이상의 결과와 같이 랫드의 고환세포중 Sertoli cell과 Leyding cell을 분리 배양하였으며, 앞으로 독성물질의 영향을 평가하기 위한 생화학적 및 구조적인 index 설정을 위한 연구가 필요하다고 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제35권3호
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• pp.181-191
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• 2008

목 적: 본 연구에서는 에스트로겐 수용체의 agonist로 작용할 수 있는 내분비계 교란물질인 bisphenol A (BPA)가 정소 내 세포들의 유전자 발현 및 세포자멸사에 미치는 영향을 관찰하였다. 연구방법: 그룹 I의 7주령 수컷 생쥐들에는 sesame oil에 녹인 BPA를 1 mg/kg, 10 mg/kg, 100 mg/kg를 1회 복강주사하여 급성 영향을 조사하였고, 그룹 II의 생쥐들에는 BPA 10 ${\mu}g/kg$, 1 mg/kg, 100 mg/kg를 하루에 1회씩 14일간 피하주사하여 장기적 효과를 보았다. 생쥐의 정소를 채취하여 정소의 다양한 표지유전자들의 발현을 RT-PCR로 조사하였고, 조직학적 관찰, 형광면역염색법과 TUNEL 염색을 수행하였다. 결 과: RT-PCR 결과, 정소의 표지유전자 중 특이적으로 Leydig cell의 표지유전자인 LHR가 고농도의 BPA 처리군에서 감소되어 있었다. 정원세포 표지유전자인 ERM은 장기간 BPA를 주사 받은 생쥐들의 정소에서 감소되었다. 1회의 BPA를 주사 받은 그룹에서는 조직학적 영향은 없는 것으로 보였다. 또한 세포자멸사의 표지인 Bax가 Leydig cell이 존재하는 정소의 interstitial area에서 BPA에 의해 증가된 것을 관찰하였으며 이는 TUNEL 염색이 positive하게 나타난 부분과 일치하였다. 결 론: 본 연구는 BPA가 정소에서 주로 Leydig cell에 영향을 주며 이는 Leydig cell이 에스트로겐 수용체와 에스트로겐 합성효소를 발현하는 내분비 세포라는 사실에 부합되는 것으로, 차후 그 분자적 기작을 밝히는 연구로 이어져야 할 것이다.

• 대한수의학회지
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• 제43권4호
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• pp.531-539
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• 2003

Changes in the rat testis interstitium from birth to adulthood were studied using Sprague Dawley rats of 1, 7, 14, 21, 28, 40, 60, and 90 days of age to investigate Leydig cell differentiation. In addition, serum testosterone concentrations and luteinizing hormone stimulated (LH; 100 ng/ml) testosterone secretory capacity per testis in vitro were determined via radioimmunoassay. Fetal Leydig cells were present in rat testes from birth to 21 days, and they were only steroidogenic cells in the testis at days 1 and 7. The average volume of a fetal Leydig cell and the absolute volume of fetal Leydig cell per testis were similar at all ages of experimental groups except at day 21 when lower values were observed for both parameters. The number of fetal Leydig cells per testis remained constant from birth through 21 days. Adult Leydig cells were recognized at day 14 and their absolute volume and number per testis increased linearly from 14 to 90 days. The average volume of an adult Leydig cell increased significantly with age and reached maximum size by 60 days of age where the volume was nearly three times bigger than that of at day 14. Total testosterone production per testis in vitro and serum testosterone concentrations were not significantly different at day 1 compared with 7, 14, and 21 days of age. Significant increases were observed at days 40 and 60. Values at days 60 and 90 were not significantly different.

• Applied Microscopy
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• 제29권3호
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• pp.353-362
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• 1999

플라스틱 제품의 가소제로 널리 사용되며, 내분비 교란물질로도 알려져 있는 di-(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP)를 사춘기 이전 흰쥐에 1주일 동안 구강 투여 (1g/kg, 3g/kg, 5g/kg)한 후 분화중인 정소의 미세구조에 미치는 영향을 조사하였다. DEHP 처리군에서는 대조군에 비하여 세정관 직경이 매우 작았으며, Leydig 세포, Sertoli 세포 및 분화중인 생식세포들의 증식이 억제되었다. 실험군에서 세정관 사이에 존재하여 테스토스테론을 분비하는 Leydig세포는 이질염색질이 증가하고, 세포질내에서 활면소포체의 발달이 미흡하였으며, 리소솜과 지방적이 증가하는 특징을 보였다. 세정관 내에서 Sertoli 세포는 세포질의 크기가 감소하고, 핵막이 불규칙해지거나, 염색질이 응축되어 있는 모습이 나타나며, 세포질내에서 리소솜과 액포들이 증가하였다. 실험군 흰쥐 정소내에서 분화중인 생식세포들의 핵은 이질염색질이 증가하거나, 응축되어 있고, 인의 분리현상이 관찰되기도 하며, 심한 경우 핵내에 공포가 형성되어 있거나, 괴사과정에 있는 생식세포들도 관찰되었다. 이와 같은 정소 미세 구조의 변화는 DEHP 투여량의 농도에 의존성을 보이며, 이 화합물은 Leydig 세포의 테스토스테론 합성 기능을 방해하고, 이어서 Sertoli 세포의 구조와 기능이 손상되어 정자형성과정 중인 생식세포들의 증식과 분화가 억제되는 것으로 사료된다.

• 대한수의학회지
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• 제40권2호
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• pp.229-236
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• 2000

The synthesis of steroid hormone starts from cholesterol. Steroidogenic acute regulatory protein (StAR) acutely transfers cholesterol from the outer mitochondrial membrane to the inner in the early step of steroidogenesis. Many kinds of steroid hormone are mainly synthesized in adrenal grand, ovary, and testis. Among the steroid hormone, testosterone is synthesized in Leydig cells of the testis, the production of testosterone significantly increases in adult testis after puberty onset. Therefore, we think that the expression of StAR mRNA in testis will change according to the testicular development. The aim of this study is to determine the distribution of StAR mRNA in immature and adult rat testes and to confirm the functions of StAR in these testes. Thus, in situ hybridization was used in rat testes of the 2, 4, and 10 weeks of age. StAR mRNA was expressed in Leydig cells. Positive signals of StAR mRNA were weakly detected in Leydig cells of the 2 weeks of age. But, StAR mRNA was strongly expressed in Leydig cells of the 4 and 10 weeks of age, where steroidogenesis actively occur. In our results, the pattern of StAR mRNA expression was similar to the pattern of testosterone production in immature and adult rat testes. In conclusion, we can suggest that StAR acts as an important factor to regulate the synthesis of testosterone in Leydig cells of the rat testis.

• 한국환경성돌연변이발암원학회지
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• 제26권2호
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• pp.53-58
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• 2006

Normally, environmental toxicants are classified as endocrine disruptors if they interfere with regulation of cellular function by endogeneous steroids through inhibition of receptor binding and/or transcriptional activation. So, many studies have been performed about agonist/antagonist of hormone receptor to study mechanisms of endocrine disruptors. If toxicants affect steroid biosynthesis and/or degradation and alter hormone homeostasis, these also are classified as endocrine disruptors. But there are not many studies of the mechanisms of endocrine disruptors on the basis of alteration of steroid biosynthesis and/or degradation. Isolation and culture of Leydig cells from testis is one of methods for the steroidogenesis screening assays to evaluate a substance for altering steroidogenesis. Leydig cells were harvested using the method described by Klinefelter with modifications. Leydig cells were purified by perfusion of testis and incubation ($34^{\circ}C$, 80cycles/minute, 20 minutes) with collagenase (0.25 mg/kg), centrifugal elutriation, percoll gradient centrifugation and BSA multidensity gradient centrifugation. To confirm if this method is one of appropriate tools to evaluate a substance for altering steroidogenesis, ketoconazole, positive control was administered to purified Leydig cells. Ketoconazole ($10^{-8}M$ and above) significantly reduced testosterone production in purified Leydig cells. From above results, we suggest that this method for steroidogenesis screening assay appears to be a appropriate tool to detect suspected compounds for altering steroidogenesis.