KIM, MYUNG HEE;SUN TAEK SHIM;YOUN SOON KIM;KYU HANG KYUNG
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권3호
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pp.497-502
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2002
Thirty-nine strains of Leuconostocs found to be tolerant to $10\%$ or more garlic were selected for further identification, by comparing their whole-cell protein pattern, 16S rRNA gene (first 530 bases) sequence, cellular fatty acid composition, and carbon source metabolism. Two isolates were Identified as Leuconostoc mesenteroides and 32 others as Leuconostoc citreum. Five other strains belonging to a cluster could not be allocated to the existing species. 16S rRNA gene sequence and cellular fatty acid composition of the unidentified bacteria exhibited close similarity with Leuconostoc argentinum. The unidentified isolates were not allocated to L. argentinum, because they formed polysaccharide from sucrose, while L. argentinum strains do not. Leuconostocs tolerant to high concentration of garlic were found predominantly on garlic surface, an extreme environment which is unfit for most of other microorganisms.
Leuconostocs는 김치를 비롯한 침채류의 발효에 중요한 세균이나 phenylethyl alcohol이나 vancomycin을 첨가하는 기존의 분리방법은 leuconostocs만을 순수분리할 수 없었을 뿐 아니라 가격이 비싼 것이 단점이었다. 여러가지 식품시료로부터 leuconostocs균주를 저렴하고도 효과적으로 분리할 수 있는 선택배지를 개발하기 위하여 모두 17균주의 leuconostocs와 lactobacilli에 대한 항생제 내성을 소사한 결과 leuconostocs의 novobiocin에 대한 MIC가 lactovacoilli에 비해 5배 이상 높은 것으로 나타났다. 이러한 결과를 기초로 하여 novobiocin이 첨가된 leuconotocs의 선택배지를 조제한 바 그 조성은 다음과 같다. 1% Tryptone (Dofco), 0.1% Yeast Extract (Difco), 2% sucrose, 0.1% Beef Extract (BBL), 0.5% sodium acetate, 0.2% ammonium sulfatc. 0.01% magnesium sulfate, 0.2% dipotassium phosphate, 0.05% sorbic acid, 75 ppm sodium azide (Sigma), 0.1% (vol/vol) Tween 80, 30 ${\mu}g/ml$ Vancomycin (Sigma), $5{\mu}g/ml$ Novobiocin (Sigma), $0.5{\mu}g/ml$ cysteine HCI, 1.5% Agar (Difco). 이 leuconostocs의 선택배지를 이용하여 여러가지 종류의 김치, 원유, cheese에서 총 86균주의 미생들을 분리하였다. 분석된 균들은 몇 가지 biochemical test를 통하여 동정한 결과 모두 Leuconostocs 속으로 확인되었으나 Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris와 Leuconostoc lactis는 검출할 수 없었다. 특히 이 배지는 분리 효율성이 MRS 배지에 비해 상대적으로 낮으므로 계수용 배지보다는 순수분리용 선택배비로의 이용이 적합하다 판단되었다.
분자생물학적 방법에 의한 김치유산균 연구의 진행으로 Leuconostoc, Lactobacillus, Weissella 속 유산균의 김치발효 과정 중 생육에 대한 새로운 결과들이 도출되었지만, Pediococcus속의 생육에 대한 새로운 결과는 거의 보고되지 않았다. 본 연구에서는 김치에 존재하는 Pediococcus 속 유산균의 존재에 대한 재조명을 위하여 ampicillin (A)의 첨가로 pediococci의 선발 유효성이 향상된 것으로 보고된 pediococci selective medium(PSM)+A를 이용하여 pediococci 선택적 검출의 유효성을 검토한 결과, 기존에 보고된 결과와는 달리 Pediococcus pentosaceus 외에도 leuconostocs, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Oenococcus oeni, Streptococcus thermophilus에 대한 생육저해가 발생하지 않았다. PSM+A 한천배지를 이용하여 김치에 생육하는 미생물을 검출한 경우, leuconostocs, P. pentosaceus, Weissella koreensis, Lb. curvatus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus sakei가 생육하여 김치와 같은 발효침채류의 발효에 관여하는 pediococci의 선택적 선발에는 PSM+A가 유효하지 않은 것으로 확인되었다.
본 연구에서는 프로바이오틱스로 사용하는 유용 미생물과 식용으로 안전하게 사용 가능한 미생물 자원을 이용하여 배당체의 전환 연구를 실시하여 전환체의 새로운 생리활성 작용에 대하여 연구하였다. 연구에 사용한 주요 소재로는 인삼의 사포닌 배당체, 길경의 platycodin 배당체, 호로파의 사포닌 배당체, 칡과 두유의 이소플라본 배당체 등이었다. 사용 균주로는 bifidobacteria, lactobacilli, leuconostocs, yeasts, aspergilli 등이었다. 유산균 중에는 Bifidobacterium sp. Int-57의 전환능이 우수하였고 식용 곰팡이 중에는A. niger의 전환능이 우수하였다. 다양한 미생물 또는 효소를 이용한 전환체에 대하여 아질산 소거능, 항산화능, a-glucosidase와 a-amylase 저해능 등을 조사하였을 때 일반적으로 전환 후의 활성이 중가하였다. 길경 사포닌은 전환 후에 세포 독성이 줄어들었으며 관능성이 유의적으로 개선되었다. 결론적으로, 프로바이오틱스와 식용 미생물을 이용하여 천연물 중에 존재하는 배당체의 생리활성 및 관능성을 증가시킬 수 있어 새로운 기능성 식품의 개발에 활용할 수 있을 것이다.
Unknown bacterium isolated from garlic was characterized using phenotypic methods, phylogenetic analysis, DNA-DNA hybridization, and cultural methods. The strain was identified as typical leuconostoc; Gram-positive, non-sporeforming, heterofermentative, catalase-negative and spherical. Although its 16S rRNA gene sequence showed high homology to Leuconostoc argentinum DSM $8581^T$(99.8%), DNA-DNA hybridization experiments indicated it represents novel genomic species in the genus Leuconostoc. The garlic-specific leuconostoc was more resistant to antimicrobial activity of garlic compared to other common laboratory lactic acid bacteria, and was even stimulated by low concentrations (1-2%) of garlic extract supplemented in trypticase soy broth. Growth stimulation was concentration-dependent when tested with residual aqueous layer after solvent extraction of fresh whole garlic extract.
포도당을 포함한 생장 배지속에 L-사과산을 첨가하면 Leuconostoc oenos균들의 생장률을 크게 촉진 시켰다. L-사과산은 동시에 C-젖산탈수소 효소(D-LDH)의 합성과 활성도를 촉진시켜 포도당에서 D-젖산의 생산을 빠르게 하였다. L-사과산 존재 하에서 이렇게 빨라진 포도당의 이용이 leuconostoc 균들의 생장률을 촉진시키는 것 같다.
피부의 피부 노화, 질환, 훼손은 내부적인 요인으로서 활성산소라는 사실이 밝혀진 이래로 합성 항산화제를 대체할 수 있는 천연물 항산화제에 대하여 많은 연구가 진행 중이다. 이들 중에 지실은 오래전부터 만성적인 염증, 알리지 완화, 황산화 기능을 하는 것으로 알려져 왔다. 미생물을 이용한 발효는 조직에 결합 되어 있는 생리활성 물질의 유리로 생체이용율(bioavailability) 훨씬 높아지는 것으로 알려 졌다. 따라서 본 연구는 지실 열수 추출물을 기질로 GRAS 알려진 균주를 이용하여 발효를 수행하고 발효가 항산화 능력에 미치는 영향에 대하여 알아보고자하였다. 지실 열수 추출물은 항산화 기능을 가지고 있는 hesperidine, naringine, luteoilin, imperatorin등의 플라보노이드 및 furocoumarin등이 동정이 되었고 함유량은 hesperidine naringine, imperatorin, luteolin 순이었다. 열수 추출물을 기질로 하여 분리된 Leuconostocs sp. strain JYK로 발효를 수행한 결과 지실 열수 추출물을 사용한 경우에는 $71.2{\pm}4.58(mg/g)$의 총 페놀 함량이 있는 것으로 측정이 되었고 반면에 발효 추출물에는 $89.2{\pm}13.47(mg/g)$으로 약 25.3% 증가된 것으로 나타났다. 총 플라보노이드 화합물은 지실 열수 추출물에는 $25.1{\pm}4.12(mg/g)$의 총 플라보노이드 함량이 있는 것으로 측정이 되었고 반면에 발효 추출물에는 $31.0{\pm}4.06(mg/g)$으로 약 23.5% 증가된 것으로 나타났다. DPPH 소거능은 지실 열수 추출물에는 70.9% 반면에 발효 추출물은 86.2% 측정이 되었다. 총 항산화 능력은 18.7% 발효추출은 26.6%로 발효를 통하여 약 40% 증가하였다. 따라서 미생물 발효를 통하여 천연물에 포함이 되어있는 기능성 물질에 대한 생체 이용률을 높인다면 산화적 스트레스에 의한 피부 노화 완화 및 개선 작용으로 기능성 화장품 및 식품의 소재로 활용 가치를 높여 줄 것으로 기대를 한다.
미생물 군집의 차이를 이용한 한국산 및 중국산 김치의 판별 가능성을 평가하기 위해 pH 5 이상의 발효초기 김치에 존재하는 bacteria의 다양성을 검토하였다. marine medium, nutrient medium, succinate minimal medium(SMM), leuconostocs selective medium(LUSM)의 한천배지를 이용하여 한국산 26종, 중국산 22종의 김치시료로부터 각각 45 속의 1017 균주, 54 속의 842 균주가 분리동정되었다. 한국산 김치에서는 Bacillus, Weissella, Leuconostoc, Pseudomonas, Lactobacillus 속 순으로, 중국산 김치에서는 Bacillus, Weissella, Lactobacillus, Pseudomonas, Serratia, Enterobacter 속의 순으로 우점하는 것으로 나타났다. 유산균의 경우, LUSM의 이용으로 한국산, 중국산 모두에서 Weissella 속이 편중되어 검출되었지만, 한국산은 Leuconostoc속이, 중국산은 Lactobacillus 속이 Weissella 속 다음으로 우점하는 것으로 나타났다. Weissella confusa는 한국산 김치에서 특이적으로 검출되었고, W. soli, Serratia proteamculans는 중국산 김치에서 특이적으로 검출되어 향후 김치의 원산지 판별을 위한 지표미생물로 사용될 가능성을 가지고 있다.
Kim, Bong-Joon;Lee, Hye-Ja;Park, Sae-Young;Kim, Jeong-ho;Han, Hong-Ui
Journal of Microbiology
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제38권3호
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pp.132-136
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2000
We recently identified Leuconostoc gelidum, a typical psychrophile, as a microbial component from kimchi that has been laboratory-prepared and fermented at 20$^{\circ}C$ . However, it has been shown that the growth of leuconostocs in food products is highly influenced by fermenting temperature. To determine the distribution of L. gelidum species in kimchi fermented at a lower temperature , 8$^{\circ}C$, we characterized a total of 64 dextran-forming strains isolated from kimchi using a polyphsic method including 16S rDNA sequencing and DNA-DNA gybridization. We found that 80% of the isolated were L. gelidum, which has been found mainly at chill-stored meat products. We also found that L. gelidum could be a dominant Leuconostoc species in so-called KimJang Kimchi, which is traditionally prepared at lat fall to be preserved during winter in Korea. These results suggest that L. gelidum can be a predominant species in kimchi especially when fermented at low temperature.
The D-form of lactic acid is frequently detected in fermented foods, and an excessive dietary intake of D-lactic acid may induce metabolic stress in both infants and patients. This work was carried out to determine the prevailing microorganisms relevant to the accumulation of D-lactic acid in kimchi. Leuconostoc (Leuc.) mesenteroides and Leuc. citreum primarily synthesized D-lactate with a small quantity of L-form. Leuc. gelidum and Leuc. inhae evidenced patterns similar to this. Lactobacillus (Lb.) plantarum and Lb. brevis were shown to convert glucose into a balanced mixture of D-/L-lactic acid, whereas Lb. casei principally synthesized L-lactic acid and a very small quantity of D-lactic acid. When kimchi was incubated at 8 or $22^{\circ}C$, D-lactic acid was over-produced than L-form. Leuconostoc was determined as the primary producer between the initial to mid-phase of fermentation and Lb. plantarum or Lb. brevis seemed to boost D-lactic acid content during later stage of acid accumulation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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