Purpose: Extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-producing bacteria-induced urinary tract infections are increasing and require more potent antibiotics such as carbapenems. We evaluated the clinical significance of extended-spectrum ${\beta}$-lactamase -urinary tract infection in children younger than 5 years to select proper antibiotics and determine prognostic factors. Differences were compared between age groups. Methods: We retrospectively studied 288 patients with their first febrile urinary tract infection when they were younger than 5 years. Patients were divided into extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-positive and extended-spectrum ${\beta}$-lactamasenegative urinary tract infection groups. Clinical characteristics and outcomes were compared between the groups; an infant group was separately analyzed (onset age younger than 3 months). Results: Extended-spectrum ${\beta}$-lactamase urinary tract infection occurred in 11 % patients who had more frequent previous hospitalization (P=0.02) and higher recurrence rate (P=0.045). During the antimicrobial susceptibility test, the extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-positive urinary tract infection group showed resistance to third-generation cephalosporins; however, 98% patients responded clinically. In the infant group, extended-spectrum ${\beta}$-lactamase-positive urinary tract infection occurred in 13% patients and was associated with a longer pre-onset hospitalization history (P=0.002), higher C-reactive protein level (P=0.04), and higher recurrence rate (P=0.02) than that in the older group. Conclusion: Extended-spectrum ${\beta}$-lactamase urinary tract infection requires more attention because of its higher recurrence rate. The antimicrobial susceptibility test demonstrated resistance to third-generation cephalosporins, but they can be used as first-line empirical antibiotics because of their high clinical response rate. Aminoglycosides can be second-line antibiotics before starting carbapenems when third-generation cephalosporins do not show bactericidal effects for extended-spectrum ${\beta}$-lactamase urinary tract infection.
The emergence of extended spectrum ${\beta}$-lactamase producing bacteria is causing very serious problems in Korea. Although there have been many reports about these bacteria Isolated from patients and clinical specimens, there is no report of extended spectrum ${\beta}$-lactamase producing organisms isolated from natural environment in Korea. This study was conducted to investigate the biological characteristics and extended spectrum ${\beta}$-lactamase types of eighteen strains of extended spectrum ${\beta}$-lactamase producing Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli isolated from a slaughterhouse in Pusan in Korea during 2002 to 2004. Extended spectrum ${\beta}$-lactamases were identified by double-disk synergy test, conjugation, isoelectric focusing values and gene sequencing. Eight strains of Klebsiella pneumoniae and two strains of Eschericha coli were isolated kom pigs and transferred extended spectrum ${\beta}$-lactamase genes to recipient Escherichia coli J53 (sodium azide resistant and ceftazidime senstive) strain by conjugation. The conjugants of extended spectrum ${\beta}$-lactamase genes were alignments and translated to amino acids by BCM and NCBI blast. Eight conjugants of Klebsiella pneumonae were typed TEM-52, and two strains of Escherichia coli, SHV-12, but CMY-1 type were not detected in this study.
A strain SMF14 producing an extracellular $\beta$-lactamase was isolated from soil and identified to be a strain of Streptomyces aureofaciens. $\beta$-Lactamase was purified from the cell free culture broth through batchwise hydroxyapatite adsorption, anion exchange chromatography on DEAE Sephadex A-50, gel filtration on Sephadex G-75, and adsorption chromatography on hydroxyapatite. The molecular mass was estimated to be about 43 kDa by SDS-PAGE. The $\beta$-lactamase had substrate specificity to penicillins and it was inhibited by clavulanic acid, being classified to the group 2a of penicillinase.. The optimal reaction pH and temperature were pH 6.0~7.5 and $50^{\circ}C$. The $K_m, and V_{max}$ values of $\beta$-lactamase for penicillin G were calculated to be 1.72 mM and 5.4$\times$$10^5 \mu M \cdot min^{-1}$, respectively.
In this study, the ${\beta}$-lactamase (VPA0477) gene was used as a new target for the PCR-based detection of Vibrio parahaemolyticus. Primers specific for the ${\beta}$-lactamase (VPA0477) gene of V. parahaemolyticus, were designed and incorporated into a PCR-based assay. The assay was able to specifically detect all of the 191 V. parahaemolyticus strains tested, but did not result in amplification of 39 other Vibrio spp. and non-Vibrio spp. strains tested. The detection limit of the assay was 10 CFU of V. parahaemolyticus RIMD2210633 from pure culture broth. The ${\beta}$-lactamase (VPA0477) gene-based assay developed in this study was sensitive and specific, and has great potential for the accurate detection and identification of V. parahaemolyticus in seawater or seafood samples.
One hundred and twenty seven strains of Gram-negative rods (72 E. coli, 45 Klebsieila pneumoniae, 8 Enterobacter spp. and 2 Pseudomonas aeruginosa) isolated from bovine mastitis were examined for resistance to ampicilin, carbenicillin and cefazolin, ${\beta}$-lactamase activity and transferable ${\beta}$-lactamase plasmids. Stains resistant to ampicillin were 13.9% in E. coli, 93.3% in Klebsiella pneumoniae, 87.5% in Enterobacter. spp. and all in Pseudomonas aeruginosa, Resistance of E. coli, Klebsiella pneumoniae and Enterobacter spp. to ampicillin was due to the ${\beta}$-lactamases, but all Pseudomonas aeruginosa exhibited a high level of the non-enzymic resistance. Transferable plasmid-mediated ${\beta}$-lactamase synthesis was demonstrated in 61.9% of Klebsiella pneumoniae, 50% of E. coli and 42.9% of Enterobacter spp. The same ${\beta}$-lactamase plasmids specified different resistance levels to various ${\beta}$-lactam antibiotics in different recipients.
Cloning of the gene encoding extracellular .betha.-lactamase from Streptomyces sp. SMF13 in a plasmid pIJ702 and expression of the gene in Streptomyces invidans were carried out. Optimal conditions for the formation of protoplasts of S.lividans and the regeneration of the protoplasts were evaluated. Streptomyces sp. SMF-13 was selected as a donor strain of .betha.-lactamase gene and totla DNA of the strain was partially digested with Sau3A I. DNA fragments ranged from 4kb to 10 kb were ligated to pIJ702 AT Bgl II site and then the ligated DNAs were transformed to the protoplasts of S, livivans. The transformation efficiency was $2 *10^{3}$ .$\mu$g DNA for the ligated DNA mixture. One colony among a thousand colonies regenerated showed extracellular .betha.-lactamase and the size of the inserted DNA fragment was estimated to be 3.94 kb. The .betha.-lactamase activity in the culture broth of the recombinant strain was maximum at 3 days culture to be 1.0 unit/ml.
Identification of a soil microorganism strain X-8, producer of ${\beta}$-lactamase inhibitor, based on its morphological, physiological, biochemical and chemotaxonomical characteristics was performed. The strain X-8 was identified as Pseudomonas sp. The beta-lactamase inhibitor produced by this strain was highly achieved in fermentation medium contained glucose 0.5%, urea 0.25%, $K_2HPO_4{\cdot}3H_2O\;0.5%,\;MgSO_4{\cdot}7H_2O\;0.5%,\;FeSO_4{\cdot}7H_2O\;0.01%,\;CuSO_4,\;ZnSO_4,\;MnSO_4\;0.02%$. The beta-lactamase inhibitor was not extracted by organic solvent such as n-butanol and ethyl acetate but remained in aqueous layer. The n-butanol extract showed antimicrobial activity against M. smegmatis. The ${\beta}$-lactamase inhibitor was stable at pH 7.0~8.0 and 4$^{\circ}C$ for 24h. The ${\beta}$-lactamase inhibitor was bound on ion exchanger Diaion WA-30 and HP-20 and eluted with 2N-$NH_4OH$ and acetone, respectively.
Bacillus subtilis J105, high resistant bacteria against $\beta$-lactam antibiotics, become higher resistant through induction of $\beta$--lactamase in the presence of $\beta$--lactam antibiotics. When there is no antibiotics in medium, the production of resistance-inductive $\beta$--lactamase reached its plateau 15 hours later. But when there is ampicillin (500$\mu\textrm{g}$/$m\ell$) in medium, the production of enzyme reached its plateau 25 hours later since cultivating bacteria, whereas it is found that enzyme 2,900 units/$m\ell$ about 20 times as much as compared with not-presence of antibiotics was actived. In addition, as the result of MIC comparing applying ampicillin-treated and non-treated strain MIC of ampicillin-treated strain is about 2~27 times higher. It is considered that this strain induce $\beta$--lactamase production by ampicil-lin-treatment, then increasing it resistance. It is found that this resistant strain induce $\beta$--lactamase production against cephalosporin antibiotics as well as peni-cillin. As the result of examining the time of adding antibiotics for each phase of growth, it is concluded that logarith-mic phase is the most effective. As the aboves, it is suggested that this strain is a peculia strain that its resistance is induced high by various $\beta$--lactam antibiotics.
Ji, Gil Young;Song, Hyung Geun;Jo, Mi Young;Hong, Seung Bok;Shin, Kyeong Seob
Biomedical Science Letters
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v.22
no.2
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pp.29-36
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2016
Among the several agents causing carbapenem resistance of Acinetobacter baumannii, the most common cause is OXA-23 ${\beta}$-lactamase, which is known to hydrolyze carbapenem. To effectively control dissemination of carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii (CRAB), development of both rapid and easy-to-use detection methods are required. The aim of this study is to develop a novel immunochromatographic assay (ICA) for rapid detection of OXA-23 ${\beta}$-lactamase. Of the seven monoclonal antibodies (mAbs) screened by ELISA, four mAbs (4G6, 4H6, 6G4, 9A4) exhibited high reactivity. Of these four specific antibodies, the combination of 6G4/4G6 showed the greatest reactivity and this combination of mAbs (6G4/4G6 mAbs) was used to develop the OXA-23 ${\beta}$-lactamase ICA. Of 102 A. baumannii isolates tested, the OXA-23 ${\beta}$-lactamase ICA results were consistent with PCR analysis except one false positive and one false negative isolate. The overall sensitivity and specificity were 98.36% and 97.56%, respectively. In conclusion, to the best of our knowledge, we have developed the first specific antibody set to detect OXA-23 ${\beta}$-lactamase using an ICA kit. This novel ICA can be used as a reliable and easy-to-use immunological assay for detection of OXA-23 ${\beta}$-lactamase producing CRAB in clinical laboratories.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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