1. L-Tyrosine-${\alpha}$-ketoglutaric transaminase and p-hydroxyphenylpyruvic acid oxidase are distributed in Aspergillus oryzae. 2. L-Tyrosine oxidation in extracts of acetone powder, cell free extract and culture liquid of Aspergillus oryzae cultivated in the shaking culture are considerably accelerated by the addition of ${\alpha}$-ketoglutaric acid and then formation of glutamic acid was identified by chromatography method. 3. The roles of ${\alpha}$-ketoglutaric acid and pyridoxal phosphate have been shown to be an amino group acceptor in a transamination reaction. 4. Enzyme systems of an extracts of acetone powder and cell free extract also rapidly oxidized L-tyrosine and p-hydroxyphenlpyruvic acid to homogentisic acid. 5. The optimum pH for L-tyrosine-${\alpha}$-ketoglutaric acid transaminase was pH values of 6.0 and 6.5, and that for p-hydroxyphenylpyruvic acid oxidase was at pH values of 7.5.
To improve the productivity of peroxidase (POD) of cell line SP-47 derived from cell suspension cultures of sweet potato (Ipomoea batatas (L) Lam.cv White Star), we optimized culture conditions including the composition and concentration of plant growth regulators and carbon source, and the cell inoculum size. When one g (fr wt) of cells was inoculated into 50 mL TL medium supplemented with l mg/L 2,4-D and 30g/L sucrose in 300 mL Erlenmeyer flask at 25$^{\circ}C$ in the dark (100rpm), the POD activity per g cell dry wt was maximized to be about 6,800 units after 25 days of subculture, which was about 30 times higher than that of intact roots of horseradish plants grown in the greenhouse, but the cell growth was maximum after 15 days of subculture. The protein content per g cell dry wt maintained almost plateau and after 25 days of subculture decreased as culture Proceeded further whereas the POD specific activity (unit/mg protein) was about two times higher after subculture and continuously increased from 12 days to the end of cultures (40 days). The POD isozyme patterns showed almost the same regardless of cell growth stage, but some acidic isozymes were slightly increased after 25 days of subculture. These results indicate that POD activity in suspension cultures of sweet potato is closely associated with cell growth and stresses derived from cell culture renditions and medium depletion. Due to its high POD activity the SPL47cell line seems to be suitable for the mass production of POD.
Park, Sung-Baek;Park, Kee-Sang;Lee, Taek-Hoo;Chun, Sag-Sik;Song, Hai-Bum
Proceedings of the KSAR Conference
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2003.06a
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pp.66-66
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2003
The aim of this study was to investigate effect of different energy substrates on embryonic development of mouse embryos. Two cell embryos, recovered from ICR female mice (4 weeks old) at 44~52hrs after hCG injection (mated just after hCG injection), were cultured fur 72 hrs in the medium (MEM) supplemented with the three different energy substrates [glucose(G), pyruvate(P) and lactate(L)] and combinations (Control: 0 mM: group A: G 0.5; B: G 3.15; C: P 0.1; D: P 0.32; E: L 5.87; F: L 10.5; G: G0.5+P0.32+L10.5; H: G3.15+P0.1+L5.87; I: G0.5+P0.1+L5.87; J: G3.15+P0.32+L10.5). Blastocysts were stained differentially using PI and bisbenzimide. The 69.8% of the 2 cell embryos cultured in group F were developed the blastocysts. This was the highest (NS) than all other tested groups (44.2~62.8%). Blastocysts, cultured in the group E (60.4$\pm$26.9) and G (58.1$\pm$26.3), had significantly(p<0.05: group E vs. control, B, C, D; G vs. control, A, B, C, D) higher mean cell number compared with the other (42.6$\pm$25.8 ~ 55.2$\pm$31.3) and control (42.6$\pm$25.8) was at the basal level. The proportion of ICM (% ICM of total cells) in blastocysts cultured in group B (26.0$\pm$9.5%), C (29.6$\pm$22.8%) and J (26.0$\pm$11.8%) were significantly higher (p<0.05: control vs. group B, C, J: A vs. C, J; C vs. D, E, I) than those of other tested groups (15.0$\pm$10.6 ~ 23.8$\pm$ 12.9%) and control (15.0$\pm$10.6%) was at the basal level. These results showed that energy substrates supported the development of mouse 2 cell embryos, especially with greater embryo development in high dose of lactate added to media.
In order to examine the effects of Korean cucurbitaceous plants on sonic hedgehog pathway and growth of cancer cells with over-activated hedgehog pathway, we measured the sonic hedgehog conditioned medium (shh-CM) induced alkaline phosphatase (ALP) activity and cell viability of pancreatic cancer cell lines by treatment of cucurbitaceous plants. Among the tested cucurbitaceous plants, Actinostemma lobatum Maxim, Cucumis sativus L., Momordica charantia L., Schizopepon bryoniaefolius Maxim and Trichosanthes kirilowii Max, var. japonica Kitam showed the potent inhibitory effects (> 50 % at $20{\mu}g/mL$) on shh-CM induced ALP activity. We also evaluated the cell viability of pancreatic cancer cells treated with the cucurbitaceous plants. The tested cucurbitaceous plants showed the very weak effects on cancer cell proliferation but, T. kirilowii Max, var. japonica Kitam presented the inhibitory effect of 72.7 % on the proliferation of pancreatic cancer cells at $20{\mu}g/mL$. Taken together, we screened the effects of Korean cucurbitaceous plants on shh-CM induced ALP activity and cell viability of pancreatic cancers to search for the modulators of the hedgehog pathway leading to the inhibition of cancer cell proliferation. T. kirilowii Max, var. japonica Kitam, among the tested cucurbitaceous plants, showed the inhibitory effects on the shh-CM induced ALP activity and the proliferation of pancreatic cancer cells.
Chemical agents such as minocycline (MC) and citric acid (CA) were suggested in the treatment of contaminated implant surface. In this study, MC-HCl treatment was performed to enhance surface characteristics of titanium alloy surface. The purpose of this study was to assess the characteristics and the biocompatibility of Ti-6Al-4V surface treated by MC. Alpha-beta titanium alloy (Ti-6Al-4V) samples were prepared and they were divided into 6 groups according to chemical concentration and treatment time. These groups include 1) group I, non-treated smooth titanium alloy; 2) group II, MC 1.5 mg/mL for 1 hour; 3) group III, MC 1.5 mg/mL for 24 hours; 4) group IV, MC 15 mg/mL for 10 minutes; 5) group V, MC 100 mg/mL for 5 minutes; 6) group VI, pH1 CA for 3 minutes. The analysis of the surface characteristics of MC-treated titanium alloy was executed using scanning electron microscopy, roughness test, and X-ray photoelectron spectroscopy (XPS). Cell adhesion and MTT assay was done using MC3T3 cell. Titanium surfaces treated with MC indicated a more smoothened surface microstructure. For group II and III, the new peaks of rutile TiO2 were found. Group II and V have more basic group of Ti-OH form in XPS. In MTT assay, all MC-treated groups showed significantly higher cell viability compared to control. The surface roughness, crystal structure, surface hydrophilicity, cell viability of smooth titanium surface was improved by MC treatment. Compared with the control experiment and CA-treated group, smooth titanium surface treated with MC showed improved surface characteristics and cell biocompatibility.
The Journal of Korean Medicine Ophthalmology and Otolaryngology and Dermatology
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v.12
no.1
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pp.79-98
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1999
The purpose of this Study was to investigate effect of TakliSodokSan(TSS) on the anti-tumor, immunocytes and nitric oxide(NO) production from mice peritoneal macrophages. This Study estimated the proliferation of L1210 cell lines, A431 cell lines, Hep-G2 cell lines, K562 cell lines, 3T3 cell lines, mouse thymocytes and mouse splenocytes and NO production from pcritoneal macrophages in vitro, and estimated the proliferation of L1210 cells, thymocytes and splenocytcs, NO production from peritoneal macrophages and body weight in L1210 cells-transplanted mice in vivo. The results were obtained as follows; 1. TSS inhibited significantly the proliferation of L1210, A431, Hep-G2, K562 cell lines in vitro. 2. TSS accelerated the proliferation of mice thymocytes and splenocytes in vitro. 3. TSS was not increased the nitric oxide production from mice peritoneal macrophages in vitro. 4. TSS inhibited significantly the proliferation of L1210 cells in Ll210 cells∼transplanted mice. 5. TSS accelerated the proliferation of mice thymocytes and splenocytes In L1210 cells-transplanted mice. 6. TSS was increased significantly the nitric oxide production from mice peritoneal macrophages in L1210 cells-transplanted mice. 7. TSS was increased the body weight as comparing with control group in Ll210 cells-transplanted mice.
Callus and suspension cultures derived from leaf explants of Plumbago rosea were established on Murashige and Skoog's medium containing 1 mg/L IAA, 0.5 mg/L NAA and 0.3 mg/L BAP. Callus cultures were tested for their growth and accumulation of plumbagin, a naphthoquinone and was identified by $^1H$ NMR and electron ionization mass spectroscopy. While auxins (not 2,4-D) influenced growth and plumbagin accumulation, cytokinins did not influence them much. Increasing concentrations of IAA in presence of NAA and BAP increased plumbagin in suspensions only up to 1 mg/L. Growth of callus was optimum (8.3 g DCW/I) at a hormonal combination of 1.5 mg/L IAA, 0.5 mg/L NAA and 0.3 mg/L BAP, but high plumbagin accumulation (4.9 mg/g DCW) was recorded at 1.0 mg/L IAA plus 0.3 mg/L BAP. Since instability in growth and secondary metabolite accumulation was noticed, several cell lines/clumps of callus were screened for plumbagin accumulation by visual and analytical methods. Biomass and accumulation of plumbagin showed a negative correlation in several cell lines. But one cell line showed stability both in terms of biomass and plumbagin accumulation over a period of 6 months.
High cell density cultivation of microalga Dunaliella bardawil using nitrogen fed-batch cultures was studied in batch flask. Optimum environmental conditions include concentrated nutrients except NaCl and carbon sources, carbon sources, pH, light, agitation, nitrate and phosphate ions. Cell growth, consumption rates of nitrate and phosphate ions were monitored. Optimal conditions for higher cell density were found to be(in the range tested): 5 times concentrated media(1 times-10 times concentrated media) pH 8.0 (7.0-9.0) white light(blue and red light) 15mM of nitrate (0.94-15mM) 250mM $NaHCO_3$ and $CO_2$ gas. However, the addition of phosphate ions did not enhance the algal maximum cell density and specific growth rate. Nitrate was found to be effective for the cell growth. The maximum cell density of fed-batch culture using nitrate ions in $8.955{\times}106$cells/ml after 189hr incubation.
This experiment was carried out to examine the effects of foliar applications of 100 mg.L$^{-1}$ ethephon mixed with different calcium formulae (10,000 mg.L$^{-1}$ Clef-non, 2,000 mg.L$^{-1}$ Cell-bine, 2,000 mg.L$^{-1}$ Hicalux, and 2,000 mg.L$^{-1}$ calcium acetate monohydrate) on the rind coloration, defoliation and fruit quality of satsuma mandarin cultivated in the plastic greenhouse. Foliar applications of ethephon alone or in mixture with either Clef-non, Cell-bine, Hicalux or calcium acetate monohydrate demonstrated that increased 'a'value of peel chromaticity as compared to the control. The treatments encouraged fruit colour and allowed the harvest date to be predicted. The defoliation ratio decreased considerably by foliar applications of ethephon mixed with Cell-bine or Hicalux. The sugar content of fruit increased by 1.6, 1.54, and 1.54$^{\circ}$Bx with the foliar applications of ethephon, ethephon+Clef-non, and ethephon+Cell-bine, respectively. With the foliar applications of ethephon in mixture with Cell-bine, fruit coloration was accelerated. defoliation was delayed, and fruit quality was improved.
A porous silicate material named as CellCaSi was tested for the removal of microalgae in the water sample from a eutrophic pond. The effects of the CellCaSi on water qualities were investigated on the basis of both the particle size (under 1, 2,and 4 mm) and the added amount (0, 1, 5, and 10 g/l) of the CellCaSi. The removal efficiency of chlorophyll-a was highest at 79% by the addition of 10 g/l of the CellCaSi (under 1 mm) at day 3 after treatment. That is, the removal efficiency of chlorophyll-a by the CellCaSi increased with smaller particle size and more added amount. The dominant species, Chlorella ellipsoidea, was not changed by the addition of the CellCaSi, but the species number and standing crop of the algae diminished. Total nitrogen concentration was not changed much by the addition of the CellCaSi, whereas total phosphorus concentration was reduced. pH and turbidity were not changed by the addition of the CellCaSi, whereas conductivity showed a high correlation with the amount of added CellCaSi ($Y\;=\;29.2 {\cdot}X+306$, $r^2\;=0.984$). Therefore, it seems to be necessary to limit the amount of the CellCaSi under 6.6 g/1 in consideration of a registered maximum conductivity of $500\;{\mu}mhos/cm$ for raw and potable waters.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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