• 한국식품영양학회지
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• 제9권1호
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• pp.21-28
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• 1996

This study was attempted to investigate the production of L-tyrosine by Brevibacterium flavum ATCC 14067. To select the strain which produce more L-tyrosine, mutants were induced by N-methyl-N'-nitro-nitrosoguanidine (NTG) treatment and phenylalanine auxotrophic mutants were induced by NTG and penicillin treatments. PFP resistant mutant was isolated from a phenylalanine auxotroph by retreatment with NTG and screened for increase of L-tyrosine production. PFP-326 mutant resistant to PPP (100ug/ml) was derived from phenylalanine auxotroph by mutagenesis with NTG and PFP-106 mutant resistant to PFP (1201g/ml) was derived from PFP-326 by mutagenesis with NTG. The composition of media for L-tyrosine production in strain PFP-106 was studied. PFP-106 mutant strain produced 50mg 11 of L-tyrosine while the parent strain produced 0.56mg 11 of L-tyrosine. The optimum composition of medium for L-tyrosine by strain PFP-106 was 10cA sucrose as carbon source, 3% ammonium sulfate as nitrogen source. The optimum cultural condition for producing L-tyrosine by strain PFP-106 was L-phenylalanine at a concentration of 1000g/mg.

• KSBB Journal
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• 제5권2호
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• pp.191-194
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• 1990

Tytosine은 방향족 아미노산이고, L-DOPA는 orth위치에 수산화기를 하나 더 가지는 tyrosine유도체이다. L-DOPA는 효소에 의하여 tyrosine으로부터 전환되어 생성할 수 있는데 반응액에서 두 물질을 분리, 분석하는 것은 상당히 어렵다. 본 논문에서는 두 아미노산 혼합물을 UV/VIS spetrophotermeter를 이용하여 동정함으로써 두 물질이 구분되는 두 파장을 결정하였고 두 파장에서 혼합물의 흡광도를 측정함으로써 농도를 정량하는 분석 system을 확립하였다. 이 방법은 사료에 아무런 전처리가 필요없으므로 손쉽고 간단하게 분석에 사용할 수 있다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제14권2호
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• pp.131-135
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• 1971

1. Aspergillus oryzae의 균체에는 L-tyrosine-${\alpha}$-ketoglutaric acid transaminase와 p-hydroxyphenlypyruvic acid oxidase가 존재해 있다. 2. L-Tyrosine 산화효소는 액침배양한 Aspergillus oryzae의 acetone powder, cell free extract 및 배양액에도 존재하며 L-tyrosine은 ${\alpha}$-ketoglutaric acid의 첨가로 더욱 빨리 전환되었다. 3. ${\alpha}$-Ketoglutaric acid와 pyridoxal phosphate는 transamination의 amino기의 수용체로 생각되었다. 4. 이들 효소계는 L-tyrosine와 p-hydroxyphenlypyruvic acid를 homogentisic acid로 산화시켰다. 5. Ascorbic acid는 p-hydroxyphenlypyruvic가 homogentisic acid로 산화되는데 특별한 역할을 하는 것 같다. 6. L-Tyrosine-${\alpha}$-ketoglutaric acid transaminase와 p-hydroxyphenlypyruvic acid oxidase의 최적 pH는 각 각 pH $6.0{\sim}6.5$와 pH 7.5이었다.

• KSBB Journal
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• 제6권1호
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• pp.63-68
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• 1991

본 연구에서는 L-phcn ylalaninc을 생산하는 조절기작을 상실한 영양요구성 변이주인 Corynebacterium glulamicum ATCC 21674를 이용하여 플라스크내에서의 회분식 배양시의 특성을 조사하였다. 이 균주는 회분반효시 2.1-3.4 g/I 의 phcnllalanine파 2.9-4.4 g/I 의 tyrosine을 생산하였고, 당농도가 높을 경우 생산성이 저하됨을 알 수 있었다. 또한 온도의 변화는 이들 아미노산 생산에 큰 영향을 미침이 관찰되었다. $30^{\circ}C$에사 배양하는 경우, $37^{\circ}C$에서 배양하는 것보다 훨씬 많은 아미노산이 생산되었다. 배양도즙 pH는 급격한 변화를 보였다, 이 균주는 tyrosine이 없는 최소배지에서도 자라는 것이 확인되었고, tyrosine를 과량 생성까시 함으로 보아 영양 요구 성질을 상실한 revertant로서 조전기작 상실성을 ­유지한 것으로 판단된다.

• BMB Reports
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• 제39권2호
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• pp.189-196
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• 2006

Alterations in the amino acid structure or sequence can generate neo-epitopes from self-proteins causing autoaggressive immune attack. Reactive nitrogen species are an important factor that induces post-translational modification of proteins by cellular reduction and oxidation mechanism; cysteinyl-nitrosylation or tyrosine nitration leading to potentially pathogenic pathways. It was thought of interest to investigate the immunogenicity of nitrated poly L-tyrosine vis-$\`{a}$-vis its possible role in the induction of antibodies in systemic lupus erythematosus (SLE). Commercially available poly L-tyrosine was exposed to nitrating species and the damage was monitored by UV spectroscopy and alkaline gel electrophoresis. The results indicated the formation of 3-nitrotyrosine. Nitrated poly L-tyrosine induced higher titre antibodies as compared to the native form. Nitrated poly L-tyrosine was recognized by the autoantibodies present in the sera of patients suffering from SLE by enzyme immunoassays and band shift assay. The possible role of nitrated self-proteins has been discussed in the production of circulating anti-DNA antibodies in SLE.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제13권1호
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• pp.32-34
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• 2005

Effect of isoliquiritigenin isolated from the heartwood of Dalbergia odorifera T. Chen (Leguminosae) on mushroom tyrosinase activity was investigated in vitro using L-tyrosine and L-3, 4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) as the substrates. When L-tyrosine was used as a substrate, both isoliquiritigenin and kojic acid, a positive control, inhibited tyrosinase activity in a concentration-dependent manner. IC$_{50}$ values of isoliquiritigenin and kojic acid were 61.4 and 52.2 ${\muM}$, respectively. However, isoliquiritigenin showed week inhibitory effect on the oxidation of L-DOPA by tyrosinase with inhibition ratio of 9.1 ${\pm}$ 7.1% at 100 ${\muM}$. It is also suggested that 3-unsubstituted and 4-hydroxyl phenyl group in isoliquiritigenin plays an important role on the inhibition of tyrosinase activity when L-tyrosine was used as a substrate. Analysis of Lineweaver-Burk plot showed that isoliquiritigenin acts as a competitive inhibitor in case of L-tyrosine as a substrate.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권3호
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• pp.238-245
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• 1988

토양에서 분리 동정한 phenylalanine 생산균인 Intrasporangium속 방선균의 phenylalanine 생합성 분지경로의 대사조절 특성을 조사하기 위해 chorismate mutase와 prephenate dehydratase를 부분정제한 결과 chorismate mutase는 prephenate dehydratase와 전혀 별개의 단백질로서 두 종의 isoenzyme, chorismate mutase I (CM I)과 chorismate mutase II (CMII)로 구성되어 있음을 알았다. CMI은 최종대사산물인 L-phenylalanine, L-tyrosine 및 L-tryptophan에 대해 완전내성을 보였으나 CMII는 1.5mM tyrosine에 의해서 약 50% 활성 저해를 나타내었다. 이에 비해 prephenate dehydratase는 0.02 mM phenylalanine 존재하에서 95% 이상의 활성 저해를 나타냈으나 이와 같은 L-phenylalanine 활성 저해효과는 positive effector인 L-tyrosine과 L-methionine에 의해 크게 감소되었다. 또한 chorismate mutase 생합성은 feedback repression을 받지 않는데 비해 prephenate dehydratase는 1mM phenylalanine 존재에 의해 약 94%의 효소합성 저해를 나타냈다. 그러나 5mM tyrosine을 동시에 첨가했을 때는 전혀 저해효과를 인식할 수 없었다. 따라서 Intrasporangium속 방선균 역시 대다수의 다른 미생물 균종과 마찬가지로 phenylalanine 분지 경로에서 prephenate dehydratase에 의해 촉매되는 두번째 반응이 가장 중요한 대사조절 단계가 되고 있다는 것을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권1호
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• pp.116-122
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• 2007

An efficient enzyme system for the synthesis of L-tyrosine was developed using a fed-batch reactor with continuous feeding of phenol, pyruvate, and ammonia. A thermo- and chemostable tyrosine phenol-lyase from Symbiobacterium toebii was employed as the biocatalyst in this work. The enzyme was produced using a constitutive expression system in Escherichia coli BL21, and prepared as a soluble extract by rapid clarification, involving treatment with 40% methanol in the presence of excess ammonium chloride. The stability of the enzyme was maintained for at least 18 h under the synthesis conditions, including 75 mM phenol at pH 8.5 and $40^{\circ}C$. The fed-batch system (working volume, 0.51) containing 1.0 kU of the enzyme preparation was continuously fed with two substrate preparations: one containing 2.2 M phenol and 2.4 M sodium pyruvate, and the other containing 0.4 mM pyridoxal-5-phosphate and 4M ammonium chloride (pH 8.5). The system produced 130g/I of L-tyrosine within 30h, mostly as precipitated particles, upon continuous feeding of the substrates for 22 h. The maximum conversion yield of L-tyrosine was 94% on the basis of the supplied phenol.

• Applied Biological Chemistry
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• 제22권4호
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• pp.198-209
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• 1979

Esherichia intermedia A-21의 균체(菌體)에서 얻은 ${\beta}-tyrosinase$의 ${\alpha},{\beta}$-탈리작용(脫離作用)의 역(逆)반응을 이용하여 L-tyrosine, 2-chloro-L-tyrosine, 2-bromo-L-tyrosine 및 2-iodo-L-tyrosine을 효소합성하고 그들의 원소분석(元素分析)과 NMR-spectrum, Mass-spectrum 및 IR-spectrum을 측정하여 그 구조해석(構造解析)을 하였다. 또한 ${\beta}-tyrosinase$에 의한 각(各) halogen화(化) tyrosine의 합성속도와 분해속도 그리고 halogen화(化) phenol의 ${\beta}-tyrosinase$에 대한 저해작용(阻害作用) 및 2-bromotyrosine의 합성에서 m-bromophenol의 경시적(經時的) 첨가효과 등을 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) ${\beta}-tyrosinase$를 이용하여 pyruvin산(酸), $NH_3$ 그리고 m-chlorophenol, m-bromophenol 및 m-iodophenol 등을 기질로 한 각(各) halogen화(化) tyrosine의 효소합성에서 m-chlorophenol에서 2-chloro-tyrosine은 약 15%, m-bromophenol에서 2-bromotyrosine은 약 13.8% 그리고 m-iodophenol에서 2-iodotyrosine은 약 9.8%의 회수율(回收率)로 각각 얻어졌었다. 2) ${\beta}-tyrosinase$에 의한 tyrosine 및 halogen화(化) tyrosine의 합성에서 tyrosine의 합성속도를 100으로 하였을 때 2-chlorotyrosine은 28.2, 2-bromotyrosine은 8.13 그리고 2-iodotyrosine은 0.98의 상대속도를 보여 halogen화(化) tyrosine의 합성속도가 느렸다. 특히 Cl, Br, I의 순(順)으로 원자반경(原子半經)이 증가(增加)함에 따라서 halogen화(化) tyrosine의 합성속도가 저하(低下)되는 것이 인정(認定)되었다. 한편 3-iodotyrosine은 합성이 되지 않았다. 3) ${\beta}-tyrosinase$에 의한 tyrosine의 분해속도를 100으로 하였을 때 2-chlorotyrosine은 70.7, 2-bromotyrosine은 39.0, 2-iodotyrosine은 12.6의 상대적인 분해속도를 보였다. 즉 Cl, Br, I의 순(順)으로 원자반경(原子半經)이 크고 전기음성도(電氣陰性度)가 적어짐에 따라서 분해속도가 저하(低下)되는 것이 분명(分明)하였다 그리고 역시 3-iodotyrosine은 분해를 받지 않았다. 4) ${\beta}-tyrosinase$의 활성(活性)에 대하여 phenol은 현저한 조해작용(阻害作用)을 보였으며 o- 및 m-chlorophenol와 o-bromophenol의 조해(阻害)도 현저하였다. 반면 iodophenol의 조해(阻害)는 근소(僅少)하였으며 이들의 조해작용(阻害作用)을 Lineweaver-Burk plot법에 따라 측정한 결과 m-chlorophenol은 혼합형(混合型)의 조해작용(阻害作用)을 보였으며 그 Ki값은 $5.46{\times}10^{-4}M$이였다. 5) ${\beta}-tyrosinase$에 의한 2-bromotyrosine의 합성에서 기질인 m-bromophenol은 경시적(經時的)으로 소량(少量)씩 첨가하는 것이 효과적이었다. 6) ${\beta}-tyrosinase$를 이용하여 pyruvin산(酸), $NH_3$ 및 각(各) halogen화(化) phenol에서 합성한 2-halogen화(化) tyrosine들을 각각(各各) 원소분석(元素分析)하고 또한 NMR-spectrum, Mass-spectrum 그리고 IR-spectrum 등으로 측정하여 그들의 구조(構造)를 해석(解析)한 결과 각각(各各) 2-chloro-L-tyrosine, 2-bromo-L-tyrosine 및 2-iodo-L-tyrosine 임을 인정(認定)할 수 있었다.

• BMB Reports
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• 제32권5호
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• pp.480-485
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• 1999

Tyrosine phenol-lyase of thermophilic Symbiobacterium sp. SC-1, which is obligately and symbiotically dependent on thermophilic Bacillus sp. SK-1, was purified and characterized. The enzyme is composed of four identical subunits and contains approximately 1 mol of pyridoxal 5'-phosphate (PLP) per mol subunit as a cofactor. The enzyme showed absorption maxima at 330 and 420 nm, and lost this absorption profile by treatment with phenylhydrazine. The apparent dissociation constsnt, $K'_D$, for PLP was determined with the apoenzyme to be about $1.2\;{\mu}M$. The isoelectric point was 4.9. The optimal temperature and pH for the $\alpha,\beta$-elimination of L-tyrosine were found to be $80^{\circ}C$ and pH 8.0, respectively. The substrate specificity of the enzyme was very broad: L-amino acids including L-tyrosine, 3,4-dihydroxyphenyl-L-alanine (L-DOPA), L-cysteine, L-serine, S-methyl-L-cysteine, $\beta$-chloro-L-alanine, and S-(o-nitrophenyl)-L-cysteine all served as substrates. D-Tyrosine and D-serine were also decomposed into pyruvic acid and ammonia at rates of 7% and 31% relative to their corresponding L-enantiomers, respectively. D-Alanine, which was inert as a substrate in a, $\beta$-elimination, was the only D-amino acid racemized by the enzyme. The $K_m$ values for L-tyrosine, L-DOPA, S-(o-nitrophenyl)-L-cysteine, $\beta$-chloro-L-alanine, and S-methyl-L-cysteine were 0.19, 9.9, 0.36, 12, and 5.5 mM, respectively.