Hemal nodes and hemolymph nodes are lymphoid organs which share morphologic and functional characteristics of lymph nodes and spleens. Hemal nodes and hemolymph nodes are normally present in Korean native goats. Hemal nodes bad extensive subcapsular and deep sinuses distended by a great number of erythrocytes, and no typical cortex and medulla were observed. Blood vessels commonly occurred, but lymph vessel was not observed in the hemal node. Hemolymph nodes had distinct cortex and medulla, and also had afferent and efferent lymph vessels. The aim of the present study was to obtain new information on the distinct morphological structures of hemal nodes and hemolymph nodes according to ages, and have the basic data for their functions. Goats are divided into 5 groups, consisting of 3 animals aged 1, 3, 6, 10, and 12 months. The morphological studies of the organs were carried out by gross anatomy, light microscopy and immunohistochemistry. During aging, there was an increase in the size of the organs, while there were no significant changes of their numbers, locations and colors. As the goat got older, the lymphatic nodules of hemal nodes were more developed, and the number of macrophage containing phagocytosed erythrocytes was more increased. As the goat was younger, the lymphatic tissues of hemolymph nodes were less developed. There was no difference in distribution of T- and B- lymphocytes according to ages.
The proteins of the ruminant erythrocyte membranes were analysed by polyacrylamide gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate, and their relations to the slow erythrocyte sedimentation rate(ESR) of the ruminants were investigated by treating the erythrocytes with proteinases such as trypsin, chymotrypsin and pronase, and glycosidases such as neuraminidase and galactosidase. Protein content in the erythrocyte membrane was $2.85{\pm}0.28$ in human, $3.60{\pm}0.41$ in Korean cattle, $3.71{\pm}0.36$ in Holstein, $4.13{\pm}0.83$ in Korean native goat and $3.94{\pm}0.56mg/ml$ in sheep, showing higher in ruminant animals than in human(p<0.01). Although the general protein profiles of the ruminant erythrocyte membranes were almost similar to that of human, all the ruminant erythrocyte membranes showed one additional protein band, called band-Q in the previous report on proteins of bovine erythrocyte membrane, which migrated electrophoretically to the mid position between band-2 and band-3 in human erythrocyte membranes. The glycoprotein profiles of ruminant erythrocyte membranes revealed by periodic acid Schiff(PAS) stain showed a marked difference from that of human. The PAS-1(glycophorin) and PAS-2(sialoglycogrotein) present in human erythrocyte membranes were almost absent from the ruminant animals. Instead, a strong PAS-positive band near the origin of the electrophorograms, which was named as PAS-B in the previous report on proteins of bovine erythrocyte membranes, was shown in the ruminant animals except sheep. In addition, the erythrocyte membranes of Korean native goat and sheep showed a moderate PAS-negative band near the tracking dye of the electrophorograms, which was named as PAS-G in this study. In the erythrocyte treated with the enzymes, the migration of each protein fracture of erythrocyte membranes in response to each enzyme was diverse according to different species or breed of ruminant animals. Among others, band-Q present in ruminants was slightly or moderately decreased by trypsin-, chymotrypsin-, and pronase- treatments of the erythrocytes, but not only in sheep. It was particularly noticeable that PAS-B, a fraction of glycoprotein, present in ruminants except sheep, was better digested by proteinases than by glycosidases, showing remarkable increase(p<0.01) of the ESR in accord with complete digestion(disappearance) of the PAS-B band by pronase, trypsin or chymotrypsin treatment of erythrocytes. In sheep, there was almost no any response to the various enzymes in general protein and glycoprotein profiles of the erythrocyte membranes except PAS-G, which was markedly decreased by pronase treatment of the erythrocytes. Nevertheless, the ESRs were accelerated in erythrocytes treated with pronase, trypsin, chymotrypsin and neuraminidase. Erythrocyte osmotic fragility was increased in erythrocytes treated with only pronase among five enzymes in all the human and ruminant animals used in this study.
돼지(n=22) 순환혈액내 단핵세포(PB-MNCs)중 T 및 B 림프구를 정량하고자 rosette 형성기법을 적용하였다. T 림프구는 여러 농도의 2-aminoethylisothiouronium bromide(Aet)나 dextran(Dex) 용액 또는 Aet와 Dex로 조합 처리된 면양(SRBC) 및 재래산양(GRBC)의 적혈구를 사용한 E-rosette 법으로, B 림프구는 erythrocyeantibody(EA) 및 erythrocyte-antibody-complement(EAC) rosette 법으로 각각 정량하였다. 한편 rosette 형성세포의 냉장정치시간에 따른 판독결과를 비교하여 적정판독시간대를 구명한 바 아래의 결과를 얻었다. 1. PB-MNCs와 SRBC/GRBC와의 자연 rosette형성을(RFR)은$ 32.9{\pm}7.9%/31.3{\pm}9.4%$인데 비하여 Aet 또는 Dex 처리군에서는 모두 증가되었고 특히 0.15M Aet$(40.2{\pm}4.6%/37.0{\pm}3.3%)$ 및 8% Dex$(71.5{\pm}4.5%/69.9{\pm}5.8%)$ 처리군에서 각각 높게 나타났다. 한편 0.1M Aet처리후 8% Dex 첨가군에서는 $67.8{\pm}7.4%$ 및 $69.8{\pm}8.5%$로 나타나 복잡한 Aet와 Dex를 복합처리하기 보다는 8% Dex 단독처리가 간편함을 알 수 있었다. 2. Rosette 형성세포의 냉장보관중 최적판독시간대는 10~20시간의 범위이었다. 3. EA 및 EAC의 RFR은 SRBC의 경우 $39.1{\pm}10.2%$, $27.6{\pm}7.0%$, GRBC의 경우 $32.6{\pm}6.1%$, $21.0{\pm}3.2%$로 나타났다. 이러한 결과는 돼지 PB-MNCs내의 T 및 B 림프구를 rosette 형성법으로 분리할 수 있으며 rosette assay에서 SRBC 뿐아니라 GRBC의 이용이 가능함을 제시한다.
Hemal nodes and hemolymph nodes are lymphoid organs that share morphologic and functional characteristics of lymph nodes and spleens. The aim of the present study was to obtain new informations on the distinct morphological structures of hemal nodes and hemolymph nodes according to ages, and to get the basic data for their functions in Korean native goats. Goats were divided into 5 groups, consisting of 3 animals aged 1, 3, 6, 10 and 12 months, respectively. Ultrastructural features of the organs were observed by transmission and scanning electron microscopes. The sinuses of hemal nodes and hemolymph nodes were lined by endothelial-like reticular cells which had euchromatin-rich nuclei and many cytoplasmic processes, surrounding collagen fibrils. Macrophages containing phagocytosed erythrocytes were often noted in the diffuse lymphatic tissues of hemal nodes and hemolymph nodes. Some mast cells were in contact with the plasma cells near the blood vessel. Hemal nodes and hemolymph nodes had venous sinusal-like vessels which were different from the deep sinus. The lymph vessels with valves were observed in the capsule of the hemolymph node. There were no ultrastructural differences of the organs in the age different groups of the animals. These results suggest that hemal nodes and hemolymph nodes may take part in hemopoiesis, blood filtration and immune reaction in Korean native goats.
Peripheral blood mononuclear cells(PBMNC) of Korean native cattle rosetted with Korean goat erythrocytes(KGRBC) and blood monocytes were evaluated for four cytochemical reactions such as acid phosphatase(ACP), alkaline phosphatase-anti-boby(ALP-Ab), ${\alpha}$-naphthyl butyrate esterase(${\alpha}$-NBE) and peroxidase. The results obtained were as follows; In rosetted cells, the positivities of ACP in E AET-DeX, EA and EAC were 70.3%, 22.4% and 25.2%, those of ${\alpha}$-NB were 27.4%, 44.2% and 79.8%, and those of ALP-Ab were 9.5%, 88.3% and 91.5%, respectively. Whereas, the positivity for Peroxidase in monocytes was 100%. In non-rosetted (remained) cells, the positivities of ACP in E AET+DeX. EA and EAC were 41.4%, 57.2% and 61.9%, those of ${\alpha}$-NB were 38.6%, 16.5% and 18.9% and those of ALP-Ab were 98.2%, 5.3% and 6.3%, in order.
In order to enumerate the T-lymphocytes in bovine peripheral blood lymphocytes (PBL) by E rosette assay, KGRBC were treated with various concentrations of 2-aminoethylisothiouronium bromide(AET) and dextran(Dex), singly or in combination. To further standardize the assay, optimum concentration of AET- and/or Dex-treatment and incubation time for rosette forming cell(RFC) counts were determined. The levels of B-lymphocytes in the PBL were evaluated by erythzocyte-antibody($EA_{Fc}$)- and erythrocyte-antibody-complement (EAC)-rosetting techniques. The results obtained were as follows; The PBL from 20 clinically normal Korean cattle were formed as low percentage of spontaneous E-rosette ($6.7{\pm}2.4%$) in control group, whereas in KGRBC treated with 0.1M AET for 20 minutes and 8% Dex were formed as $37.3{\pm}2.7%$ and $45.1{\pm}2.1%$, respectively. And the synergistic effects were noted no less than $66.5{\pm}5.6%$ when the KGRBC treated with 0.1M AET and 8% Dex subsequently and rate of RFR did not change significantly between 3~24 hours incubation time at $4^{\circ}C$, EA-and EAC-RFR were $23.3{\pm}9.1%$ and $23.1{\pm}7.9%$, respectively. These results suggest that the KGRBC would be a useful agent for the enumeration of T-lymphocytes by E rosette assay and B-lymphocytes by EA- or EAC-rosette assay in cattle-PBL.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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