• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제47권6호
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• pp.757-767
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• 1999

Background: Diagnosis by smear and/or cultures of the Mycobacterium tuberculosis from body fluid or biopsy specimen is "Gold standard". However the sensitivity of the direct microscopy is relatively low and culture of mycobacteria is time consuming. Despite an explosion in the techniques of rapid identification of mycobacteria by molecular genetic means, it is laborious and expensive and then rapid, inexpensive serodiagnosis is interested in diagnosis of tuberculosis. But sensitivity and specificity of known serologic antigen is not full sufficient level and then new antigen develop and combination cocktails of new developed antigens by ELISA are needed. Method: To compare the efficacy of different mycobacterial specific antigen and to assess the applicability of the combination of several different antigens in the diagnosis of tuberculosis, five ELISA tests derived 14KDa, 16KDa, 19KDa, 23KDa, 38KDa were evaluated in 57 active pulmonary patient and 24 inactive post-therapy follow up patient and 48 normal control. Results: The optical densities of ELISA test with 14KDa, 16KDa, 19KDa, 23KDa, 38KDa were significantly higher in active tuberculosis cases than in normal control(P<0.001, P<0.001, P<0.027, P<0.001, P<0.001) and those with 16KDa, 38KDa were significant higher in active tuberculosis cases than in inactive post-therapy follow up cases(P<0.01. P<0.001) and those of 14KDa, 16KDa, 23KDa, 38KDa were significant higher in inactive post-therapy follow up cases than in normal control(P<0.008. P<0.01. P<0.006. P<0.001). The sensitivity of 14KDa, 16KDa, 19KDa, 23KDa, 38KDa in active pulmonary patient cases was 42.1%, 43.9%, 15.8%, 28.0%, 70.2%, respectively and the specificity of 14KDa, 16KDa, 19KDa, 23KDa, 38KDa in active pulmonary patient cases was 95.8%, 95.8%, 91.7%, 89.6%, 93.8%, respectively. The sensitivity and specificity of combination 38KDa with 16KDa was 87% and 93.7%. Conclusion: The sensitivity and specificity of new antigens for serodiagnosis of the tuberculosis still remains limited at around 70%, which makes its a poor diagnostic tool for disease confirmation. A combination of cocktail antigens provided by cut-off value adjustment for serodiagnosis of tuberculosis some improved diagnostic yield than single antigen serologic test.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제26권3호
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• pp.155-162
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• 1988

Toxoplasmn gondii이 강독주인 RH주와 조직내 cyst 형성주인 Fukaya주의 세포막 단배 성분을 SDS 존재하에 서 전기영동하여 분석하였다. 먼저 RH tachyzoite와 Fukaya의 cyst를 각각 마우스의 복강액과 뇌조직으로부터 분리하였는데, 불연속 Percoll density-gradient서 원심분리하여 tachygoite는 50 U와 605 Percoll용액 경계면에서, cyst는 40%와 50%의 경계면 및 50%와 60 % 경계면에서 얻었으며, cyst는 저장액으로 처리하여 bradyzoite를 얻었다. Lactoperoxidase를 촉매로 세포막에 방사성 요오드를 표지시킨 후 자가방사표지그림을 얻었을 때, bradyzoite 는 15 KDa와 14 KDa의 분자량을 가진 단백질이 주요 단백질로 나타났으며, tachyzoite에서는 30 KDa 단백질이 주요 단백질로 나타났다. 또, 당단백질의 존재를 파악하기 위해서 lectin blotting을 시행하였는데, concanavalin A는 bradyzoite에서 200K∼50KDa의 여러 단백질을, .그리고 tachyzoite에서는 52KDa 단백질을 주로 하는 33K∼20 KDa단백질을 검출하였으며, phytohemagglutinin은 두·유형에서 아무런 단백질도 검출하지 못하였다. 한편, 이들을 효소면역이적법으로 항 Fukfya항체와 항 RH항체로 반응시켰을 때, 많은 교차 반응을 보였으나, bradyzoite에서는 15 KDa 단백질이, 그리고 tachyzoite에서는 52 KDa, 30 KDa 및 25 KDa 단백 짙이 각각 유형 특이 항원 단백으로 나타났다. 위의 결과들로, bradyzoite에서는 15 KDa 단백질이 당단백질은 아니지만 특이 항원성을 갖는 주요 백으로 나타났으며, tachyzoite에서는 지금까지 주요 세포막 단백으로. 알려진 P3O외에 당단백질이며 성을 갖는 세포막 단백으로 SaKDa 단백 (gps2)을 확인할 수 있었다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제17권5호
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• pp.309-313
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• 1994

Phytase of rat intestine had a large amount of oilgosacchanrides ; The enzyme consisted of two different subunits with the molecular weights of 90 KDa and 70 KDa in its intack form, whereas the apparent molecular weights tumed to 72 KDa and 52 KDa, respectively, after deglycosylation. The treatment with glycopeptidase F reduced the molecular weights from 90 KDa and 70 KDa to 83 KDa and 52 KDa, respectively, While endoglycosidase H caused no change in their molecular weights. These results indicate that the 70KDa subunit contains only the N-linked oilgosaccharide chains, while the 90KDa subunit ocntains O-linked oilgosaccharides as well as N-linked ones. Enzyme-linked lectin assays suggeted that bisecting N-acetyl-D-glucosamine and galactose 1-4 N-acetyl-D-glucosamine structures were present and that fucose was included in these oilgosaccharide moieties. Sialic acid was not found in either subunit.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제26권4호
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• pp.245-254
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• 1988

유구낭미충(이하 낭미충)(Cysticercus cellulosae)에서 추출한 조항원으로 낭미충증(cysticercosis), 스파르가눔중(sparganosis) 및 포충중(hydatidosis) 환자 및 정상인 혈청내 IgG 항체와의 혈청학적 반응을 ELISA 및 EITB 방법으로 추적하였다. ELISA에서 낭미충의 조항원 단백은 스파르가눔중 환자 혈청과의 교차 반응도 보였고, 포충증 환자 혈청에 대해서는 낭미충 환자 혈청보다 오히려 높은 흡광도(O.D.)를 보였다. 낭미충 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동한 결과 260 KDa∼22 KDa 범위에서 31개의 polypeptide band를 얻었으며 이 중 11개의 분획이 강한 염색성을 나타내었다. 낭미충 조항원과 낭미충중 환자 혈청과의 EITB 반응에서 22개의 항원대가 관찰되었으며 이 중 104 KDa, 82 KDa, 78 KDa 및 59 KDa는 모든 검사 혈청에서 인지되었다. 또 22개의 항원대 중 12개는 정상인 혈청에서도 반응이 관찰되어 교차반응하는 비특이성 항원 성분으로 해석되었다. 낭미충 조항원과 스파르가눔증 환자 혈청과의 반응에서 11개의 항원대가 인지되었으며 이 중 낭미충증 환자 혈청과 교차반응하는 9개의 항원대가 인지되었다. 나머지 163 KDa 및 131 KDa 항원대는 스파르가눔 환자에서만 동정되었다. 낭미충 조항원과 포충증 환자 혈청과의 반응에서는 21개의 항원대가 인지되었는데, 이 중 63 KDa는 포충증 환자에서만 인지되었고 나머지는 낭미충증 환자 혈청과 교차반응하는 항원대이었다. 한편 낭미충 조항원 중 104 KDa, 82 KDa, 72 KDa, 59 KDa및 34 KDa는 낭미충증, 스파르가눔증 및 포충중 환자와 정상인의 혈청에서도 모두 교차반응을 일으키는 항원이었다.

• KSBB Journal
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• 제14권5호
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• pp.528-533
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• 1999

초산생성 미생물인 분리균주 Acetobacter sp. CS5로부터 alcohol dehydrogenase(ADH)를 순수분리하였다. 이 효소는 Triton-X로 solubilization시킨 후 DEAE-Sephacel chromatography와 Sephacryl S-200 chromatography에 의해서 순수 분리되었다. 그 결과 15%의 수율과 14배의 정제된 효소를 얻었다. 정제된 효소의 분자량은 322 KDa으로 측정되었다. 또한 SDS-PAGE상에서는 분자량이 79 KDa, 49 KDa, 46KDa인 3개의 band를 확인하였고, 3분자의 79 KDa 소단위체와 각각 1분자인 49 KDa과 46 KDa인 소단위체로 이루어졌음을 확인하였다. 에탄올에 대한 Km값은 0.77 mM이었으며 최적 pH와 온도는 각각 4.0~5.0과 35$^{\circ}C$이였다.

• 미생물학회지
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• 제37권4호
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• pp.273-276
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• 2001

본 연구에서는 중금속, 특히 은(銀)을 축적하는 세균을 지하수로부터 분리, 동정하고, 분리 균주의 특성 및 중금속 축적조건을 규명하여 최대축적이 일어날 수 있는 조건을 검토하였다. 서울시 지하수 10개 정점으로부터 분리된 은(銀) 축적 세균 중 가장 축적능이 뛰어난 두 균주를 선별하였으며 이들은 Pseudomonas fluorescens와 Bacillus cereus로 동정되었다. 본 분리 균주는 은(銀)의 농도가 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm으로 높아질수록 생장 저해를 심하게 받았다. pH가 낮을수록 세포의 성장이 저하되기는 하였지만 세포 당 은(銀) 축적율은 오히려 증가하였으며 24시간 이내에 최대축적이 이루어졌다. 이때 은(銀) 축적량은 Pseudomonas fluorescens의 경우 약 1.9 $mg/g{\cdot}cell$ 이었으며 Bacillus cereus는 약 1.65 $mg/g{\cdot}cell$ 이었다. 은(銀) 처리시, Bacillus cereus에서 126 KDa, 89 KDa, 25 KDa 등 3개의 단백질이 특이적으로 증가하였으며, Pseudomonas fluorescens에서는 101 KDa, 68 KDa, 27 KDa 크기의 단백질이 감소하였으나 34 KDa 크기의 새로운 단백질이 유도됨을 확인하였다.

• 한국동물학회지
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• 제35권4호
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• pp.456-465
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• 1992

The 94 KDa glucose-resulsted Protein (SH 94), one of stress Proteins, is a Ca2+-binding protein in the endoplasmic reticulum (ER). In this study, the possible effect of Ca2+ on the native conformation of grp 94 was examined. When the purified grp 94 was analyzed by Sel filtration in the presence of either EGTA or CaCl2, it was eluted with apparent molecular weight (MW) of 100 KDa in both cases. When similarly analyzed with microtome or cell Ivsate, however, srp 94 was eluted with apparent IW of 200 KDa in the presence of E6TA, while with apparent MW of 100 KDa in the presence of CaCl2, indicating possible association of grp 94 with one or more other proteins in the absence of CaCl2. Consequently, immunoprecipitation with anti-grp 94 was carried out to determine which proteins specifically interact with grp 94. It is sho%un that srp 94 may interact, in a Ca2+_dependent manner. with other proteins including BiP (grp 78) which is also a stress protein in the ER.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제14권3호
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• pp.270-276
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• 1999

Alteromonas sp. SR-14의 배양여액을 사용하여 C. calcitrans의 증식에 미치는 영향과 조류 증식저해 물질의 특성을 살펴보았다. Alteromonas sp. SR-14의 peptone broth 배양여액은 C. calcitrans에 대하여 증식 저해 활성을 나타내었으며, 이 균에 의한 조류 증식 저해 물질은 온도 $15~20^{\circ}C$, pH 7.0~9.0, 염분 농도 $23~30{\textperthousand}$의배양 조건에서 강한 활성으로 생성되었으며, 이러한 조건(온도 $20^{\circ}C$, pH 8.0, 염분 농도 $30\textperthousand$)에서는 정지기부터 활성이 증가하였다. Alteromonas sp. SR-14가 peptone broth에서 생산하는 조류 증식 저해 물질의 분자량은 약 3KDa~12KDa의 복합 물질이었는데, $100^{\circ}C$에서 10분간 열처리하였을 때 3~10KDa 이하의 물질은 내열성이 있었으나 10KDa 이상의 물질은 불활성 되었다.

• KSBB Journal
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• 제10권1호
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• pp.30-37
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• 1995

Membrane-bound alcohol dehydrogenase(ADH) was purified to homogeneity from the acetic acid producing bacteria, Acetobacter sp. KM. The enzyme was solubilized and extracted with Triton X-100 and purified using the Mono-Q ion exchange chromatography and Superose 12 gel filtration chromatography. The enzyme was purified to 12-fold with a yield of 30%. The molecular weight of the purified enzyme was to be 335 KDa. SDS-PAGE of the enzyme showed two subunits with molecular weights of 79 KDa and 49 KDa. It indicated that the enzyme consisted of three subunits of the 79 KDa and two subunits of the 49 KDa. The purified .ADH preferentially oxidized straight chain aliphatic alcohol except methanol. Formaldehyde, acetaldehyde and glutaraldehyde were also oxidized. The apparent Km for ethanol was 1.04 mM and the optimum pH and temperature were 5.0∼6.0 and 32$^{\circ}C$, respectively. V2O5 and divalent cation such as ZnCl2 and NiCl2 inhibited enzymatic activity.

• The Korean Journal of Ecology
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• 제22권1호
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• pp.39-43
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• 1999

중금속에 대한 내성을 나타낸 Serratia marcescens를 이용하여 카드뮴 흡착 기작에 관하여 조사하였다. 먼저 카드뮴에 대하여 민감성을 나타내는 돌연변이 균주인 PM을 개발하였으며 PM균주는 50ppm 이상의 카드뮴 농도에서 성장하지 못하였다. 카드뮴을 50ppm 처리한 균주에서 10회 이상 계대 배양하여 카드뮴에 적응을 유도한 PA균주는 PC, PM균주에 비해 성장 속도가 증가하였으며 세포 내 카드뮴 축적량도 4∼5배 증가하였다. PA균주는 100 ppm 카드뮴 처리군에서 처리량 중 23%를 세포내에 축적하였으며 세포막 부위보다 세포질 부위에 더욱 많은 카드뮴을 축적하였다. 카드뮴 처리시, 전 세포 단백질 양상에서 28 KDa과 64 KDa의 2개의 유도 단백질과 45 KDa의 감소 유도 단백질을 확인하였으며 원자 흡광 분석을 통하여 각각의 유도 단백질에 결합된 카드뮴 양은 단백질 1 g당 318.25 ㎍, 325.37 ㎍이 검출되었다. 세포내에 축적된 카드뮴을 전자현미경을 이용하여 카드뮴 결합 물질을 확인한 결과, 세포질의 단백질 분획에서 28 KDa크기의 유도 단백질이 카드뮴과 흡착한 것으로 나타났다. 카드뮴 흡착에 대한 DNA조사 결과 20 Kb 크기의 plasmid가 존재하였으며, curing agent로 plasmid를 제거한 결과 카드뮴 내성을 상실하여 본 분리 균주의 카드뮴 내성 유전자는 plasmid상에 위치하는 것으로 확인하였다.