Ha, Sun-Hwa;Lee, Shin-Woo;Kim, Jong-Guk;Hwang, Young-Soo
Journal of Applied Biological Chemistry
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v.42
no.2
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pp.92-96
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1999
To study the regulatory mechanism of isoprenoid (carotenoid) biosynthesis, we have compared the expression patterns of nine isoprenoid biosynthetic genes in Korean red pepper (Capsicum. annuum cv. NocKaung). The expression of geranylgeranyl pyrophosphate synthase gene was initially induced at early ripening stage (I1) and was rather slightly decreased during pepper fruit ripening. The ex-pression of phytoene synthase gene was strongly induced at semi-ripening stage (I2) and the phytoene desaturase transcript was maximally induced at the fully ripened stage (R). Our results suggest that genes encoding two 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase isozymes (HMGR1 and HMGR2) and farnesyl pyrophosphate synthase might be not so critical in pepper carotenoid biosynthesis but three genes encoding geranylgeranyl pyrophosphate synthase, phytoene synthase and phytoene desaturase were induced in a sequential manner and coordinately regulated during the ripening of pepper fruit.
Two allelotypes of sMDH variation, namely A and B type, are known in the dark chub, Zacco temmincki. We attempted to clarify their probable functional enzymatic difEerence with temperature change. Two types of sMDH were purified separately by successive chromatography on DEAE-cellulose and blue 2-Sepharose amEnity columns, and their ensymatic activities to temperature change were measured. Q10 of Vmax and Vmax/Km were significantly different between two types, i.e. A type being higher in Q10 values than B type. Based on the result it is assumed that A type may be more sensitive to temperature change than B type.
동위효소(同位酵素)가 임목분야(林木分野)의 연구(硏究)에 이용(利用)되기 시작(始作)한지 10여년이 지난 요즈음 많은 분야(分野)에서 그 성과(成果)가 높이 평가(評價)되고 있다. 특(特)히 복잡(複雜)한 유전변이(遺傳變異)를 가지고 있는 천연임분(天然林分)에서의 유전분석(遺傳分析)으로 많은 것을 밝혀 내어 임목(林木)의 유전육종학적(遺傳育種學的) 측면(側面)뿐만 아니라 삼림유전생태학적(森林遺傳生態學的)인 면(面)에서도 큰 도움을 주고 있다. 본(本) 총설(總說)은 지금까지 임목(林木)에 대(對)한 동위효소(同位酵素) 이용(利用) 실례(實例)를 중심(中心)으로 앞으로 응용(應用) 가능분야(可能分野)에 대(對)해 검토(檢討)한 것이다.
Proceedings of the Botanical Society of Korea Conference
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1987.07a
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pp.357-389
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1987
In an attempt to clarify the physiological functions of individual isoperoxidases, we have studied enzymatic and immunological properties as well as cellular distribution of isoperoxidases from tobacco callus and Korean radish. The gene expression patterns of isoperoxidases in shoot and non-shoot-forming tobbaco callus were also examined by rabbit reticulocyte lysatein vitro translation system. These results indicate that fraction of translatable poly(A)-isoperoxidase mRNA was increased considerably in shoots. At the present time, at least 6-7 isoperoxidases could be detected from the translation mixture of total cellular RNA, among which only one cell wall localized anodic isoperoxidase (named A3) mRNA was bimorphic mRNA. These data suggest the possible regulation of peroxidase activity during shoot formation by altering the polyadenylation state of mRNA. In case of Korean radish seedlings, poly(A)- peroxidase mRNA were also increased depending upon aging.
These researches were carried out to investigate the morphology of different species of Trichoderma and the possibilities of differentiation of the species of Trichoderma by electrophoretic methods. Variations between the isolates of a species of Trichoderma indicate the genetical differences, also isozyme and protein patterns will be useful to investigate genetical variations betweens the isolates. It might be possible that distinct bands of isozymes of esterase, phosphotase, catalase, catalase differentiate species of Trichoderma.
Megagametophyte tissues from seeds of 45 loblolly pine clones were subjected to horizontal starch-gel electrophoresis. The resulting gels were tested for activity of five enzyme systems (GOT, SDH, PGM, MDH, and AP). Isozymes observed were under control of 11 loci. All 45 clones could be identified with unique genotypes at above 10 loci.
Macrophages activated by lipopolysaccharide (LPS) are known to induce several proinflammatory proteins including COX-2. iNOS and TNF which produce chemical mediators involved in inflammatory response. Sophoricoside and its analogs (genistin, genistein and orobol) from Sophora japonica (Leguminosae) showed differential inhibitory effects on COX-1 and 2 activities. Sophoricoside and genistin shwoed IC50 values of 4 uM and 6 uM on COX-2 activity and of 1,497 uM and 135 uM on COX-1 activity, respectively. Genistein and orobol showed IC50 values of 3 uM on COX-2 activity and of 28 uM and 18 uM on COX-1 activity. respectively. Therefore. the legume isoflavonoids to be selective COX-2 inhibitors. However. sophoricoside and its analogs did not show inhibitory effects of COX-2, iNos and TNF transcripts. which were identified by the RT-PCR.
To elucidate the ancestry of the allopolyploids E. stevenii and E. boöphthona, I examined eleven isozyme loci and 24 morphological characters from 28 populations representing five related Euphorbia species from Australia. According to an analysis of genetic and morphological data, three diploid species differentiated recently, but two independent polyploid species are estimated to have differentiated a relatively long time ago. Fixed heterozygosity for most isozymes in E. stevenii and E. boöphthona strongly suggests that these two species are allopolyploids rather than autopolyploids. The isozyme profiles of E. stevenii indicate that it is an allopolyploid that evolved from interspecific hybridization between the diploid E. tannensis and unidentified or extinct tetraploid species. In addition, isozyme patterns strongly suggest that E. stevenii was one of the ancestors of E. boöphthona. However, E. boöphthona showed a large number of fixed alleles that were not detected in any other Australian Eremophyton species. The most likely hypothesis for the origin of E. boöphthona is that it was formed by hybridization and chromosomal doubling between an extinct diploid species and the hexaploid E. stevenii.
The properties of lactate dehydrogenase (LDH, EC 1.1.1.27) eye-specific $C_4$ isozyme were studied by polyacrylamide gel electrophoresis, Western blotting, immunoprecipitation, and enzyme kinetics. Furthermore, we proposed the optimal conditions for measuring the activity of LDH eye-specific $C_4$ isozyme. The isozymes were detected in the cytosol of eye tissues from Lepomis macrochirus and Micropterus salmoides and were more similar to the $A_4$ than the $B_4$ isozyme. LDH/CS in the eye tissue of L. macrochirus was increased in September, so the ratio of anaerobic metabolism was high. The electrophoretic patterns of mitochondrial LDH were similar to those of cytosolic LDH in the eye tissues of L. macrochirus and Micropterus salmoides. LDH eye-specific $C_4$ isozyme from eye tissue was purified by preparative native-PAGE. The activities of LDH eye-specific $C_4$ isozymes in L. macrochirus and M. salmoides were reduced at concentrations greater than 0.2 mM and 0.1 mM of pyruvate, respectively. These concentrations remained at 5.2% and 15.8% as a result of the inhibition by 10 mM of pyruvate, so the degree of inhibition was very high. The LDH activities of eye tissues were reduced at concentrations greater than 22 mM and 24 mM of lactate, respectively, in L. macrochirus and M. salmoides. The ${K_m}^{PYR}$ of eye-specific $C_4$ was 0.088 mM in L. macrochirus and it was 0.033 mM in M. salmoides. The activities of cytosolic and mitochondrial eye-specific $C_4$ isozymes were high in ${\alpha}$-ketobutyric acid. Furthermore, the activities of eye tissue and eye-specific $C_4$ isozyme had to be measured with 0.5 mM of pyruvate and a buffer solution of pH 7.5. As a conclusion, the eye-specific $C_4$ isozyme in M. salmoides has a high affinity for pyruvate and exhibits maximum activity at a lower concentration of pyruvate and at higher concentration of lactate than that in L. macrochirus. Therefore, it seems that the energy produced by the LDH eye-specific $C_4$ isozyme in M. salmoides was used at the first stage of predatory behavior.
The properties of lactate dehydrogenase (EC 1.1.1.27, LDH) and expression of monocarboxylate transporters (MCTs) 1, 2, and 4 were studied in tissues from Micropterus salmoides. Native-PAGE revealed that the LDH $A_4$ isozyme was predominantly located in skeletal muscle. The LDH $A_4$, $A_2B_2$, and $B_4$ isozymes were detected in heart, liver, eye, and brain tissues, while eye-specific $C_4$ isozyme was detected in eye tissue. In September, strong LDH $B_4$ isozyme activity was detected in heart tissue. High $A_4$ isozyme activity was noted in all other tissues except heart tissue. However, in November, strong $A_4$ isozyme activity was detected in heart tissue. The LDH/CS (Citrate synthase, EC 4.1.3.7) ratio in skeletal muscle and heart tissues indicated that anaerobic metabolism was high in those tissues. Native-PAGE after immunoprecipitation showed that eye-specific $C_4$ isozyme was more similar to the $A_4$ than the $B_4$ isozyme. The LDH $A_4$ isozyme was purified by affinity chromatography. The molecular weight of subunit A was 37,200. The LDH activity in tissues was consistently 11.05~28.32% due to inhibition by 10 mM pyruvate. The $K_m^{PYR}$ of LDH in eye tissue was very low. The optimum pH for LDH in tissues was pH 7.5~8.0. The LDH $A_4$ isozyme was detected in mitochondria of skeletal muscle, whereas the $B_4$ and $A_2B_2$ isozymes were detected in heart tissue mitochondria. Western blot analysis indicated that MCTs 1, 2, and 4 were located in the plasma membrane and mitochondria of skeletal muscle and heart tissues. The sizes of MCTs 1, 2, and 4 in skeletal muscle were 60, 54~38, and 63 kDa, while those in heart tissue were 57, 54~38, and 55.5 kDa, respectively. In conclusion, M. salmoides appears to use anaerobic metabolism predominantly when adapted to a hypoxic environment. In highly activated skeletal muscle and heart tissue, energy production is controlled by inward and outward flows of pyruvate and lactate through MCTs 1, 2, and 4 in the plasma membrane and mitochondria, with effective adjustment by LDH isozymes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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