Sanghvi, Gaurav V.;Koyani, Rina D.;Rajput, Kishore S.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.21
no.5
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pp.470-476
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2011
A potent fungus for amylase production, Chrysosporium asperatum, was isolated from among 30 different cultures obtained from wood samples collected in the Junagadh forest, India. All of the isolated cultures were screened for their ability to produce amylase by submerged fermentation. Among the selected cultures, C. asperatum (Class Euascomycetes; Onygenales; Onygenaceae) gave maximum amylase production. In all of the different media tested, potato starch was found to be a good substrate for production of amylase enzyme at $30^{\circ}C$ and pH 5.0. Production of enzyme reached the maximum when a combination of starch and 2% xylose, and organic nitrogen (1% yeast extract) and ammonium sulfate were used as carbon and nitrogen sources, respectively. There was no significant effect of metal ions on enzyme activity. The enzyme was relatively stable at $30^{\circ}C$ for 20 min, and no inhibitory effect of $Ca^{+2}$ ions on amylase production was observed.
Gene encoding cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase), from thermotolerant Paenibacillus sp. T16 isolated from hot spring area in northern Thailand, was cloned and expressed in E. coli (JM109). The nucleotide sequences of both wild type and transformed CGTases consisted of 2139 bp open reading frame, 713 deduced amino acids residues with difference of 4 amino acid residues. The recombinant cells required 24 h culture time and a neutral pH for culture medium to produce compatible amount of CGTase compared to 72 h culture time and pH 10 for wild type. The recombinant and wild-type CGTases were purified by starch adsorption and phenyl sepharose column chromatography and characterized in parallel. Both enzymes showed molecular weight of 77 kDa and similar optimum pHs and temperatures with recombinant enzyme showing broader range. There were some significant difference in pH, temperature stability and kinetic parameters. The presence of high starch concentration resulted in higher thermostability in recombinant enzyme than the wild type. The recombinant enzyme was more stable at higher temperature and lower pH, with lower $K_m$ for coupling reaction using cellobiose and cyclodextrins as substrates.
Especially, we mainly dealt on the isolation of mold in the sample of the Korean products, Kock Ja. The kinds of the isolated strain are such as these, Rhizopus, Mucor, Aspergillus oryzae sp., aspergillus niger sp., Penicillum and Flungi Imperfecti. The action of the starch saccharification of isolated strain and the order of liquefying action are follows: The saccharification power was R-l>R-2>M-2> Kock Ja>M-1>O-2>N-1>O-4 The liquefying power was R-1, R-2>0-2>0-4>M-2, Kock Ja>M-1>N-1 We compared the pH's saccharification curve of each kind of strain with Kock Ja. The most suitable pH value of R-1, R-2 was the closest to pH 4. 0, close value with Kock Ja. The Rhizopus species on the saccharification action of each kind of strain in regard to raw wheat starch was stronger than other kinds of strain. We think that to generalize the above result, the Rhizopus species consists of an important strain of this Kock Ja, and is an important factor for the saccharification action of Kock Ja and the existence of Mucor species as well.
The changes on microstucture of recombinated gels with different ratio of amylose(A) and amylopectin(AP) which were isolated from nonwaxy rice starch were investigated by scanning electron microscope(SEM) and X-ray diffractometer. As the concentration of amylose was above 3%(1.08% of soluble amylose) in the amylose suspension, gel matrix became like a three-dimensional network. The microstructure of amylose gels showed a network including macroporous structure, but the higher the ratio of amylopectin content were, the firmer network were formed. In case of A/AP mixed gels(15%) with different amylose/amylopectin percent ratios ; 0/5, 5/10, 10/5, 15/0%, as the storage time of gels and the percent ratio of amylose content were increased, network was formed harder with thick films. While X-ray diffractograms of waxy rice starch which contained 100% amylopectin showed A type, those of purified amylose and amylopectin showed V type and amorphous patterns, respectively. Amylose(3%) gels added $2{\sim}3%$ amylopectin and A/AP mixed gels(15%) showed peak at $2{\theta}\;=\;17.0^{\circ}$which were shown B type crystallinity similar af retrograded starches. Also as the percent ratio of amylose content in mixed gels was increased, peak intensity wat increased.
A thermophilic microorganism, which is able to hydrolyze starch, was isolated from soil and compost in Korea. It was Gram-positive, rod-shaped, catalase positive, nonmotile, glucose and mannitol fermentative, xylose oxidative, and spore forming microorganism. It also has an ability to hydrolyze casein and gelatin. The color of colony was yellowish white. The sequence of 16S rDNA of strain 2719 showed 99.5% sequence homology with the sequence of 16S rDNA of Bacillus thermoglucosidasius. On the basis of biochemical and physiological properties and phylogenetic analysis, the isolated strain was named as Bacillus thermoglucosidasius 2719.
The water sorption isotherms of binary mixtures, prepared by corn starch and isolated soybean protein (ISP) or casein, were measured and analyzed. Simple equations to predict moisture content from knowledge of composition and water activity of the mixture were derived by applying Response Surface Analysis. Comparison between predicted and experimental moisture content for 13 combinations of corn starch-lSP mixture at the range of $a_w$ 0.25-0.87 resulted in a maximum error of only 6.06% and an absolute mean error of 2.60%, and for the mixture of corn starch-casein the error was -4.39% and 2.12%, respectively. The agreement between experimental and predicted water sorption isotherms was shown to be 'highly acceptable' for the binary mixtures of 50% corn starch-50% ISP and 50% corn starch -50% casein.
The water sorption isotherms of individual insoluble components of corn starch, isolated soybean protein (ISP) and casein and their binary mixtures of corn starch-lSP and corn starch-casein were measured and analyzed. BET monolayer values and Smith plot parameters from the results of sorption isotherms were calculated by mass balance concept . The comparisons between experimental and predicted values resulted in an error of 2.29% for equilibrium moisture content and an error of 2.95% in monolayer value for the mixture 50% corn starch-50% ISP. On the other hand , for the mixture 50% corn starch-50% casein the errors were 2.66% and-5.34%, respectively.
Some characteristics of two forms of glucoamylase (glucan 1 A-$\alpha$-glucosidase, EC 3. 2. I. 3) purified from Aspergillus coreanus NR 15-1 were investigated. The enzymes were produced on a solid, uncooked wheat bran medium of A. coreanus NR 15-1 isolated from traditional Korean Nuruk. Two forms of glucoamylase, GA-I and GA-II, were purified to homogenity after 5.8-fold and 9.6-fold purification, respectively, judged by disc- and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular mass of GA-I and GA-II were estimated to be 62 kDa and 90 kDa by Sephadex G-1OO gel filtration, and 64 kDa and 91 kDa by SDS-polyacrylarnide gel electrophoresis, respectively. The optimum temperatures of GA-I and GA-II were 60$^circ$C and 65$^circ$C, respectively, and the optimum pH was 4.0. The activation energy (Ea value) of GA-I and GA-II was 11.66 kcal/mol and 12.09 kcal/mol, respectively, and the apparent Michaelis constants (K_{m}) of GA-I and GA-II for soluble starch were found to be 3.57 mg/ml and 6.25 mg/ml, respectively. Both enzymes were activated by 1 mM Mn^{2+} and Cu^{2+}, but were completely inhibited by 1 mM Nbromosuccinimide. The GA-II was weakly inhibited by 1 mM p-CMB, dithiothreitol, EDTA, and pyridoxal 5-phosphate, but GA-I was not inhibited by those compounds. Both enzymes had significant ability to digest raw wheat starch and raw rice starch, and hydrolysis rates of raw wheat starch by GA-I and GA-II were 7.8- and 7.3-fold higher than with soluble starch, respectively.
The objective of this study was to determine the molecular/crystalline structures and phase transition properties of starches isolated from six rice cultivars grown in Korea. Apparent amylose content was highest in starch obtained from the Saemimyeon cultivar (30.8%) and lowest in that obtained from the Sheonhyangheukmi cultivar (20.3%). Starch from the Saemimyeon cultivar had a lower proportion of short chains (DP 6-12) and a the higher proportion of long chains (DP${\geq}37$) than that seen in other rice starches. Saemimyeon had relatively higher pasting temperature ($86.5^{\circ}C$), gelatinization temperature ($72.1^{\circ}C$) and gelatinization enthalpy (14.2 J/g) than these values found for other rice starches. The onset temperature and enthalpy for ice crystallization of rice starch ranged from $-27.1{\sim}-20.2^{\circ}C$ and 241.1~264.8 J/g, respectively. The ice melting enthalpy measured in excess water (67% water content) of rice starches was 282.4~310.1 J/g. Among the rice starches examined, starch obtained from Sheonhyangheukmi, with the lowest amylose content, showed the lowest glass transition temperature (${T_g}^{\prime}$).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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