Sanghvi, Gaurav V.;Koyani, Rina D.;Rajput, Kishore S.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권5호
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pp.470-476
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2011
A potent fungus for amylase production, Chrysosporium asperatum, was isolated from among 30 different cultures obtained from wood samples collected in the Junagadh forest, India. All of the isolated cultures were screened for their ability to produce amylase by submerged fermentation. Among the selected cultures, C. asperatum (Class Euascomycetes; Onygenales; Onygenaceae) gave maximum amylase production. In all of the different media tested, potato starch was found to be a good substrate for production of amylase enzyme at $30^{\circ}C$ and pH 5.0. Production of enzyme reached the maximum when a combination of starch and 2% xylose, and organic nitrogen (1% yeast extract) and ammonium sulfate were used as carbon and nitrogen sources, respectively. There was no significant effect of metal ions on enzyme activity. The enzyme was relatively stable at $30^{\circ}C$ for 20 min, and no inhibitory effect of $Ca^{+2}$ ions on amylase production was observed.
Gene encoding cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase), from thermotolerant Paenibacillus sp. T16 isolated from hot spring area in northern Thailand, was cloned and expressed in E. coli (JM109). The nucleotide sequences of both wild type and transformed CGTases consisted of 2139 bp open reading frame, 713 deduced amino acids residues with difference of 4 amino acid residues. The recombinant cells required 24 h culture time and a neutral pH for culture medium to produce compatible amount of CGTase compared to 72 h culture time and pH 10 for wild type. The recombinant and wild-type CGTases were purified by starch adsorption and phenyl sepharose column chromatography and characterized in parallel. Both enzymes showed molecular weight of 77 kDa and similar optimum pHs and temperatures with recombinant enzyme showing broader range. There were some significant difference in pH, temperature stability and kinetic parameters. The presence of high starch concentration resulted in higher thermostability in recombinant enzyme than the wild type. The recombinant enzyme was more stable at higher temperature and lower pH, with lower $K_m$ for coupling reaction using cellobiose and cyclodextrins as substrates.
Especially, we mainly dealt on the isolation of mold in the sample of the Korean products, Kock Ja. The kinds of the isolated strain are such as these, Rhizopus, Mucor, Aspergillus oryzae sp., aspergillus niger sp., Penicillum and Flungi Imperfecti. The action of the starch saccharification of isolated strain and the order of liquefying action are follows: The saccharification power was R-l>R-2>M-2> Kock Ja>M-1>O-2>N-1>O-4 The liquefying power was R-1, R-2>0-2>0-4>M-2, Kock Ja>M-1>N-1 We compared the pH's saccharification curve of each kind of strain with Kock Ja. The most suitable pH value of R-1, R-2 was the closest to pH 4. 0, close value with Kock Ja. The Rhizopus species on the saccharification action of each kind of strain in regard to raw wheat starch was stronger than other kinds of strain. We think that to generalize the above result, the Rhizopus species consists of an important strain of this Kock Ja, and is an important factor for the saccharification action of Kock Ja and the existence of Mucor species as well.
쌀전분으로부터 분리한 아밀로오스와 아밀로펙틴이겔을 형성할 수 있는 최저농도로 아밀로오스와 아밀로펙틴 혼합겔을 제조하여 주사전자현미경과 X-선 회절기를 이용하여 겔 구조를 관찰하였다. 겔을 형성할 수 있는 최저농도인 용해성 아밀로오스 1.08% 농도에 아밀로펙틴을 $1.5%{\sim}7%$ 첨가하면 겔 그물망구조가 잘 형성되었고, 아밀로펙틴을 2%와 3% 첨가한 겔은 저장에 따라 $2{\theta}\;=\;17.0^{\circ}$에서 피크가 커졌다. 15% 아밀로오스/아밀로펙틴 혼합겔을 저장했을 때 아밀로오스 함량이 높을수록 단단하고 안정된 그물망구조를 이루었으며 생전분에서의 겔형성 양상과는 달리 아밀로오스와 아밀로펙틴이 함께 겔메트릭스를 이루는데 참여하는 것으로 생각되었고, 아밀로오스 함량이 증가할수록 $2{\theta}\;=\;17.0^{\circ}$에서 피크의 크기와 결정강도는 커졌다.
호열성 미생물을 검토하기 위하여 전국 각지로부터 토양과 두엄을 채취하여 그로부터 호열성 미생물을 분리하였다. 토양과 두엄으로부터 분리된 호열성 미생물 1250여 균주를 선별하였고, 이들을 대상으로 미생물이 생산하는 효소 활성을 검토하여 호열성 전분 분해 효소를 생산하는 1주의 미생물을 확인하였다. 확인된 1주의 미생물을 strain 2719라 명명하였다. Strain 2719 균주는 형태학적으로 gram 양성 간균의 특징을 나타냈고, 균주의 표면은 매끄럽지 않았으며, 비교적 다양한 길이를 가지고 있었다. 또한 다른 gram 양성 간균들에 비해서 많은 수의 균사들이 각 균주들 사이에 복잡하게 얽혀있었다. 생화학적 특성을 확인한 결과 catalase 양성, glucose 발효, arabinose 발효, mannitol 발효, casein gelatin starch 가수분해의 특징을 가지고 있었으며, 이는 Bacillus sp.로 추정되었다. 생육 pH의 범위는 pH 6-pH 8범위에서 생육이 가능했으며, 생육 온도의 범위는 50-70${^{\circ}C}$였다. 16S rDNA sequence 분석결과 Bacillus thermoglucosidasius의 16S rDNA와 99.52%가 일치하였으나, sequence의 일부분이 다른 부분이 있고, 생육 특성에서 약간의 차이를 보였다. 또한 gene bank에 등록되어 있는 균주들의 16S rDNA sequence들과 비교하여도 일치하는 균주는 확인되지 않았다. 이와 같은 실험결과에 따라 2719 균주는 기존에 발표되지는 않았으나, Bacillus thermoglucosidasius와 매우 유사한 균주로 판단되어 Bacillus thermoglucosidasius 2719로 명명하였다.
옥수수전분과 분리대두단백 혹은 옥수수전분과 카제인으로 제조된 이상혼합물(二相混合物)의 수분흡수율 측정 분석 하였으며, 다중회귀분석법을 이용(利用) 혼합물(混合物)의 구성비와 수분활성도의 수치(數値)로부터 혼합물(混合物)의 수분함량을 예측가능케 하는 다중회귀방정식을 구하였다. 옥수수전분과 분리대두단백으로 구성된 13개의 실험구에서 수분함량 측정치(値)와 예측치(値)를 비교했을때 최대오차는 6.06%이었고, 오차의 절대치(値) 평균은 2.60%로 나타난다. 그리고 옥수수전분과 카제인으로 구성된 이상혼합물(二相混合物)은 최대오차 -4.39%, 오차의 절대치 평균은 단지 2.12%로 측정치(値)와 예측치(値) 거의 일치함을 보여 주었다. 또한 중량비(比) 50 : 50인 이상혼합물(二相混合物)의 수분흡습곡선을 비교 분석하였을 때도 측정한 흡습곡선과 예측한 흡습곡선 간(問)에는 거의 일치하는 것으로 나타났다.
이상혼합물(二相混合物)의 평형수분함량, 단분자충수분함량, Smith방정식의 절편 a와 기울기 b를 예측하고자 "성분의 함량 비례개념"을 이용하였다. 50 : 50인 옥수수전분과 분리대두단백의 이상혼합물(二相混合物)의 경우 평형수분함량은 절대오차평균이 2.29%이었으며, 단분자층수분함량은 2.95%, Smith 방정식의 a치(値)는 2. 15%, b치(値)는 0.51%의 오차를 나타내었다. 반면 50 : 50의 옥수수전분과 카제인으로 제조한 이상혼합물(二相混合物)은 평형수분함량은 2.66%, 단분자층수분함량은 -5.34%, a치(値)는 -0.80%, b치(値)는 단지 -2.27%의 오차를 보이고 있어 "성분의 함량비례 개념"에 의한 이상혼합물(二相混合物)의 수분흡습특성 예측은 가능한 것으로 나타났다.
Some characteristics of two forms of glucoamylase (glucan 1 A-$\alpha$-glucosidase, EC 3. 2. I. 3) purified from Aspergillus coreanus NR 15-1 were investigated. The enzymes were produced on a solid, uncooked wheat bran medium of A. coreanus NR 15-1 isolated from traditional Korean Nuruk. Two forms of glucoamylase, GA-I and GA-II, were purified to homogenity after 5.8-fold and 9.6-fold purification, respectively, judged by disc- and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular mass of GA-I and GA-II were estimated to be 62 kDa and 90 kDa by Sephadex G-1OO gel filtration, and 64 kDa and 91 kDa by SDS-polyacrylarnide gel electrophoresis, respectively. The optimum temperatures of GA-I and GA-II were 60$^circ$C and 65$^circ$C, respectively, and the optimum pH was 4.0. The activation energy (Ea value) of GA-I and GA-II was 11.66 kcal/mol and 12.09 kcal/mol, respectively, and the apparent Michaelis constants (K_{m}) of GA-I and GA-II for soluble starch were found to be 3.57 mg/ml and 6.25 mg/ml, respectively. Both enzymes were activated by 1 mM Mn^{2+} and Cu^{2+}, but were completely inhibited by 1 mM Nbromosuccinimide. The GA-II was weakly inhibited by 1 mM p-CMB, dithiothreitol, EDTA, and pyridoxal 5-phosphate, but GA-I was not inhibited by those compounds. Both enzymes had significant ability to digest raw wheat starch and raw rice starch, and hydrolysis rates of raw wheat starch by GA-I and GA-II were 7.8- and 7.3-fold higher than with soluble starch, respectively.
본 연구에서는 국내에서 육종된 쌀품종의 전분에 대한 분자 및 결정구조을 밝히고 이와 같은 결과들이 상전이 특성에 미치는 영향을 조사하였다. 새미면 전분은 아밀로스 함량이 가장 높았으며, 다른 쌀전분에 비해 상대적으로 아밀로펙틴의 짧은 사슬(DP 6-12)과 평균사슬길이, 치반점도와 최종점도, 호화온도와 엔탈피, 2차 상전이인 ${T_g}^{\prime}$이 유의적으로 높았으며, 반대로 최고점도와 강하점도, ice melting 온도와 엔탈피가 유의적으로 낮았다. 아밀로스 함량이 가장 낮은 선향흑미는 다른 전분에 비해 유의적으로 높은 ice melting 엔탈피를 나타냈고 ${T_g}^{\prime}$이 높았다. 결과적으로 쌀 전분의 상전이 특성은 분자 및 결정 구조에 큰 영향을 받는 것을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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